結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)及臨床意義

楊立平 李曉峰 秦 偉 戴 勇 黨寶寶 楊生虎 韓 云 耿興隆 董 晉

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腹部腔鏡外科，青海 西寧 810001)

結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)及臨床意義

楊立平 李曉峰 秦 偉 戴 勇 黨寶寶 楊生虎 韓 云 耿興隆 董 晉

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腹部腔鏡外科，青海 西寧 810001)

目的探討結(jié)直腸癌組織中凋亡抑制基因Survivin、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、nm23-H1及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)及臨床意義。方法選擇手術(shù)切除的結(jié)直腸癌患者組織標(biāo)本150例，另選擇正常結(jié)直腸組織標(biāo)本77例作為對(duì)照，采用免疫組化SP法檢測(cè)其Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF陽(yáng)性表達(dá)情況，分析結(jié)直腸癌組織Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果結(jié)直腸癌組織中，Survivin、MMP-2、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常結(jié)直腸組織，而nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常結(jié)直腸組織(P<0.05)；Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤原發(fā)部位、腫瘤直徑、病理類(lèi)型無(wú)關(guān)(P>0.05)，與浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)(P<0.05)。結(jié)論Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF參與了結(jié)直腸癌的發(fā)病及進(jìn)展過(guò)程，聯(lián)合檢測(cè)有助于了解浸潤(rùn)情況，辨別腫瘤分期、是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及判斷預(yù)后。

結(jié)直腸癌；Survivin；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；nm23-H1；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

惡性腫瘤的形成與發(fā)展與血管形成、腫瘤細(xì)胞克隆增殖及腫瘤凋亡抑制等有關(guān)〔1〕。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，具有腫瘤特異性；基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及侵襲等密切相關(guān)；nm23-H1具有核苷二磷酸激酶活性，通過(guò)影響微管解聚及G蛋白介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)通路，參與腫瘤發(fā)病及進(jìn)展過(guò)程；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)又稱(chēng)為血管通透因子，通過(guò)在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生參與腫瘤發(fā)病及進(jìn)展〔2〕。本文探討結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)情況。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇2013年1月至2015年10月經(jīng)青海大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切除的結(jié)直腸癌患者組織標(biāo)本150例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)術(shù)前活檢或術(shù)后病理證實(shí)為結(jié)直腸癌；(2)術(shù)前無(wú)放、化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)后生存期<12個(gè)月；(2)術(shù)后脫落病例及隨訪(fǎng)時(shí)間<12個(gè)月。其中男94例，女56例；年齡32～87〔平均(53.76±7.68)〕歲；腫瘤部位：結(jié)腸77例，直腸73例；根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟制訂的第7版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)〔3〕，Ⅰ期25例，Ⅱ期39例，Ⅲ期63例，IV期23例；病理類(lèi)型：管狀腺癌86例，乳頭狀腺癌45例，黏液細(xì)胞癌19例；分化程度〔4〕：高分化37例，中分化63例，低分化50例；腫瘤直徑≤5 cm 59例，>5 cm 91例，浸潤(rùn)深度：T1～T3 66例，T4 84例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移74例。另選擇本院同期收集的正常結(jié)直腸組織標(biāo)本77例作對(duì)照，男48例，女29例；年齡30～81〔平均(52.08±8.43)〕歲。兩組性別構(gòu)成、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 所有標(biāo)本采用10%的中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片(厚度4 μm)，免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶法(SP)染色。鼠抗人Survivin單克隆抗體、兔抗人MMP-2單克隆抗體、兔抗人nm23-H1單克隆抗體及兔抗人VEGF多克隆抗體均購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz公司，二氨基聯(lián)苯胺(DBA)顯色試劑盒及SP試劑盒均購(gòu)于北京天根生化科技有限公司。以本實(shí)驗(yàn)室自行配制磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對(duì)照，用已知標(biāo)志物的陽(yáng)性組織切片為陽(yáng)性對(duì)照，具體檢測(cè)操作步驟嚴(yán)格按照所用試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行。陽(yáng)性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：Survivin定位于細(xì)胞核，MMP-2、nm23-H1及VEGF定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)少量著色顆粒及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，在高倍鏡(×200)下隨機(jī)取10個(gè)視野進(jìn)行觀察，若陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性，≥10%的為陽(yáng)性。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較結(jié)直腸癌組織與正常結(jié)直腸組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率。(2)分析結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系：包括性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理類(lèi)型、臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征的關(guān)系。(3)分析結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系：術(shù)后隨訪(fǎng)12～48個(gè)月，比較末次隨訪(fǎng)時(shí)Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)情況與生存率的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、方差分析。

