聯合檢測血清HCV-RNA、HCV-cAg與HCV-Ab對丙型肝炎的診斷價值分析

盧慶文，董婭，劉紅霞

(南陽市中心醫院，河南 南陽473009)

聯合檢測血清HCV-RNA、HCV-cAg與HCV-Ab對丙型肝炎的診斷價值分析

盧慶文，董婭，劉紅霞

(南陽市中心醫院，河南 南陽473009)

目的 探討聯合檢測血清HCV-RNA、HCV-cAg與HCV-Ab對丙型肝炎的臨床診斷價值。方法 收集本院2015年3月至2016年4月門診及住院部3000例受檢者的血清標本，均采用ELISA方法檢測血清HCV-cAg與HCV-Ab，采用PCR 技術對 HCV-cAg（+）/HCV-Ab(+)、HCV-cAg（-）/HCV-Ab(+)與 HCV-cAg（+）/HCV-Ab(-)血清標本進行血清 HCV-RNA檢測。以檢測出的血清HCV-RNA的陽陰性分為HCV-RNA陽性組和HCV-RNA陰性組，并計算兩組血清標本的靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值與Youden指數，通過卡方檢驗統計分析兩組結果的相關性。結果 在對3000例患者進行血清HCV-cAg 與 HCV-Ab 聯合檢測的血清標本中，共檢測出 HCV-cAg（+）/HCV-Ab(+)、HCV-cAg（-）/HCV-Ab(+)與 HCV-cAg（+）/HCV-Ab(-)血清標本有 60例，血清 HCV-RNA（+）有 50例，血清 HCV-RNA（-）有 10例。 算得血清 HCV-cAg的靈敏度為20.0%，血清HCV-Ab的靈敏度為95.3%，差異具有統計學意義（P＜0.05）；而血清HCV-cAg的陽性預測值為93.4%，血清HCV-Ab的陽性預測值為85.7%，差異具有統計學意義（P＜0.05），結果表明進行血清HCV-cAg與HCV-Ab聯合檢測可以提高血清HCV-RNA的檢出率。結論 血清HCV-cAg與HCV-Ab的聯合檢測可以互補兩者的缺點，提高血清HCV-RNA的臨床檢出率，有效降低丙型肝炎窗口期的漏檢率，對于丙型肝炎患者的早期發現、早期診斷、早期治療有著重要意義，此聯合檢測值得臨床廣泛推廣。

丙型肝炎病毒；丙肝病毒核心抗原；丙肝病毒抗體；靈敏度；陽性性檢出率

丙型肝炎（Hepatitis C，HC），簡稱丙肝，是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)感染引起的一種傳染性疾病，主要通過輸血、針頭注射和密切接觸等方式傳播，在中國人群中，其感染率高達3.2%[1]。此疾病起病隱匿，大多數病人無臨床癥狀，部分病人可發展為肝硬化、肝癌等，對病人健康安全造成極大威脅[2]。HCV是單股正鏈RNA病毒，呈球形，在核衣殼外包繞含脂質的囊膜，囊膜上有刺突[3]。臨床上主要通過對血清丙型肝炎RNA(Hepatitis CRNA，HCV-RNA）的檢出來來早期診斷患者是否感染HCV，并能采取有效治療早期阻斷HCV的傳播[4]。本研究對3000例本院門診及住院部血清標本進行聯合檢測丙型肝炎病毒核心抗原（Virus core antigen of hepatitis C virus，HCV-cAg）與丙型肝炎抗體(antibody of hepatitis C virus，HCV-Ab），對單項陽性或雙項陽性者再采用PCR技術進行HCV-RNA檢測，探討聯合檢測血清HCV-cAg與HCV-Ab對血清HCV-RNA檢出率的臨床價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象納入標準：年齡≧18歲；要進行丙型肝炎篩查者；愿意參加本次研究者。排除標準：符合納入標準者；無其他系統性致命疾病；不愿意參加本次研究者。收集本院2015年3月至2016年4月門診及住院部3000例受檢者的血清標本，其中男性受檢者為1408例，年齡為21～56歲，平均年齡為30.3±4.3歲，女性受檢者為1592例，年齡為23-55歲，平均年齡為34.3±5.3歲。

