兩種方法對水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌檢測的對比分析

鄧 婷梁漪蓮駱 瓊黃慧清

（1廣西桂林市自來水公司，廣西桂林541001） （2廣東食品藥品職業學院，廣東廣州510520）

兩種方法對水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌檢測的對比分析

鄧 婷1梁漪蓮1駱 瓊1黃慧清2

（1廣西桂林市自來水公司，廣西桂林541001） （2廣東食品藥品職業學院，廣東廣州510520）

利用多管發酵法和酶底物法檢測水中的總大腸菌群與大腸埃希氏菌，對比兩種方法的適用性、靈敏度等，對比分析多管發酵法和酶底物法2種方法對水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測情況。結果表明，2種方法對適用性菌株存在差異；在1 MPN/100mL濃度下，酶底物法更加靈敏；在加標樣和平行樣檢測中，酶底物法表現更為穩定。由此可得，在水中檢測總大腸菌群與大腸埃希氏菌可應用多管發酵法和酶底物法，但與多管發酵法相比，酶底物法優勢顯著，用時較短、操作簡單、便于觀察，值得推廣。

多管發酵法；酶底物法；總大腸菌群；大腸埃希氏菌；檢測結果

隨著人們生活水平的提高，人們對自來水水質提出了更高的要求。目前，自來水微生物污染問題嚴峻，相關問題得到了社會各界的高度關注。近幾年，我國學者報道了因自來水傳播傳染性疾病的診治與預等。為了改善水質，為廣大群眾提供安全與健康的自來水，我國實行《生活飲用水衛生標準》，其中微生物指標有：菌落總數、總大腸菌群、大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群。《生活飲用水標準檢驗方法 微生物指標》中提供了幾種不同的檢測方法，總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測方法有濾膜法、多管發酵法、酶底物法，各方法均以發酵乳糖為基礎。為了明確不同方法的應用價值，本文對自來水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌的2種檢測方法展開了對比分析，以期為自來水中微生物檢測方法的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

MMO-MUG培養基，美國DEXX公司；乳糖蛋白胨培養基、EC-MUG培養基，青島海博生物技術有限公司；培養箱，36℃±1℃、44.5℃±0.5℃；紫外燈，波長為366nm。

1.2 方法

1.2.1 試驗前準備

選用培養基：總大腸菌群檢測利用乳糖蛋白胨培養基和MMO-MUG培養基，大腸埃希氏菌檢測利用EC-MUG培養基與MMO-MUG培養基。

準備：適用性菌株，EIEC培養物，加標水樣，普通含菌水樣，MMO-MUG培養基粉末（2.7±0.4）g；根據配制要求制備的EC-MUG培養基與乳糖蛋白胨培養液。

1.2.2 方法原理

總大腸菌群可利用MMO-MUG培養基進行檢測，其可產生β-半乳糖苷酶，其可分解培養基的ONPG，此后培養基便會出現顏色變化；而大腸埃希氏菌則借助EC-MUG培養基與MMO-MUG培養基檢測，其可產生β-葡萄糖醛酸酶，待其分解后可使MUG熒光底物釋放出熒光產物，再經紫外燈光照射，可出現特征性熒光。

1.2.3 試驗方法

1.2.3.1 適用性試驗

取分裝滅菌好的MMO-MUG培養液、EC-MUG培養液、乳糖蛋白胨培養液（10mL/管），向各管中分別加入試驗菌混懸液，其中EC-MUG培養液于44.5℃±0.5℃的培養箱內培養，MMO-MUG培養液和乳糖蛋白胨培養液放置在36℃±1℃的培養箱內，24 h后觀察結果。

1.2.3.2 靈敏度試驗

取經24 h培養后的侵襲性大腸埃希氏菌（EIEC）培養物，將其制成0.5麥氏度菌液，10倍梯度稀釋，至菌量為1500 MPN/100mL～1 MPN/100mL進行試驗，每個菌液濃度做2個平行試驗，對比不同細菌濃度下，多管發酵法和酶底物法的靈敏度。

1.2.3.3 穩定性試驗

以10份加入EIEC的加標水樣及62份水樣品為研究對象，對比2種檢測方法，分析其總大腸菌群結果。

2 結果與分析

2.1 適用性試驗

適用性試驗結果表明，多管發酵法與酶底物法用于檢測宋內氏志賀氏菌、綠膿桿菌與金黃色葡萄球菌時，測定結果存在差異。適用性試驗結果見表1。

表1 適用性試驗結果

2.2 靈敏度試驗

靈敏度試驗結果表明，在1 MPN/100mL濃度下，酶底物法可見黃色與藍色熒光；而多管發酵法未見熒光。靈敏度試驗結果見表2。

表2 靈敏度試驗結果

2.3 穩定性試驗

以10份加標水樣為研究對象進行檢測，結果見表3。

表3 加標試驗結果

由表3可知，酶底物法和多管發酵法結果均落在置信區間內，且2種方法之間不存在顯著性差異，酶底物法結果方差較小，說明酶底物法結果的偏離度小。以62份含菌水樣為研究對象進行檢測，結果見表4。