2 結(jié) 果

2.1免疫組化檢測(cè)結(jié)果 與正常結(jié)直腸組織比較，結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率均升高，而nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率降低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2各檢測(cè)指標(biāo)的表達(dá)與結(jié)直腸癌病理特征的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理類(lèi)型等無(wú)關(guān)(P>0.05)與浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3各指標(biāo)表達(dá)與生存率的關(guān)系 150例結(jié)直腸癌患者術(shù)后均獲得隨訪(fǎng)，無(wú)脫落病例，隨訪(fǎng)成功率100.00%，末次隨訪(fǎng)時(shí)死亡率為20.67%(31/150)，生存率79.33%(119/150)，術(shù)后生存率與Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表1 結(jié)直腸癌與正常結(jié)直腸組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)情況〔n(%)〕

表2 結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系〔n(%)〕

表3 結(jié)直腸癌患者Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

目前，關(guān)于結(jié)直腸癌的發(fā)病原因尚不十分明確，可能與結(jié)直腸肉息、慢性潰瘍性結(jié)腸炎、血吸蟲(chóng)病等癌前病變和飲食習(xí)慣(高脂肪飲食發(fā)病率高)、遺傳等因素有關(guān)。研究指出，結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與多種生物學(xué)指標(biāo)密切相關(guān)〔5〕。本文探討結(jié)直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達(dá)及臨床意義。Survivin在惡性腫瘤組織中的作用機(jī)制尚不十分清楚，通常認(rèn)為其通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡參與腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程，其具體途徑可能包括兩條：一是抑制凋亡終末效應(yīng)酶Caspase-3 和Caspase-7活性，從而阻斷各種刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程；二是與周期蛋白激酶(CDK4)結(jié)合，使CDK2/cyclin-E激活和核糖體磷酸化啟動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入周期加快了G1/S期的轉(zhuǎn)換，阻斷凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路〔6〕。MMP-2一方面可降解基底膜中的Ⅳ型膠原，另一方面能分解多種重要活性分子結(jié)合蛋白，導(dǎo)致活性分子游離，從而破壞癌細(xì)胞浸潤(rùn)的物理屏障〔7〕。nm23-H1是得發(fā)現(xiàn)的首個(gè)人類(lèi)nm23基因，定位與人17q21-22，由5個(gè)外顯因子和4個(gè)內(nèi)含因子構(gòu)成，全長(zhǎng)8.5 kb，編碼區(qū)有533個(gè)核苷酸，分子量17 kDa，具有核苷二磷酸激酶、組氨酸蛋白激酶活性和絲氨酸自身磷酸化作用，通過(guò)與相關(guān)基因的相互作用參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，參與腫瘤增殖、分化及轉(zhuǎn)移過(guò)程〔8〕。VEGF又稱(chēng)為血管通透因子，位于6p21.3，由8個(gè)外顯因子和7個(gè)內(nèi)含因子構(gòu)成，全長(zhǎng)14 kb，具有促進(jìn)新血管形成和增強(qiáng)血管通透性的雙重功能，而腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移均依賴(lài)于新血管的形成，因此認(rèn)為VEGF在腫瘤代謝及轉(zhuǎn)移中扮演了重要角色〔9〕。本研究結(jié)果提示Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程。分析原因可能為nm23-H1表達(dá)水平降低可能增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲能力和腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，VEGF高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤血管及淋巴管增多，從而加速腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移〔10〕。郭穎等〔11〕的研究認(rèn)為，MMP-2在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中有重要作用，是惡性侵襲性腫瘤的一個(gè)敏感指標(biāo)，本研究與之基本相符。另外本研究結(jié)果提示通過(guò)檢查Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF表達(dá)有助于判斷腫瘤浸潤(rùn)情況、惡性程度，了解是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，評(píng)估預(yù)后生存率。

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〔2016-12-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

R73

A

1005-9202(2017)19-4819-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.058

李曉峰(1972-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事普外研究。

楊立平(1976-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事普外研究。