T淋巴細胞亞群及維生素D水平與衰老的關系

寧 芳 陳發秀 梅 洵 邱元芝 胡 堅

(江西省人民醫院一部，江西 南昌 330006)

T淋巴細胞亞群及維生素D水平與衰老的關系

寧 芳 陳發秀 梅 洵 邱元芝 胡 堅

(江西省人民醫院一部，江西 南昌 330006)

目的探討隨年齡增長T淋巴細胞表型、血清25-羥維生素D〔25-(OH)D〕水平變化的規律。方法將216例健康體檢對象按年齡分成3組，組1為非老年組(18～60歲)85例，組2為非高齡老年組(61～80歲)76例，組3為高齡組(>80歲)55例；均采用四色免疫熒光標記流式細胞術分析外周血T淋巴細胞亞群、化學發光分析儀測定血25-(OH)D水平。結果①各年齡組外周血T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+都在正常范圍內，組間無統計學差異(P>0.05)。組1 CD3+明顯高于組2和組3(P<0.05)。②組1CD95陽性明顯高于組2和組3(P<0.05)。③組2血清25-(OH)D水平明顯低于組1和組3(P<0.05)。④血清25-(OH)D水平與年齡呈負相關(r=-0.021，P<0.05)，與T細胞亞群CD95呈正相關(r=0.17，P<0.05)。結論隨著年齡增長T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+變化不明顯，CD3+明顯下降，CD95表達水平逐漸增高，而血清25-(OH)D逐漸降低，提示D95、25-(OH)D有可能成為評價免疫衰老潛在的生物學標志物。

T淋巴細胞亞群；維生素D；免疫；衰老

衰老是指隨著年齡增長而產生的一系列生理和解剖學方面的變化，也是人體對內、外環境適應能力逐漸下降的表現，是機體代謝過程的必然階段。研究表明，機體免疫系統功能隨衰老而不斷下降〔1〕。近年研究發現維生素 D 不僅是鈣、磷代謝的重要生物調節因子，也是重要的免疫功能調節劑。維生素D缺乏與臨床多種疾病有關，尤其與老年病密切相關，而維生素D缺乏隨著年齡增長發生率增加。本文分析不同年齡階段人群的T淋巴細胞總T細胞(CD3+)、輔助T細胞(CD4+)、細胞毒T細胞(CD8+)、CD95(Fas/Apo-1)的分布及血清25-羥維生素D〔25-(OH)D〕水平，探討T淋巴細胞亞群和血清25-(OH)D水平與衰老之間的關系。

1 資料與方法

1.1研究對象 2010年1月至2013年12月到江西省人民醫院體檢中心體檢的人員216例，年齡18～93〔平均(60.4±34.6)〕歲，并據年齡分為：組1為非老年組(18～60歲)85例，男61例，女24例，平均年齡(42±15.8)歲；組2為非高齡老年組(61～80歲)76例，男53例，女23例，平均年齡(70.7±10.3)歲；組3為高齡老年組(>80歲)55例，男40例，女15例，平均年齡(85.7±5.6)歲。排除標準：嚴重器質性內分泌疾病，如甲狀腺疾病、甲狀旁腺功能亢進等；繼發性高血壓、惡性高血壓；嚴重肝、腎功能異常；心臟瓣膜病、心肌??；重度貧血、骨髓瘤等影響骨代謝疾病；急性感染、惡性腫瘤；腎切除或維持透析患者；半年內曾服用活性維生素D藥物、長期臥床、營養不良、半年內有骨折史、長期服用激素、免疫抑制劑等藥物者。

1.2一般資料收集 包括病史(高血壓、糖尿病、冠心病、惡性腫瘤、骨折等)，血常規，肝腎功能，血脂。

1.3T淋巴細胞亞群測定 抽取空腹靜脈血2 ml，采用三色或四色直接免疫熒光染色法染色，然后采用Becton Dickinson公司的流式細胞儀FACSCalibur和軟件CellQuest進行三色或四色熒光參數獲取及分析。所有測定都在相同的儀器設定下進行，每個樣品收集10 000個細胞的參數。表面分子的相對密度以平均熒光強度(MFI)表示。試劑購自Exalpha公司(美國)的CD4/CD8/CD3四色試劑，抗人Fas(CD95)-藻紅蛋白(PE)購自晶美生物工程有限公司，由專人嚴格按照說明書操作。

