女性生殖道乳酸桿菌密度與陰道病分類的相關性

黃業亞，唐維政，孫鴻高，許丹妮，邱海平，潘方蝶

(海南醫學院第二附屬醫院東湖分院檢驗科，海南海口570203)

女性生殖道乳酸桿菌密度與陰道病分類的相關性

黃業亞，唐維政，孫鴻高，許丹妮，邱海平，潘方蝶

(海南醫學院第二附屬醫院東湖分院檢驗科，海南海口570203)

目的探討女性生殖道乳酸桿菌和細菌性陰道病(BV)、真菌性陰道病(VVC)及滴蟲性陰道病(TV)的相關性。方法選取2016年12月至2017年5月在海南醫學院第二附屬醫院東湖分院門診就診患者中BV感染者136例、VVC感染者126例及TV感染者100例作為觀察組，體檢健康人員130例作為對照組。應用陰道微生態圖象診斷系統檢測陰道分泌物中細菌種類和密度，干化學檢測pH、H2O2、白細胞酶和唾液腺酶，將觀察組中的BV、VVC及TV患者和對照組健康者中陰道分必物的乳酸桿菌含量及相關指標進行比較。結果BV、VVC及TV患者的pH值分別為(4.8±0.3)、(4.4±0.3)和(5.4±0.4)，均明顯高于對照組的(4.1±0.2)，差異均有統計學意義(P＜0.05)；BV、VVC及TV患者的Nugent評分分別為(7.0±1)分、(3.0±1)分和(4.0±1)分，均顯著高于對照組的(0.2±0.1)，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)；對照組的H2O2陰性率為100%(130/130)，BV組為5.3%(8/136)，VVC組為18.3%(23/130)，TV組為9%(9/100)，各觀察組患者的H2O2陰性率明顯低于對照組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)；觀察組患者的乳酸桿菌密度明顯低于對照組，陰道加特納菌/普雷沃菌明顯高于對照組，經Ridit分析，差異具有統計學意義(P＜0.01)。結論乳酸桿菌的缺失或降低是陰道疾病的重要因素，治療過程中，乳酸桿菌數量的恢復可作為評估療效的標準之一。

陰道微生態；乳酸桿菌；細菌性陰道炎；真菌性陰道炎；滴蟲性陰道病

細菌性陰道病(BV)、真菌性陰道病(VVC)及滴蟲性陰道病(TV)是婦科的常見病、多發病。長期以來人們的治療方法是殺菌殺蟲，忽視了陰道微生態的建立，常造成疾病的復發和再感染。自20世紀70年代，加拿大泌尿科醫師Andrew Bruc首次提出恢復陰道乳酸桿菌的含量可作為防止陰道感染的概念后，醫學界逐漸重視對陰道微生態的重建。近幾年對陰道微生態的重建和生殖道疾病防治關系有不少的報道，但多數都是單獨報道BV或VVC治療過程中如何建立陰道微生態平衡，而對于乳酸桿菌和上述幾種陰道病的關系鮮有報道。本文回顧性分析近年來在我院婦科門診就診且應用陰道微生態系統檢測的患者的臨床資料，以探討其乳酸桿菌和BV、VVC及TV的相關性，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年12月至2017年5月在海南醫學院第二附屬醫院東湖分院門診就診患者中BV感染者136例、VVC感染者126例及TV感染100例作為觀察組，體檢健康人員130例作為對照組。入選標準：(1)具有臨床癥狀；(2)經微生態檢測系統檢測發現滴蟲、真菌或大量的加特納菌/普雷沃菌；(3)半年前未經過抗菌、抗滴蟲、抗真菌治療者。排除標準：(1)VVC及TV、VVC和BV、TV及BV混合感染者；(2)糖尿病、HIV感染及其他免疫系統疾病患者。依據BV、VVC和TV感染者分為3個觀察組。對照組和3個觀察組之間的年齡及未經用藥時間比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1。

表1 對照組和3個觀察組的年齡和之前未用藥時間比較(x-±s)

1.2 儀器設備山東仕達思生物產業有限公司生產的陰道微生態檢測系統。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本處理分別取患者陰道分泌物涂片涼干，革蘭氏染色油鏡鏡檢，剩下的分泌物加8滴稀釋液充分洗脫，取一滴作濕片檢測。留取洗脫液進行干化學測定(pH、H2O2、白細胞酶、唾液腺酶測定)。

1.3.2 Nugent革蘭氏染色評分以油鏡觀察，按以下形態區分，革蘭氏陽性大桿菌(乳酸桿菌)、革蘭氏染色不定的小桿菌(陰道加特納菌)、革蘭氏染色不定的彎曲桿菌(動彎桿菌)。根據每個油鏡視野細菌數量，分別用+～++++表示(+：1～9個；++:10～99個；+++：100～1 000個；++++：細菌聚集成團或密集覆蓋黏膜上皮細胞)。根據乳酸桿菌、加納菌/普雷沃菌、動彎桿菌的密度按表2進行Nugent評分(總積分=乳酸桿菌+加特納菌和普沃菌+動彎桿菌評分)。