表4 含菌水樣試驗結果

由表4可知，2種方法不存在顯著性差異，根據結果分析，酶底物法在均一性方面優于多管發酵法。

3 討 論

總大腸菌群來源于動物腸道、自然環境，具體包括檸檬酸菌屬、埃希氏菌屬、克雷伯氏菌屬及腸肝菌屬等；而大腸埃希氏菌又稱大腸桿菌，其作為優勢菌群，廣泛分布在腸道內，在其作用下，有效保證了宿主健康及其生理功能的發揮，但如果宿主免疫力、抵抗力下降，其組織器官受細菌侵入，則會誘發腸外感染，隨之便形成了致病性大腸埃希氏菌，常出現腹瀉等腸道疾病。我國在相關標準中增設了關于大腸埃希氏菌的檢驗要求，經調查發現，常見的污染指標有3種，分別為大腸埃希氏菌、總大腸菌群及糞大腸菌群，在水、食品加工方面，為了明確其衛生狀況，常選用總大腸菌群為指標；而在糞便污染、衛生處理方面，常選用大腸埃希氏菌為指標。

目前，在全球范圍內，酶底物法的應用較為廣泛與普遍，經不斷探索與實踐，此方法日漸成熟，國家與相關組織大多推薦應用酶底物法，同時也使用多管發酵法與濾膜法等，上述方法均收錄于《生活飲用水標準檢驗方法微生物指標》。我國檢測部門以多管發酵法為主，在檢測實踐中，需要稀釋樣品、記錄陽性管數、檢索查找等，試驗開始到得出結果所需時間約為48 h，與其相比，酶底物法操作簡便、耗時較少，不僅提高了工作效率，也保證了檢測質量。

為了了解2種檢測方法的應用價值，本文選用多管發酵法與酶底物法進行了對比研究。適用性試驗結果表明，2種方法對試驗采用的適用性菌株的測定結果存在差異；經靈敏度試驗可知，與多管發酵法相比，酶底物法更加靈敏，在1 MPN/100mL濃度下仍可穩定檢出。

穩定性試驗結果表明，2種方法沒有表現出顯著性差異，但與多管發酵法相比，酶底物法的時間較短，其在24 h內便可完成，且操作簡單。

綜上所述，與多管發酵法相比，應用酶底物法檢測自來水中總大腸菌群與大腸埃希氏菌，更加有效、便捷，值得推廣。

［1］楊靜.致泌尿道感染的菌群分布、大腸埃希菌耐藥性分析及其基因型初步研究［D］.安徽：安徽醫科大學，2012：8-12.

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振興民族工業的人民科學家微生物學奠基人方心芳院士誕辰110周年紀念活動在太原舉行

2017年3月16日，紀念《山西醋》作者方心芳院士誕辰110周年紀念活動在太原召開。大會由中國微生物學會、中國生物工程學會發起主辦，山西省食品科學技術學會、山西省食品工業研究所協辦，山西老陳醋集團有限公司承辦。來自海內外的專家學者、釀醋同行以及方老的家人等參加此次紀念會。中國微生物學會常務副秘書長楊海花，中國生物工程學會常務副秘書長張宏翔，山西老陳醋集團有限公司董事長、國家級非物質遺產代表性傳承人郭俊陸，中國科學院微生物所研究員、方心芳研究專家程光勝，中國微生物學先驅、開拓者方心芳之子方定一，臺灣中華酒業發展協進會秘書長歐陽港生，國家文化部原副部長、國家圖書館名譽館長周和平等發表了主題演講。會后，方心芳院士家屬及各級領導等共同為方心芳院士雕塑揭幕。

（山西老陳醋集團有限公司）

Two methods'comparative analysis of detecting total coliform bacteria and E.colibacteria in water

DENG Ting1*LIANG Yilian1LUO Qiong1HUANG Huiqing2

1（Guangxi guilin water company，Guangxi Guilin 541001，China）

2（Guangdongfood and drugvocational college,Guangdong Guangzhou510520，China）

By using the multiple tube fermentation and enzyme substrate method to detect total coliform bacteria and E.coli bacteria in water,compared the applicability,sensitivity of the two methods.The results show that the two methods of applicability strains is different；Under 1 MPN/100mL concentration,enzyme substrate method is more sensitive.In the prototype and parallel sample tests,enzyme substrate performance is more stable.Multiple tube fermentation and enzyme substrates can be used in water detection of total coliforms and e.coli,but compared with the multiple tube fermentation,enzyme substrate has advantage significantly,short and simple operation,easy to observe,and is worth promoting.

multi-tube fermentation；enzyme substrate；total coliformbacteria；E.coli bacteria；test results

TS207.4

A

1673-6044（2017）01-0052-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.01.015

*鄧婷，女，1984年出生，2009年畢業于中山大學生物化學與分子生物學專業，工程師。

2016-12-01