1.4血清25-(OH)D水平測定 抽取空腹靜脈血5 ml，采用羅氏Cobase601全自動化學發光分析儀測定，其試劑盒購自羅氏公司，由專人嚴格按照說明書操作。

1.5統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行非配對t檢驗、兩變量間相關性采用直線相關分析。

2 結 果

2.1各組外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平比較 各組外周血T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+百分比都在正常范圍內，但組間無統計學差異(P>0.05)。組1 CD3+百分比明顯高于組2和組3(P<0.05)，隨年齡增長外周血T淋巴細胞亞群CD3+百分比呈下降趨勢，見表1。

2.2各組外周血T淋巴細胞亞群CD95表達水平比較 組2 CD3+、CD4+、CD8+細胞的CD95陽性率明顯高于組1且明顯低于組3(P<0.05)，隨年齡增長外周血T淋巴細胞亞群CD95表達率上調，見表2。

表1 各組外周血T細胞亞群水平比較

與組1比較：1)P<0.05

表2 各組外周血T淋巴細胞亞群CD95表達水平比較

與組2比較：1)P<0.05

2.3各組血清25-(OH)D水平比較 組2血清25-(OH)D水平〔(49.2±24.3)nmol/L〕明顯低于組1〔(80.5±27.9)nmol/L〕(P<0.05)，且明顯高于組3〔(32.6±22.7)nmol/L,P<0.05〕，隨年齡增長血清25-(OH)D水平降低。

2.4血清25-(OH)D水平與T淋巴細胞亞群CD95、年齡的相關性 所有研究對象中，血清25-(OH)D水平與年齡呈負相關(r=-0.021，P<0.05)，與T淋巴細胞亞群CD95呈正相關(r=0.17，P<0.05)。

3 討 論

隨著機體衰老，免疫系統表現出對抗原應答的逐漸衰退，目前研究發現T淋巴細胞在衰老過程中的改變最為明顯〔2〕。T淋巴細胞介導的細胞免疫在機體免疫方面起著核心作用。正常人機體中各 T 淋巴細胞亞群之間相互作用、比例均衡，維持著機體的正常免疫功能，CD4是輔助T(Th)細胞和效應T細胞的表面標志，Th細胞通過釋放多種細胞因子輔助B細胞和效應T細胞活化，上調機體的免疫功能；CD8抗原是細胞毒T細胞和抑制T細胞的表面標志。本文結果顯示，老年人外周血中T淋巴細胞總數下降。但國內外研究相關結果不一致〔3，4〕。隨著年齡的增長，老年人CD3+T淋巴細胞明顯低于年輕人，提示老年人免疫功能的下降也可能與此相關。

CD95為神經生長因子/腫瘤壞死(TNF)受體超家族成員，主要表達于活化T淋巴細胞表面，與其配體結合可導致敏感細胞凋亡。CD95的作用表現在參與中樞免疫器官中淋巴細胞的陽性與陰性的選擇及對外周血淋巴細胞的清除。研究表明，隨著機體衰老CD95+表達上調，其介導T淋巴細胞凋亡增加，T淋巴細胞數目減少，導致老年人免疫功能下降〔5〕。本研究顯示隨年齡增長外周血T淋巴細胞亞群CD95表達率上調。CD95+表達上調，促細胞凋亡作用增強，造成淋巴細胞凋亡增加，進而淋巴細胞數目減少，同時細胞功能隨增齡而降低，引起免疫功能變化。CD95可能是評價免疫衰老較好的生物學標志之一。