表2 Nugent革蘭氏染色評分標準

1.3.3 干化學測定將洗脫液滴至干化學測試板中，置微生態測定儀15 min后可測出結果。pH在3.8～4.5、H2O2≥2 μmol/L(陰性)說明乳酸桿菌功能正常，為優勢種群。白細胞酶陽性說明有白細胞，或白細胞溶解釋放出酶。唾液酸酶陽性說明有加特納菌/普雷沃菌。

1.4 統計學方法應用SPSS19統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，各組各類菌群密度分布情況比較采用Ridit分析，均以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對照組和各觀察組患者的Nugent革蘭氏染色評分和pH值比較各患者組患者的pH值均高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；各觀察組患者的Nugent革蘭氏染色評分均顯著高于對照組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表3。

表3 對照組與各觀察組患者的Nugent革蘭氏染色評分和pH值比較(x-±s)

2.2 對照組和各觀察組患者的H2O2比較對照組患者H2O2陰性率為100%(130/130)，BV組為5.3%(8/136)，VVC組為18.3%(23/130)，TV組為9%(9/100)，各觀察組患者的H2O2陰性率明顯低于對照組，差異均具有顯著統計學意義(χ2=233.8、195.7、177.8，P＜0.01)。

2.3 各觀察組患者和對照組乳酸桿菌、加特納菌/普雷沃菌、動彎桿菌密集度比較BV、TV及VVC組患者的乳酸桿菌密度均顯著低于對照組，差異均有顯著統計學意義(u＞2.58，P＜0.01)；BV、TV及VVC組患者的加特納菌/普雷沃菌密度均顯著高于對照組，差異均有顯著統計學意義(u＞2.58，P＜0.01)；BV、TV及VVC組患者的動彎桿菌密度與對照組比較差異均無統計學意義(u＜1.96，P＞0.05)，見表4。

表4 各觀察組患者和對照組的乳酸桿菌、加特納菌/普雷沃菌、動彎桿菌密集度比較[例(%)]

3 討論

隨著醫學的發展，疾病的診斷、治療和療效的評估逐步從單一因素、局部考慮向多因素和系統性評估轉變。中華醫學會婦產科分會近10年來對陰道性疾病的診治和療效已逐步摒棄了“單一以白細胞升高診斷炎癥”的觀念。而是從陰道微生態的角度診斷和治療陰道炎癥并及進行療效評估。檢驗科也從經典的霉菌加特納菌或滴蟲檢測，發展為陰道微生態系統檢測。微生態系統不僅可以動態檢測陰道菌群的密度、微生物多樣性、優勢菌群、炎性反應等，而且還可以檢測陰道pH、H2O2、唾液酸酶、白細胞酯酶等多個指標，可以向臨床提供全面的微生態信息。

本文通過陰道微生態系統檢測表明BV組陰道分必物乳酸桿菌密度分布明顯低于對照組，經Ridit分析差異有顯著統計學意義(P＜0.01)。由于乳酸桿菌減少，產H2O2的量也顯著下降，同時pH值明顯升高。有研究證明，乳酸桿菌的抗菌性能與擴散抑制物質，主要是乳酸有關；乳酸桿菌產生的H2O2及其他微生物因子，可抑制和殺滅其他細菌增殖[1]。一旦乳酸桿菌在陰道菌群中失去優勢，其他菌群就會過度生長，造成陰道菌群的失調，引發疾病[2]。從BV組的Nugent的評分和加特納菌/普雷沃菌的的密度比較和pH的結果也充分說明這一點，而BV組患者的動彎桿菌的密集度和對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)，可見本地區細菌性陰道炎主要是由加特納菌/普雷沃菌引起，而彎動桿菌感染少見。VVC組患者陰道分泌物乳酸桿菌密度分布和對照組相比也低于對照組，Nugent評分和pH值均高于對照組，說明真菌感染時陰道乳酸桿菌處于低水平狀態。肖冰冰等[2]報道VVC患者陰道微生態乳酸桿菌可正常，亦可減少或消失。本文也發現有VVB患者陰道分必物乳酸桿菌正常，pH值正常，H2O2下降。但這類患者不多，VVC患者還是乳酸桿減少，pH升高，H2O2陽性為多數。TV患者陰道分泌物乳酸桿菌密度分布和對照組相比明顯低于對照組，Nugent評分pH值高于對照組。上述陰道疾患者重陰道分泌物的乳酸桿菌下降程度、pH高低及Nugen評分評分有所不同，但和對照組相比都有顯著差異。另外我們還發現，有些鏡檢標本乳酸桿菌含量達到60%～70%，但干化學測定H2O2陽性，有些沒發現乳桿菌的標本卻H2O2陰性。因此乳酸桿菌不一定是H2O2陰性，H2O2并非是乳酸桿菌產生，診斷時要根據具體情況作出判斷。

