大腸桿菌快速檢測原料4-甲基傘形酮葡糖酸苷在食品檢測中應用效果研究*

李新章杭臣臣趙家龍

（1南通凱恒生物科技發展有限公司，江蘇南通226011） （2中國科學技術大學納米科學技術學院，江蘇蘇州215123）（3安徽省鳳陽縣動物疫病預防與控制中心，安徽鳳陽233100）

大腸桿菌快速檢測原料4-甲基傘形酮葡糖酸苷在食品檢測中應用效果研究*

李新章1**杭臣臣2趙家龍3

（1南通凱恒生物科技發展有限公司，江蘇南通226011） （2中國科學技術大學納米科學技術學院，江蘇蘇州215123）（3安徽省鳳陽縣動物疫病預防與控制中心，安徽鳳陽233100）

食源性疾病已成為頭號食品安全問題。導致食源性疾病的致病菌廣泛存在于食物中。可以引起食物中毒或以食品為傳播媒介的致病菌主要有痢疾桿菌、致病性大腸桿菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌、鼻疽桿菌、結核菌、布氏桿菌、豬丹毒桿菌等。其中最為常見的食源性致病菌是大腸菌群，因此大腸菌群的檢測是食品安全評價中重要的微生物檢測項目。近年來，國內外關于大腸菌群檢測做了大量研究工作。目前，用于大腸菌群檢測的方法主要有乳糖膽鹽發酵法、紙片法、乳糖多管發酵法，它們存在操作復雜，檢測時間長，難以推廣的問題。

4-甲基傘形酮葡糖酸苷（4-Methylumbellifery-B-D-Glucuronide，MUG）是一種生物顯色劑。MUG可以被大腸桿菌的糖苷酶水解，并產生一種強熒光物質—4-甲級傘形酮（4-MU），從而以藍色熒光信號的形式直觀的指示該物質已被大腸桿菌污染。由于其具有操作簡單，檢測時間長，結果準確等優點，已在食品領域得到廣泛應用。同時市場上對MUG培養基的需求量也日益增加，但是長久以來，國內MUG市場都被進口品牌占據，且價格居高不下。為此公司前期開發出較高純度和價格較低的MUG原料，通過比較常用進口Sigma的MUG與本公司開發出的MUG在食品中檢測大腸桿菌污染的效果，以檢驗本公司的MUG實際使用效果。

1 材料

1.1 試驗材料

試驗用的材料均購自當地食品超市，隨機取未開包裝的產品11種，各30份。

1.2 主要試劑及儀器

水相濾膜，孔徑為0.45 um；MUG，Sigma科技有限公司；胰蛋白酶，上海生物工程有限公司；真空泵、366nm紫外燈，南通凱恒生物科技發展有限公司；其它試劑，分析純，南通凱恒生物科技發展有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品前處理

固體：無菌操作稱取樣品25 g，置于裝有255mL滅菌的生理鹽水的容器中，充分振搖、混勻。

液體樣品：牛奶樣品在室溫（23℃～27℃）下經蛋白酶處理，其他樣品不做處理。以無菌吸管吸取樣品25mL置于裝有225mL滅菌生理鹽水（牛奶樣品用滅菌的蛋白胨吐溫80稀釋液）的容器中，以30cm幅度于7 s內振搖25次。制成1:10的樣品稀釋液備用。

1.3.2 分別用1 mol/L氫氧化鈉或1 mol/L鹽酸調節樣品稀釋液的pH值，將上述制備好的稀釋液用9mL滅菌生理鹽水進行10倍遞增稀釋，直至最高稀釋度的檢測結果達到陰性終點。（每一稀釋度換用1支1mL無菌吸管或移液器吸頭，上一稀釋度用的吸管或吸頭不要觸及下一稀釋度的稀釋液。）從制備樣品稀釋液至稀釋完畢，全過程不超過15min（牛奶樣品不超過45min）。

1.3.3 將滅菌過濾裝置連接于真空抽濾瓶上，無菌操作將無菌濾膜放在抽濾底座上并固定。無菌操作加入10mL～20mL無菌蒸餾水于濾器中，打開真空泵，抽吸過濾，再從1.3.2中選取適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液，每個稀釋度分別過濾，每次10mL。最后再加入10mL～15mL無菌蒸餾水，抽吸過濾后，關閉真空泵，用無菌鑷子將濾膜取出于備用。

