中藥燙傷膏組方醇提工藝的優(yōu)化及體外抑菌活性

侯 爽，商學君，王 沛*

（1.長春中醫(yī)藥大學藥學院， 長春 130117；2.吉林工商學院外國語學院，長春 130507）

·方藥研究·

中藥燙傷膏組方醇提工藝的優(yōu)化及體外抑菌活性

侯 爽1，商學君2，王 沛1*

（1.長春中醫(yī)藥大學藥學院， 長春 130117；2.吉林工商學院外國語學院，長春 130507）

目的 優(yōu)選中藥燙傷膏組方的醇提工藝條件并進行抑菌效果考察。方法 采用L9（34）正交試驗法優(yōu)選組方的醇提工藝，采用試管2倍稀釋法測定MIC。結(jié)果 最佳工藝的影響因素：提取次數(shù)＞乙醇濃度＞料液比＞提取時間，提取液對細菌的抑制效果較好。結(jié)論 最佳工藝用為8倍藥材量的60%乙醇溶液對藥材提取，提取3次，每次提取90 min，且所得提取液抑菌效果明顯。

中藥燙傷膏；醇提工藝；抑菌濃度

Abstract:?Objective To optimize the conditions of alcohol extraction of traditional Chinese medicine scald cream and study the antibacterial effect.Methods The L9(34) orthogonal experiment was used to optimize the alcohol extraction process, and the MIC was determined by 2-fold dilution.Results The optimum extraction conditions were as follows： extraction times＞ ethanol concentration＞ solid - liquid ratio＞ extraction time, and the extract had better inhibitory effect on bacteria.Conclusion The optimum process was extraction of 60% ethanol solution with 8 times the amount of herbs, extraction 3 times, 90 minutes extraction, and the antibacterial effect of the extract was obvious,it can be further studied.

Keywords:?traditional Chinese medicine scald cream; alcohol extraction process; MIC

燙傷膏處方主要包括黃連、黃柏、黃芩、沒藥等藥材。黃連、黃柏、黃芩均具有清熱燥濕、祛火解毒之功效，沒藥可活血祛瘀、消腫止痛[1]，配伍使用可殺菌消炎、去腐生肌、促進肉芽組織及皮膚緣的快速生長。本文是在之前所做單因素試驗的基礎(chǔ)上，以提取所得小檗堿含量和揮發(fā)油含量之和為考察指標，進行正交實驗以優(yōu)化提取條件，小檗堿的含量通過紫外分光光度法測定，同時以最小抑菌濃度（MIC）為指標進行體外抑菌試驗考察提取液抑菌活性[2-3]。

1 材料

1.1 儀器 粉碎機（北京中新），98-1-A型加熱套（天津泰思特），TU-1810紫外可見分光光度計（北京普忻），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海遠淮），蒸汽滅菌鍋（濟南來寶），電熱恒溫培養(yǎng)箱（金壇萬華）。

1.2 藥材 黃連、黃柏、黃芩、沒藥均購于中東城市萬家醫(yī)藥超市，經(jīng)鑒定符合《中華人民共和國藥典》[1]中的各項規(guī)定；標準品鹽酸小檗堿（3UGA-HEKE）購于國家藥物和生物制品控制研究所。

1.3 菌株 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及大腸桿菌均由我校微生物實驗室提供。

2 方法

2.1 組方醇提工藝的優(yōu)化

2.1.1 浸膏的制備 黃連、黃柏、黃芩、沒藥適當破碎到1 000 mL 燒瓶中，加入一定量和一定濃度的乙醇溶液浸泡回流提取后，用揮發(fā)油提取器收集沒藥揮發(fā)油。加熱回流結(jié)束后過濾，合并所有濾液。用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)為1～2，濃縮[4]。