綜上所述，乳桿菌是維持陰道微生態平衡的重要菌群，其通過粘附定植、免疫調節、分泌細菌素、類細菌素物質等多種途徑抑制其他微生物的生長。同時乳酸桿菌自身的生存也容易受到如陰道微環境、性生活等多種因素的影響，導致陰道微生態失衡，誘發多種婦科疾病[3]。在治療這些疾病的過程中常用殺菌和殺蟲的藥物，在殺菌殺蟲的同時也殺滅了乳酸桿菌，使陰道微生態失去了平衡，很容易造成復發或再感染。據有關文獻報道經過抗菌治療后用乳菌桿菌治療重建陰道微生態平衡，復發率遠遠低于單一的抗生素治療[4-7]。因些在日常生活和疾病的治療過程中都要注意建立陰道微生態的正常平衡，以提高療效，降低復發率。

[1]李娜,邱曉紅.乳酸桿菌與陰道微生態關系的研究進展[J].凝難病雜志,2016,15(4):432-435.

[2]肖冰冰,劉朝暉.陰道微生態評價在陰道炎中的應用[J].中國婦產科臨床雜志,2016,17(6):483-485

[3]劉杰,寧玉梅.乳桿菌在陰道微生態中生存狀態的研究進展[J].中國微生態雜志,2016,28(6):733-736.

[4]陳利輝.重建陰道微生態對陰道假絲酵母菌治療效果觀察[J].醫學理論與實踐,2015,28(13):1770-1771.

[5]趙軍,董艷.乳酸桿菌與陰道微生態在治療陰道炎中的作用[J].臨床醫藥文獻雜志,2016,3(21):4310-4311.

[6]鄭晶晶,王菲,于聰祥,等.乳桿菌制劑及恢復陰道微生態平衡在細菌性陰道病治療中的應用研究[J].現代生物醫學進展,2016,36(13):7051-7053.

[7]許愛華,張利,劉紅梅.小劑量甲硝唑聯合乳酸桿菌治療妊娠期滴蟲性陰道病療效觀察[J].河北醫藥,2014,16(21):3284-3286.

Correlation of lactobacilli and bacterial vaginosis,vulvovaglnal candidiasis and trichomonal vaginitis in female reproductive tract.

HUANG Ya-ye,TANG Wei-zheng,SUN Hong-gao,XU Dan-ni,QIU Hai-ping,PAN Fang-die.Department of Clinical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou 570203,Hainan,CHINA

ObjectiveTo evaluate the correlation of lactobacilli with bacterial vaginosis(BV),vulvovaglnal candidiasis(VVC)and trichomonal vaginitis(TV)in female reproductive tract.MethodsGynecological outpatients in our hospital from December 2016 to May 2017 were enrolled in the study,including 136 BV patients,126 VVC patients,and 100 TV patients.Besides,130 healthy subjects for physical examination were selected as the control group.Vaginal microecology diagnostic system was used to detect the bacteria and the density of bacteria in vaginal discharge.Dry chemistry method was used to detect pH,H2O2,leukocyte enzymes and salivary gland enzymes.The levels of lactobacilli in BV patients,VVC patients,TV patients,and the control group were compared.ResultsThe pH values were(4.8±0.3)in BV patients,(4.4±0.3)in VVC patients,and(5.4±0.4)in TV patients,which were significantly higher than(4.1±0.2)in control group(P＜0.05).The Nugent scores were(7.0±1)in BV patients,(3.0±1)in VVC patients and(4.0±1)in TV patients,which were significantly higher than(0.2±0.1)in the control group(P＜0.05).The H2O2negative rates were 5.3%(8/136)in BV patients,18.3%(23/130)in VVC patients,and 9%(9/100)in TV patients,which were significantly lower than 100%(130/130)in the control group(P＜0.01).The density of lactobacillus in BV,VVC,TV patients was significantly lower than that in the control group,and that ofGardnerella vaginalis/Prevotella intermediuswas significantly higher than that of the control group(P＜0.05).ConclusionLoss or reduction of lactobacillus is an important factor in vaginal diseases during the treatment process,and the recovery of the number of lactobacilli can be used as one of the criteria to evaluate the efficacy.

Vaginal microecology;Lactobacilli;Bacterial vaginitis(BV);Vulvovaglnal candidiasis(VVC);Trichomonal vaginitis(TV)

R711.73

A

1003—6350（2017）18—3001—04

2017-07-17)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.18.022

黃業亞。E-mail：huangyeya@126.com