五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴對糖尿病心肌病大鼠心率變異性及心肌細(xì)胞凋亡的影響

肖鳳英 崔金濤 張壓西 賀 勁 李 敏 張 軍

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430014)

五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴對糖尿病心肌病大鼠心率變異性及心肌細(xì)胞凋亡的影響

肖鳳英 崔金濤 張壓西 賀 勁 李 敏 張 軍

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430014)

目的觀察五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴對糖尿病心肌病(DCM)大鼠心率變異性(HRV)及心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法50只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、五參組、內(nèi)關(guān)組和五參+內(nèi)關(guān)組各10只，采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立DCM大鼠模型，治療8 w后，對HRV進(jìn)行對照分析，處死大鼠，迅速取出心肌，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)檢測采用TUNEL法測定。結(jié)果與正常組比較，模型組各HRV時(shí)域指標(biāo)〔24 h平均值的標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)、RR間期平均值標(biāo)準(zhǔn)差(SDANN)、HRVindex、相鄰RR間期值的均方根(RMSDNN)、相鄰R-R間期>50 ms的個(gè)數(shù)點(diǎn)總竇性心搏個(gè)數(shù)的百分比(PNN50)〕及各HRV頻域指標(biāo)〔總功率、極低頻(VLF)、低頻(LF)、高頻(HF)〕均明顯降低(P<0.05)，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，五參組時(shí)域指標(biāo)RMSDNN及頻域指標(biāo)HF顯著升高(P<0.05)，內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組各指標(biāo)均顯著升高(P<0.05)，內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯降低(P<0.01)；與內(nèi)關(guān)組比較，五參+內(nèi)關(guān)組各HRV指標(biāo)顯著升高(P<0.05)。結(jié)論五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴治療DCM大鼠能明顯提高大鼠HRV各指標(biāo)，且能顯著降低心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，心肌細(xì)胞凋亡的改善可能是提高HRV的機(jī)制之一。

糖尿病心肌病；五參口服液；內(nèi)關(guān)穴；心率變異性；心肌細(xì)胞凋亡

糖尿病性心肌病(DCM)是引起糖尿病患者最終死亡的常見慢性心血管并發(fā)癥，臨床上缺乏理想有效的治療手段。研究表明〔1〕，DCM心臟自主神經(jīng)功能紊亂(CAN)，在所有反映交感活性的心率變異性(HRV)參數(shù)變化上具有一致性，表現(xiàn)為時(shí)域指標(biāo)及頻域指標(biāo)降低。由此，本文旨在通過觀察第五批名老中醫(yī)崔金濤教授經(jīng)驗(yàn)方五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴治療DCM對大鼠HRV及心肌細(xì)胞凋亡的影響，并對其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠70只，體質(zhì)量(160～180)g，由華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供(湖北省實(shí)驗(yàn)動物管理委員會，合格證001號，環(huán)境設(shè)施合格證028號)。實(shí)驗(yàn)動物分組飼養(yǎng)，飼以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。分籠喂養(yǎng)，自由飲食攝水，自然晝夜光線照明，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)通風(fēng)良好，溫度保持在16℃～20℃，相對濕度30%～80%。 試驗(yàn)前用快速血糖儀檢查血糖，剔除血糖異常大鼠。

1.2試劑 鏈脲佐菌素(STZ，Sigma公司,批號S01301178);血糖試紙(美國雅培公司,批號0701051),細(xì)胞凋亡檢測(TUNEL)試劑盒。

1.3模型制備 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，隨機(jī)取大鼠50只，參考文獻(xiàn)〔2〕方法建立DCM大鼠模型。造模成功后隨機(jī)分為模型組，五參組、內(nèi)關(guān)組和五參+內(nèi)關(guān)組，每組各10只，另10只為正常組。