1.2 方法采用上海博谷生物科技有限公司的96T/48T規格的HCV-cAg ELISA試劑盒和Thermo MK3酶標儀對3000例受檢者血清進行HCV-cAg檢測，對HCV-cAg（+）陽性者進行二次復檢；采用上海博谷生物科技有限公司的96T/48T規格的HCV-Ab ELISA試劑盒和Thermo MK3酶標儀對3000例受檢者血清進行HCV-Ab檢測，對HCVAb（+）陽性者進行二次復檢；采用北京康源泰博生物科技有限公司的熒光定量PCR儀（Exicycler TM96）對3000例受檢者血清進行HCV-RNA測量，拷貝數＞1.0×103為HCV-RNA陽性。聯合檢測3000例受檢者血清HCV-cAg與HCV-Ab后，在單項陽性或雙項陽性的基礎上再進行PCR檢測，以血清HCV-RNA的陽陰性分為HCV-RNA陽性組和HCV-RNA陰性組。患者均在年齡、性別和病史等基本資料方面上無明顯差別統計學意義 （P＞0.05）。

1.3 評價指標分析比較兩組的HCV-RNA檢測率，通過靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值與Youden指數這些指標來比較兩組的HCV-RNA檢出率。

1.4 統計學處理經雙人錄入數據后，采用SAS 9.0統計軟件對實驗數據進行統計學處理。以百分率或例來表示計數資料，以均數±標準差（x±s）表示計量資料，通過卡方檢驗來比較兩組率，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清 HCV-RNA、HCV-cAg與 HCV-Ab的測定比較在3000例受檢者的血清標本中，HCV-cAg陽性有22例，陰性38例，HCV-Ab陽性有57例，陰性3例，HCV-RNA陽性有50例，陰性10例，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結果表明聯合血清HCV-cAg與HCV-Ab對血清HCV-RNA的陽性檢出率有一定相關性，兩者的聯合檢測可以提高血清HCV-RNA的陽性檢出率，結果詳見表1。

表1 血清HCV-RNA、HCV-cAg與HCV-Ab測定結果關系比較（例）

2.2 血清HCV-cAg與HCV-Ab聯合測定的比較在3000例受檢者的血清標本中，HCV-RNA（+）與HCV-cAg（+）者有 20 例，HCV-RNA（+）與 HCVAb（+）者共有 52 例，HCV-RNA（-）與 HCV-cAg（-）者有 4 例，HCV-RNA（-）與 HCV-Ab（-）者有 1例，兩組差異具有統計學意義（P＜0.05），結果表明兩者的聯合測定對血清HCV-RNA的陽性檢出率有一定相關性，能提高血清HCV-RNA的陽性檢出率，結果詳見表2。

2.3 比較血清HCV-cAg與HCV-Ab聯合測定結果分析其對HCV-RNA檢出率的診斷價值，在3000例受檢者的血清標本中，HCV-cAg靈敏度20.0%，HCV-Ab靈敏度95.3%，HCV-cAg的陽性預測值為93.4%，HCV-Ab的陽性預測值為85.7%，HCV-cAg的Youden指數為 72.7%，HCVAb的Youden指數為98.1%，兩者具有差異統計學意義（χ2=31.58，P＜0.05），結果表明兩者的聯合測定可以提高對HCV-RNA的靈敏度、特異性、陽性預測值和Youden指數，兩者的檢測可以相互補充，即能提高HCV的早期檢出率。