2.1.2 鹽酸小檗堿含量測定 準確稱取10 mg標準品放入500 mL容量瓶，無水乙醇溶解后定容，震蕩均勻后濃度為 0.02 mg/mL。精確量取對照品溶液 1 、2 、3 、4 、5 、6 mL于10 mL容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度搖勻，濃度分別為 2、4、6、8、10、12 μg/mL，于 350 nm處測定吸光度。結(jié)果作線性回歸，得鹽酸小檗堿濃度C（mg/mL）與吸光度A的關(guān)系A(chǔ)=0.050 4C－0.052 3，r2=0.999 1，用這個方程計算小檗堿濃度和含量。

2.1.3 正交試驗因素水平的確定 以早期單因素檢驗結(jié)果為前提，選擇乙醇濃度（%）、料液比、提取時間（min）和提取次數(shù)4個因素，各因素選擇3個水平進行正交設(shè)計[5-9]，見表1。

表1 提取工藝因素水平表L9（34）

2.2 體外抑菌實驗

2.2.1 細菌懸浮液的制備 將試驗菌種接種于瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，用生理鹽水稀釋細菌懸浮液0.5個麥氏濁度單位，冷藏備用[10-11]。

2.2.2 MIC的測定 采用試管2倍稀釋方法測定MIC[12]。將提取液濃縮至100 mg/mL作為原液，取12個無菌試管，加入2 mL液體培養(yǎng)基，移取2 mL原液到1號試管并混合均勻，再從1號試管中移取2 mL加入2號試管并混合均勻，同樣方法稀釋至10號試管，10號試管需棄去2 mL，如此各管中藥液濃度依次稀釋為原液 的 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/102 4。各試管中藥液濃度分別為50 、25 、12.5 、6.25、3.125 、1.562 5 、0.781 25 mg/mL。11 號和12號試管分別作為陽性和陰性對照。將適量且等量的細菌懸浮液加到各試管中，37 ℃培養(yǎng)24 h后目視觀察并記錄MIC[13-14]。

3 結(jié)果

3.1 正交試驗結(jié)果 根據(jù)表1進行試驗，紫外分光光度法測定小檗堿含量，計算揮發(fā)油含量，以2種含量總和作為最終考察指標[15]，結(jié)果見表2和表3。

表2 正交試驗結(jié)果

表3 方差分析表

3.2 最低抑菌濃度（MIC）測定結(jié)果 藥液對以下幾種細菌的MIC結(jié)果 見表4。

表4 組方提取液對細菌的最低抑菌濃度（MIC） mg/mL

4 小結(jié)

根據(jù)正交試驗和方差分析結(jié)果可以看出，4個因素對提取結(jié)果的影響順序為：D（提取次數(shù)）＞A（乙醇濃度）＞C（提取時間）＞B（料液比）。最佳的提取條件為A1B2C2D3，即選擇濃度為60%的乙醇溶液，藥材量與溶液量比例為1：8，回流90 min，提取3次時，所得到的浸膏中有效成分總含量最高。

由體外抑菌實驗結(jié)果可知，該組方對由燒燙傷所產(chǎn)生的幾種主要細菌種類具有良好的抑菌活性，其中對銅綠假單胞菌的抑制作用相對較強。但因?qū)嶒灄l件和所需儀器設(shè)備過于簡單，可能導致實驗過程中對細節(jié)的控制不到位，難以精確計算最低抑菌濃度，尚需深入研究，實驗結(jié)果有待進一步驗證。

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Optimization of alcohol extraction technology of traditional Chinese medicine scald cream and study on its antibacterial activity

HOU Shuang1, SHANG Xuejun2, WANG Pei1*
（1.School of Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China;2.School of Foreign Languages, Jilin Business and Technology College, Changchun 130507, China）

R283.6

A

2095-6258(2017)05-0714-03

2016-11-29）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.009

吉林省科技廳科技支撐項目(20120446)。

侯 爽（1994 -），女，碩士研究生，主要從事中藥制藥工藝優(yōu)化方面的研究。

*通信作者：王 沛，男，教授，電話-13578701293，電子信箱-1103463098@qq.com