1.4治療方法 內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組參照中國針灸學(xué)會實(shí)驗(yàn)針灸會制定的《動物針灸穴位圖譜》〔3〕，P6，H7和L14對應(yīng)選取內(nèi)關(guān)穴施予針刺。內(nèi)關(guān)位于大鼠腕橫紋正中上5 mm處，針剌深度約5 mm。造模同時(shí)分別針刺大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，大鼠穿自制鼠衣，用0.30 mm×15 mm華佗牌毫針直刺穿皮達(dá)筋間,捻轉(zhuǎn)1 min后,接HANS-200型電針治療儀,左右各接一電極,連續(xù)波,頻率2 Hz,強(qiáng)度1 mA,通電治療20 min,每日1次,共8 w。其他組行內(nèi)關(guān)穴假針刺，穴位的定位和消毒法同上,使用英國DONGBANGAcuPrime針灸器械有限公司的假針灸針(嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作),不銹鋼針同上,并采用以下刺激方法:針頭露出套管1 min,輕觸皮膚,開始記錄時(shí)間。留針時(shí),壓下針柄使針頭露出1 mm,輕觸皮膚,捻轉(zhuǎn)1 min后,接HANS-200型電針治療儀,左右各接一電極,連續(xù)波,頻率2 Hz,強(qiáng)度1 mA,通電治療20 min，每日1次,共8 w。五參組及五參+內(nèi)關(guān)組給予大鼠1支五參口服液(由西洋參、北沙參、南沙參、三七、丹參、降香、苦參等中藥組成)灌胃，每日1次，其他組給予等量的生理鹽水灌胃，共8 w。

1.5HRV指標(biāo) 治療8 w后，出針1 min后，各組進(jìn)行HRV取樣,用MODEL No.7303050心電裝置,通過RM-86型八導(dǎo)生理記錄儀及SKY-A4 生物信號處理系統(tǒng),記錄停針即刻的心電圖波形。并輸入功能學(xué)科實(shí)驗(yàn)軟件包,分析計(jì)算各組大鼠停針即刻各HRV時(shí)域指標(biāo)〔24 h平均值的標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)、RR間期平均值標(biāo)準(zhǔn)差(SDANN)、HRVindex、相鄰RR間期差值的均方根(RMSDNN)、相鄰R-R間期>50 ms的個(gè)數(shù)占總竇性心搏個(gè)數(shù)的百分比(PNN50)〕及頻域指標(biāo)〔總功率、極低頻(VLF)、低頻(LF)、高頻(HF)〕的情況。采樣過程中避免干擾,將大鼠用25%氨基甲酸乙酯(4 ml/kg)麻醉,固定四肢,采集V1心電信號,避免各種影響自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)活動的因素。

1.6心肌細(xì)胞凋亡指數(shù) 隨后處死大鼠，迅速取出心肌，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)檢測采用TUNEL法測定。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1各組HRV時(shí)域指標(biāo)的比較 與正常組比較，模型組SDNN、SDANN、HRVindex、RMSDNN、PNN50均明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，五參組RMSDNN有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組各HRV時(shí)域指標(biāo)顯著升高(P<0.05或P<0.01)；與內(nèi)關(guān)組比，五參+內(nèi)關(guān)組各HRV時(shí)域指標(biāo)顯著升高(P<0.05)。見表1。

表1 各組治療后HRV時(shí)域指標(biāo)的比較

與正常組比較:1)P<0.05;與模型組比較:2)P<0.05，3)P<0.01；與內(nèi)關(guān)組比較:4)P<0.05；下表同

2.2各組HRV頻域指標(biāo)的比較 與正常組比較，模型組各HRV頻域指標(biāo)(總功率、VLF、LF、HF)均明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，五參組HF指標(biāo)顯著升高(P<0.05)，內(nèi)關(guān)組及五參+內(nèi)關(guān)組各頻域指標(biāo)均顯著升高(P<0.05或P<0.01)；與內(nèi)關(guān)組比較，五參+內(nèi)關(guān)組各HRV頻域指標(biāo)顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 各組治療后HRV頻域指標(biāo)的比較

2.3各組心肌凋亡指數(shù)的比較 與正常組(0.15±0.02)比較，模型組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(0.53±0.04)明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，內(nèi)關(guān)組(0.34±0.21)及五參+內(nèi)關(guān)組心肌凋亡指數(shù)(0.30±0.17)顯著降低(P<0.01)；五參組為0.49±0.36。

3 討 論

心臟自主神經(jīng)病變是引起DCM患者發(fā)生各種心律失常的重要原因，而HRV是國際上公認(rèn)的反映心臟自主神經(jīng)功能狀態(tài)量化指標(biāo)〔4〕。在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展過程中,細(xì)胞凋亡起著重要作用〔5〕。心肌細(xì)胞的損傷致使心臟傳入與傳出神經(jīng)纖維受損，致使心臟HRV降低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，五參口服液聯(lián)合電針內(nèi)關(guān)穴治療DCM，明顯改善了心肌缺血狀態(tài)，增強(qiáng)了心肌細(xì)胞營養(yǎng)，改善了心肌細(xì)胞凋亡，由此修復(fù)了心臟傳入及傳出神經(jīng)纖維，提高HRV指標(biāo)，獲得較好的臨床療效。