表2 血清HCV-cAg與HCV-Ab聯合測定結果關系比較（例）

表3 血清HCV-cAg與HCV-Ab聯合測定結果對HCV的診斷價值關系比較（%）

3 討論

丙肝是一種起病隱匿的傳染性疾病，早期不易發現，臨床上無明顯癥狀，但可逐步發展為肝硬化、肝癌[5]。血清HCV-RNA的檢測是感染HCV的診斷依據，臨床上常常以檢測血清HCV-RNA與HCV-Ab的陰陽性來判斷是否感染HCV[6]。有研究[7]發現，臨床上采用ELISA方法檢測血清HCVAb，靈敏度高達94.0%，特異性高達99.9%，且技術要求不高，價格便宜，易于實行，但抗體出現較晚，在感染HCV的早期，機體尚未產生HCV-Ab，所以血清HCV-Ab陰性不一定說明患者沒有感染HCV，早期感染有可能檢測不到HCV-Ab陽性，或者患者長期使用免疫抑制劑也會導致血清HCVAb檢測陰性，而且檢測到血清HCV-Ab陽性也不能區別是現癥感染或既往感染[8]。雖然檢測血清HCV-RNA陽性可診斷HCV感染，但其實驗技術要求高、設備昂貴、影響因素多，最重要的是窗口期短，大約為14d，臨床上作為常規檢測也不實際[9]。兩者的臨床檢測尚有一定的局限性，所以本次研究主要探討聯合檢測血清HCV-cAg與HCVAb在提高感染HCV診斷率的應用價值。

近年來有文獻[10，11]報道表明，血清 HCV-cAg與HCV-RNA同時出現，其檢測陽性表明HCV的早期感染，臨床上采用ELISA法檢測，技術要求不高，簡便易行，不需要添加特殊設備，在實驗室易于進行。

在本次研究的3000例患者進行HCV-cAg與HCV-Ab聯合檢測的血清標本中，共檢測出HCV-cAg（+）/HCV-Ab(+)、HCV-cAg（-）/HCV-Ab(+)與HCV-cAg（+）/HCV-Ab(-)血清標本 60 例，血清HCV-RNA（+）有 50 例，血清 HCV-RNA（-）有 10例。HCV-cAg陽性有22例，陰性38例，HCV-Ab陽性有57例，陰性3例，血清HCV-cAg的陽性預測值為93.4%，說明其可作為早期感染HCV的診斷指標。其中，發現在血清HCV-cAg陽性的標本中，有3例血清HCV-Ab陰性，但在3例血清HCV-Ab的基礎上再進行PCR檢測得有2例HCV-RNA陽性，溫先勇[12]等人指出這可能是患者在早期感染HCV時，機體尚未出現HCV-cAg，所以檢測到血清HCV-cAg為陰性。但在HCV-RNA陽性的結果中，發現有2例HCV-cAg陽性者，這說明血清HCV-cAg陽性與HCV-RNA陽性不是完全一致，吳大先[13]等人指出這有可能是因為ELISA檢測試劑盒的原因導致假陽性的結果，或者在長時間下HCV-RNA發生了降解而檢測出HCV-RNA陰性中。研究還發現，在3000例受檢者的血清標本中，HCV-cAg靈敏度20.0%，HCV-Ab靈敏度95.3%，HCV-cAg的陽性預測值為93.4%，HCV-Ab的陽性預測值為 85.7%，HCV-cAg的Youden指數為72.7%，HCV-Ab的Youden指數為98.1%，這說明聯合檢測可以提高兩者的靈敏度，陽性預測值，Youden指數，從而可以大大提高HCV的檢出率。但實驗結果發現在50例血清HCV-RNA陽性的標本中，有血清HCV-cAg的陽性率僅為40%，與文獻[14]報道一致。楊清梅[15]等人認為其原因可能是：由于標本的血清HCV-cAg深度較低，未達到酶學檢測下限或標本中血清HCV-cAg和用于核心抗原檢測的單克隆抗體競爭結合抗原而造成血清HCV-cAg假陰性；本研究所用的血清HCV-cAg檢測試劑盒主要檢測的是血清中游離的血清HCV-cAg，而不是總血清HCV-cAg，因而結合的HCV-cAg未被檢測出來[16]。

綜上所述，HCV-cAg與HCV-Ab的聯合檢測可以互補兩者的不足，提高血清HCV-RNA的臨床檢出率，有效降低丙型肝炎窗口期的漏檢率，對于丙型肝炎患者的早期發現、早期診斷、早期治療有著重要意義，此聯合檢測值得臨床廣泛推廣。

[1]侯麗，古麗娜爾·沙丁，朱有森.慢性乙型肝炎患者H BV DNA水平與肝臟病理相關性及影響因素[J].肝臟，2014，(11)：864-867.