維生素D是維持人體生命所必需的營養素之一，主要是在日光照射下由皮膚的7-脫氫膽固醇轉變而來的內源性維生素D(也被稱為維生素 D3)，也可以從富含維生素D3的膳食或者富含維生素D2的蔬菜中獲得。維生素D進入血液后與維生素D結合蛋白結合，并先后運送至肝臟和腎臟，分別在25-羥化酶和1α羥化酶的作用下生成25-(OH)D和活性形式的1，25-羥維生素D3〔1，25-(OH)2D3〕，經血液循環輸送到各個靶器官與維生素D受體(VDR)結合而發揮作用。維生素D可作用于固有免疫細胞，可抑制其炎性反應并促進其直接的抗菌活性。T淋巴細胞可以通過CYP27B1酶影響維生素D的合成，而維生素D可以提高T淋巴細胞免疫應答〔6〕。1，25-(OH)2D3可影響Th細胞的分化，抑制Th1細胞分泌白細胞介素(IL)-2、干擾素(IFN)-γ、核轉錄因子(NF)-κB，介導細胞免疫，減少免疫排斥；促進Th2細胞分泌IL-6、IL-4、IL-5、IL-10，介導體液免疫，誘導免疫耐受。1，25-(OH)2D3通過阻止IL-2轉錄因子活化T細胞核因子(NF-AT)復合體的形成，抑制IL-2的分泌；同時1，25-(OH)2D3-VDR復合體能與IFN-γ啟動子區的VDRE結合，直接抑制IFN-γ的表達〔7〕。分泌IL-17的Th17細胞是輔助性T細胞的另一亞群，1，25-(OH)2D3通過抑制IL-17基因的直接轉錄抑制IL-17分泌〔8〕。而且調節性T細胞是免疫抑制細胞，維生素D3可促進調節性T細胞的發育，抑制過度的免疫反應和自身免疫反應〔9～12〕。當25-(OH)D缺乏時，外周血T淋巴細胞總數及輔助性T細胞百分比明顯下降，由于輔助性T細胞減少導致CD4+/CD8+比值下降，影響機體免疫功能。目前全球范圍內維生素D缺乏普遍存在。本研究結果提示血清25-(OH)D水平與免疫衰老有關。免疫衰老是機體代謝過程中的一個必然階段，本研究提示T淋巴細胞亞群CD95、維生素D水平可能是評價免疫衰老較好的生物學標志物，聯合檢查以更好地評價機體的免疫功能。

1Djukic M，Nau R，Sieber C，The ageing immune system〔J〕.Dtsch Med Wochenschr，2014；139(40)：1987-90.

2van der Geest KS，Abdulahad WH，Tete SM，etal.Aging disturbs the balance between effector and regulatory CD4+T cells〔J〕.Exp Gerontol，2014；60：190-6.

3Tavares SM，Junior Wde L，Lopes E Silva MR.Normal lymphocyte immunophenotype in an elderly population〔J〕.Rev Bras Hematol Hemoter，2014；36(3)：180-3.

4Kalokerinos EK，von Hippel W，Henry JD，etal.The aging positivity effect and immune function：positivity in recall predicts higher CD4 counts and lower CD4 activation〔J〕.Psychol Aging,2014；29(3)：636-41.

5Sawhney M，Mathew M，Alarmathi MT，etal.Agerelated changes in Fas and Fas ligand gene expressionand cytokine profiles in healthy Indians〔J〕.J Asian Pac Allerg Immunol，2006；24：47-56.

6Lucas RM，Gorman S，Geldenhuys S，etal.Vitamin D and immunity〔J〕.F1000Prime Rep，2014；6：118.

7Pichler J，Gerstmayr M，Szépfalusi Z，etal.1 alpha，25(OH)2D3 inhibits not only Th1 but also Th2 differentiation in human cord blood T cells〔J〕.Pediatr Res，2002；52(1)：12-8.

8Pludowski P，Holick MF，Pilz S，etal.Vitamin D effcts on musculos-keletal health，immunity，autoimmunity，cardiovascuIar disease，cancer，fertility，pregnancy，dementia and mortality-a review of recent evidence〔J〕.Autoimmun Rev，2013；12(10)：976-89.

9Vignali DA，Collison LW，Workman CJ.How regulatory T cells work〔J〕.Nat Rev Immunol，2008；8(7)：523-32.

10Prietl B，Treiber G，Pieber TR，etal.Vitamin D and immune function〔J〕.Nutrients,2013；5(7)：2502-21.

11Chambers ES，Hawrylowicz CM.The impact of vitamin D on regulatory T cells〔J〕.Curr Allerg Asthma Rep，2011；11(1)：29-36.

12Chun RF，Liu PT，Modlin RL，etal.Impact of vitamin D on immune function：lessons learned from genome-wide analysis〔J〕.Front Physiol，2014；5：151.

〔2016-03-19修回〕

(編輯 曹夢園)

C913.6

A

1005-9202(2017)19-4889-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.091

江西省科技廳科技計劃項目(20060140)

陳發秀(1980-)，女，碩士，副主任醫師，碩士生導師，主要從事老年心血管病研究。

寧 芳(1968-)，女，副主任醫師，主要從事老年心血管病研究。