1.3.4 無菌操作將1.3.3樣品過濾后的濾膜貼放于預先干燥的BMA瓊脂平板表面上，濾膜與瓊脂表面之間應無氣泡。放入36℃±1℃培養箱中培養2 h，在暗室或紫外操作室內用波長366nm紫外燈觀察濾膜上的菌落是否有藍白色熒光。選用菌落數范圍在25個～250個之間的平板，計算藍白色熒光的菌落數并相加，再乘以其稀釋倍數后，計算樣品中大腸菌群或大腸桿菌數（cfu/g或cfu/mL)。

1.4 產品合格評價方法

根據產品衛生標準（GB8537-2008飲用天然礦泉水、GB 17401-2014膨化食品、GB 17400-2015方便面、GB 7101-2015飲料、GB 19645-2010巴氏殺菌乳）與檢測結果評價產品是否合格。

2 結果與分析

自制MUG與進口品牌MUG在食品中檢測大腸桿菌數量的檢測結果評價食品合格情況見下頁表1。

由表1可知，自制MUG與進口品牌MUG應用在食品檢測中所得的大腸桿菌數，用于評價食品樣品合格與不合格結果均一致，且兩種MUG檢測出的不合格食品均為同一份食品。本研究結果表明本公司自制的MUG可以替代進口MUG用于食品中大腸桿菌的檢測中。

3 結論與討論

國內MUG相關的試劑市場基本被Sigma公司占據，國內幾乎沒有大規模的成品提供商。由于Sigma公司MUG已經被廣泛用在食品檢測中，其已經成為行業的標準產品。如其它企業制備的MUG產品中性狀、純度、雜質種類與Sigma公司產品不一致，可能會導致顯色時間和顯色效果更差，甚至由于雜質的毒性導致大腸桿菌的死亡，進而導致最終的檢測效果比Sigma公司的MUG更差。本研究結果表明Sigma公司的MUG與自制的MUG應用于食品安全檢測中具有相同效果，此結果雖然并不能說明自制的最終MUG的性狀、純度、雜質、甚至有毒雜質完全一致，但本研究直接說明兩種MUG用在食品檢測中的最終效果是一致的，所以自制的MUG能夠替代Sigma公司MUG。未來筆者將對自制MUG的性狀、雜質成分、結構等方面進行深入的分析，以獲得更為全面的數據信息。

表1 自制MUG與進口品牌MUG在食品中檢測大腸桿菌數量的檢測結果評價食品合格情況

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［3］馬延霞，吳清平，張菊梅，等.大腸菌群特異性檢測熒光底物MUGal的合成及應用［J］.現代食品科技，2014，30（8）：251-257.

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［11］吳清平，馬延霞，張菊梅，等.一種4-甲基傘形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷的制備方法［P］.中國專利：CN201410105804.8，2014-07-02.

Study on application effect of 4-Methylumbellifery-B-D-Glucuronide used in food safe analysis

LI Xinzhang1*HANG Chencheng2ZHAO Jialong3

1（Nantongkaiheng biological technologydevelopment Co.,Ltd.,Jiangsu Nantong 226011，China）

2（College ofnanoscience and technologyin the university ofscience and technology of China，Jiangsu Suzhou 226011，China）

3（Center ofanimal disease control and prevention in fengyangcity ofanhui province，Anhui Fengyang 233100，China）

比較自制的4-甲基傘形酮葡糖酸苷（MUG）與國際品牌的MUG在檢測食品中大腸桿菌活菌數的應用效果，研究結果表明，利用自制的MUG與品牌的MUG檢測食品中的大腸桿菌活菌數所得結果，對評價產品是否合格的具有相同效果，表明自制的MUG完全能夠替代國際品牌的MUG應用于檢測食品中的大腸桿菌活菌數。

大腸桿菌；快速檢測原料；4-甲基傘形酮葡糖酸苷；應用效果

The selfmade 4-Methylumbellifery-B-D-Glucuronide（MUG） and MUGofinternational brand were applied in checkingthe number ofEscherichia coli in food.The results showed that the application effect has no significant difference in qualified inspection.The studysuggest that selfmade MUGcan completelyreplace MUGof international brand used in checkingthe number ofEscherichia coli.

escherichia coli；rapid detection material；4-Methylumbellifery-B-D-Glucuronide；application effect

TS207.4

A

1673-6044（2017）01-0058-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.01.017

南通市港閘區小微企業科技創新項目（項目編號：2015D121）

** 李新章，男，1985年出生，2010年畢業于蘇州大學藥劑學專業，工程師。

2017-02-08