DCM病程長，后期常表現(xiàn)為氣陰兩虛證，經(jīng)典方五參口服液由西洋參、北沙參、南沙參、丹參、苦參、三七、降香等中藥組成，緊扣其病因病機(jī)辨證論治，西洋參補(bǔ)氣滋陰清熱，為治療氣陰兩虛之要藥，藥理作用能抗心律失常、增加胰島素敏感性及降血糖〔6〕。南北沙參養(yǎng)陰生津，北沙參水浸液在低濃度時(shí)，能夠加強(qiáng)離體蟾蜍心臟的收縮，濃度高時(shí)，則抑制直至心室停博〔7〕。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參改善射血分?jǐn)?shù)、減少細(xì)胞凋亡方面的作用明顯。苦參清心瀉火，滌痰化濁，苦參中主要成分苦參堿及金雀花堿，具有“奎尼丁樣效應(yīng)”能降低心肌收縮力、延緩房性傳導(dǎo)及降低自律性等作用，在實(shí)驗(yàn)篩選抗心律失常植物藥過程中，苦參作為心悸的專用藥之一應(yīng)用于臨床〔8〕，三七具有抗血小板集聚和溶栓的作用，能夠減慢心率，對各種原因引起的心率失常都有保護(hù)作用〔7〕;降香所含黃檀素有微弱的抗凝作用，能明顯增強(qiáng)冠狀動脈血流量，減慢心率，輕度增加心跳振幅，而不會引起心律不齊〔9〕;另外，DCM屬于祖國醫(yī)學(xué)消渴心病范疇，歸為手厥陰心包經(jīng)。手厥陰心包經(jīng)與心臟在生理病理上有著密切的聯(lián)系。歷代醫(yī)家臨床實(shí)踐表明，當(dāng)心臟發(fā)生疾病時(shí)，多取手厥陰心包經(jīng)的穴位進(jìn)行治療。葉向榮等〔10〕指出，電針內(nèi)關(guān)穴可以促進(jìn)缺血性心肌恢復(fù)。

1劉化芋，胡志耕.氣陰兩虛型糖尿病心率變異性及 SCL-90的觀察分析〔J〕 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2006;4(12)：1040-2.

2張春虹,臧偉進(jìn),徐 靜.建立糖尿病心肌病動物模型方法的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.衛(wèi)生研究，2006;35(6)：706-8.

3華興邦.大鼠穴位圖譜的研制〔J〕.實(shí)驗(yàn)動物與動物實(shí)驗(yàn),1991;(1):1-5.

4中華心血管病雜志編委會心率變異性對策專題組.心率變異性檢測臨床應(yīng)用的建議〔J〕.中華心血管病雜志，1998;26(4)：252-5.

5陳 青.糖尿病及其慢性并發(fā)癥與細(xì)胞凋亡〔J〕.國外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌學(xué)分冊,2001;21(5):236-9.

6張春鳳，于 敏，歐陽雪琴，等.西洋參及其提取物降血糖作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國中醫(yī)藥科技，2005;12(6)：353-4.

7崔金濤.三七對心血管疾病的防治作用〔J〕.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，1999;19(1)：36-8.

8高學(xué)敏，顏正華，張延模，等.中藥學(xué)〔M〕.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2002：35-6.

9江蘇省新醫(yī)學(xué)院.中國中藥大辭典〔M〕.上海:上海人民出版社，1977:1560-5.

10葉向榮，張素芬.電針“內(nèi)關(guān)”、“足三里”對家兔紅細(xì)胞膜流動性的影響〔J〕.針刺研究，1992;17(1):42-4.

〔2016-03-30修回〕

(編輯 苑云杰/王一涵)

R587.1

A

1005-9202(2017)19-4737-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.020

武漢市衛(wèi)生局項(xiàng)目(No.WZ11C06)

肖鳳英(1974-)，女，副主任醫(yī)師，在讀博士，主要從事2型糖尿病并心血管病變研究。