[2]Dlouhy I，Torrente Má，Lens S，etal.Clinico-biological characteristics and outcome of hepatitis C virus-positive patientswith diffuse large B-cell lymphoma treated with immunochemotherapy[J].Ann Hematol，2017，96(3)：405-410.

[3]楊高中，楊生晟，湯雄.慢性乙型肝炎患者肝臟Fibroscan測量與肝臟穿刺病理檢查之間關系的分析[J].現代診斷與治療，2014，(12)：2819-2820.

[4]Choi J，Lim YS.Genetic-based Risk Assessment for Hepatocellular Carcinoma in Patients with Hepatitis C：Where Do We Stand?[J].EBioMedicine，2017，15：6-7.

[5]劉振專.丙型肝炎核心抗原與HCV-RNA含量的相關性研究[J].吉林醫學，2015，(11)：2236-2236.

[6]Ali M，Afzal S，Zia A，et al.A systematic review of treatment response rates in Pakistani hepatitis Cvirus patients；current prospects and future challenges[J].Medicine(Baltimore)，2016，95(50)：e5327.

[7]宋斌斌，周琰，吳文浩，等.丙型肝炎患者HCV RNA載量、肝臟纖維化指數與25羥基維生素D水平的相關性分析 [J].檢驗醫學，2015，(6)：575-580.

[8]Zhao LJ，He SF，Liu Y，et al.Inhibition of STAT Pathway Impairs Anti-Hepatitis C Virus Effect of Interferon Alpha[J].Cell Physiol Biochem，2016，40(1-2)：77-90.

[9]李婭，張赟，皇海，等.HCV-RNA 與 HCV-Ab，HCV-cAg相關性分析研究[J].現代檢驗醫學雜志，2016，31(5)：120-122.

[10]Alonso R，Pérez-García F，Ampuero D，et al.New direct-acting antivirals for patients with chronic HCV infection：can wemonitor treatment using an HCV core antigen assay?[J].Diagn Microbiol Infect Dis，2017，87(3)：243-246.

[11]El-Maadawy EA，Talaat RM，Sadek RF，et al.Hepatitis C Virus Associations with Non Hodgkin's Lymphoma：Insights on In ammation/Angiogenesis and CDMarkers[J].Asian Pac JCancer Prev，2016，17(9)：4415-4420.

[12]溫先勇，鄧劍，李寶林.自身免疫反應在丙型肝炎病變中的作用和影響[J].重慶醫學，2016，45(26)：3704-3707.

[13]吳大先，劉菲，劉洪波，等.轉錄介導擴增技術檢測慢性丙型肝炎患者血清中HCV RNA及與RT-PCR的比較 [J].中南大學學報（醫學版），2014，(7)：664-672.

[14]Maciocia N，O'Brien A，Ardeshna K.Remission of Follicular Lymphoma after Treatment for Hepatitis C Virus Infection[J].N Engl J Med，2016，375(17)：1699-1701.

[15]江春梅，仇衛民.乙型肝炎病毒外膜大蛋白與乙型肝炎病毒DNA的相關性探討 [J].國際檢驗醫學雜志，2015，(23)：3483-3484.

[16]彭澤軍.丙型肝炎患者血清中HCV抗體、HCV-RNA、ALT聯合檢測及臨床意義[J].實驗與檢驗醫學，2011，29(6)：635-636，662.

R512.6+3，R446.62，Q522

A

1674-1129(2017)05-0752-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.042

2017-04-18；

2017-08-06)