PCR技術應用在乙型肝炎檢驗中的價值探析

盧天龍

【摘要】 目的 分析在乙型肝炎檢驗中應用聚合酶鏈反應（PCR）技術的效果。方法 200例乙型肝炎患者， 根據隨機抽簽法分為觀察和對照組， 各100例。對照組通過化學發光法進行檢驗， 觀察組選擇PCR技術進行檢驗， 比較兩種方法的診斷準確率。結果 觀察組診斷準確率為96%， 對照組診斷準確率為81%， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論 PCR技術對于乙型肝炎具有較高的診斷準確率， 能夠準確檢出乙型肝炎病毒， 值得廣泛應用。

【關鍵詞】 乙型肝炎；聚合酶鏈反應技術；檢驗

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.012

【Abstract】 Objective To analyze the effect of polymerase chain reaction （PCR） technology applied in hepatitis B test. Methods A total of 200 hepatitis B test patients were divided by random lottery method into observation group and control group， with 100 cases in each group. The control group was tested by chemiluminescence method， and the observation group was tested by PCR technology. The diagnostic accuracy rates of the two methods were compared. Results The observation group had diagnostic accuracy rate as 96%， which was 81% in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion PCR technology provides higher diagnostic accuracy for hepatitis B， and can accurately detect hepatitis B virus. So it is worthy of wide application.

【Key words】 Hepatitis B； Polymerase chain reaction technology； Test

乙型肝炎是一類傳染病， 具有非常強的傳染性， 在全世界范圍內都屬于影響健康的嚴重傳染病， 一些患者還因為慢性感染進展為肝硬化和肝癌[1， 2]。準確的診斷、及時的干預是減少傳染的重要方法， 本研究具體分析在乙型肝炎檢驗中選擇PCR技術的診斷效果， 總結如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年1月～2016年12月本院200例乙型肝炎患者進行研究， 根據隨機抽簽法分為觀察和對照組， 各100例。觀察組患者男62例， 女38例， 平均年齡（36.2±6.3）歲；

對照組患者男64例， 女36例， 平均年齡（37.5±6.1）歲。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在清晨空腹狀態下抽取兩組患者3 ml靜脈血液作為檢驗標本， 通過進行離心處理， 獲取血清， 置于冰箱中保存以備使用， 冰箱溫度設置為零下20℃。觀察組通過PCR技術檢驗， 乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）采購于中山大學達安基因股份有限公司， 按照試劑說明書完成全部操作。熒光定量PCR擴增和分析結果選擇ABI 7500 PCR儀完成（美國應用生物公司）。對照組通過化學發光法檢驗， 選擇科美試劑和科美化學發光儀完成檢驗， 按照試劑說明書完成全部操作。

1. 3 觀察指標 以臨床病理診斷結果為標準， 比較兩組對于乙型肝炎的診斷準確率。

1. 4 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

觀察組患者診斷為乙型肝炎的患者96例， 診斷準確率為96%；對照組患者診斷為乙型肝炎的患者81例， 診斷準確率為81%；兩組診斷準確率比較差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

以往臨床診斷乙型肝炎使用化學發光法的更多， 該方法具體是在電極表面經電化學出現的一種特異性化學發光反應， 通過化學發光劑對抗體進行標記， 經抗原-抗體反應以及磁珠分離技術， 按照發光劑在電極上發出的光強度定量或定性檢測待測抗原或抗體[3]。但是大量實踐發現， 該方法進行乙型肝炎檢測有假陰性出現的可能， 確診率受到影響[4]。PCR技術也叫體外基因擴增技術， 屬于分子生物學領域的產物， 當前在分子生物學、醫學等多個學科都有廣泛應用[5]。其能夠直接檢測DNA復制水平， 從而可以使假陰性出現的可能得到最大程度避免[6]。PCR技術的作用原理基本相當于天然復制DNA的過程， 構成部分包括變性-復性（退火）-延伸， 模版DNA通過加熱溫度達到大約93℃， 保持一段時間， 之后使經PCR擴增形成的雙鏈或模板DNA雙鏈DNA完成解離形為單鏈， 便于結合其引物。等到溫度下降到55℃， 模板DNA單鏈的互補序列會和引物完成配對結合；在TapDNA聚合酶的作用下， DNA模板-引物復合物將dNTP當成反應原料， 將靶序列當成模版， 依據堿基配對以及半保留復制原理， 合成新的一條互補于模板DNA鏈的半保留復制鏈。將變性-退火-延伸三個過程進行多次重復、循環， 能夠獲取大量半保留復制鏈。endprint

本研究通過分別利用化學發光法檢驗以及PCR技術檢驗， 結果顯示， 觀察組患者診斷為乙型肝炎的患者96例， 診斷準確率為96%；對照組患者診斷為乙型肝炎的患者81例， 診斷準確率為81%；兩組診斷準確率比較差異有統計學意義（P<0.05）。

乙型肝炎患者在康復期間， 當乙型肝炎病毒轉錄翻譯能力逐漸降低， 相應血清中乙肝表面抗原 （HBsAg）水平也會下降， 出現假陰性情況， 從而容易出現漏診或者誤診[7]。但是PCR通過熒光標記乙型肝炎病毒， 對乙型肝炎病毒DNA的轉錄、翻譯進行檢測， 能夠完全避免由于DNA復制水平而導致血清中抗體出現假陰性， 從而有效降低誤診以及漏診情況， 保證檢驗準確率[8-10]。

綜上所述， 對乙型肝炎患者選擇PCR技術進行檢驗， 能夠獲取較高診斷準確率， 可用于推廣。

參考文獻

[1] 鐘政榮， 徐云俠， 丁淑琴， 等. 乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒-DNA與常用血清標志物的相關性分析. 蚌埠醫學院學報， 2015， 40（10）：1387-1389.

[2] 王紅建， 封偉， 張健， 等. 巢式聚合酶鏈反應檢測血清HBV-DNA對乙肝治療的臨床意義. 西部醫學， 2017， 29（1）：117-119， 122.

[3] 林樹波， 肖澤斌， 溫國強， 等. 汕頭獻血人群HBV DNA定量檢測結果與乙肝兩對半模式分析. 臨床輸血與檢驗， 2016， 18（1）：

59-60.

[4] 潘新峰. PCR檢測乙肝DNA與酶聯法檢測乙肝五項的關系. 中國實用醫刊， 2016， 43（16）：115-117.

[5] 王威， 王海峰， 薛飛肖， 等. 西安市乙肝患者HBV基因型分布及臨床相關性指標的研究. 國際檢驗醫學雜志， 2017， 38（4）：475-477.

[6] 劉林. 熒光定量PCR檢測乙肝DNA分析前質量控制. 世界最新醫學信息文摘（連續型電子期刊）， 2015， 15（61）：34-35.

[7] 胡大山， 李紅林. 乙肝五項與乙肝 HBV-DNA 熒光定量檢測及肝臟纖維化指標的相關性分析. 醫學理論與實踐， 2016， 29（24）：3319-3320， 3323.

[8] 張佳佳， 王萍. 乙肝核心抗體單項陽性與乙肝DNA定量檢測相關性分析. 中國衛生標準管理， 2016， 7（18）：148-149.

[9] 朱明巖， 葉英. 不同熒光定量PCR技術在乙型肝炎病毒檢測中的應用評價. 安徽醫藥， 2016， 20（9）：1723-1726.

[10] 馬倩茹， 溫江濤， 耿春松， 等. PCR技術在醫學檢驗乙型肝炎中的應用. 現代診斷與治療， 2016， 27（19）：3736-3737.

[收稿日期：2017-06-21]endprint