胚胎培養(yǎng)液對(duì)新生兒出生體重及身長(zhǎng)的影響

蔣益群　王珊珊　徐志鵬

[摘要] 目的 探索體外受精（IVF）/卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）新鮮分裂期胚胎移植周期中不同商品化胚胎培養(yǎng)液（Cook、Vitrolife）對(duì)新生兒出生體重及身長(zhǎng)的影響。 方法 回顧性分析2014年8月～2015年12月于南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心行IVF/ICSI術(shù)移植雙分裂期胚胎成功分娩的1441例患者臨床資料。根據(jù)分娩胎數(shù)和胚胎培養(yǎng)液不同進(jìn)行分組，單胎周期和雙胎周期分別分為Cook組和Vitrolife組。分別比較單胎組和雙胎組中兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)后新生兒的出生體重和身長(zhǎng)。 結(jié)果 單胎組中，Cook組新生兒出生體重及身長(zhǎng)較Vitrolife組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；雙胎組中，Cook組新生兒出生體重及身長(zhǎng)較Vitrolife組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 兩種商品化胚胎培養(yǎng)液（Cook、Vitrolife）在IVF/ICSI新鮮分裂期胚胎移植周期中對(duì)新生兒出生體重和身長(zhǎng)無(wú)顯著性影響。

[關(guān)鍵詞] 體外受精；胚胎培養(yǎng)液；出生體重；出生身長(zhǎng)

[中圖分類號(hào)] R714 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）09（c）-0112-04

[Abstract] Objective To investigate the effect of two commercial embryo culture media （Cook，Vitrolife） on the birthweight and length of newborns after fresh embryo transfer in IVF/ICSI. Methods The data of 1441 patients conceived through IVF/ICSI in Reproductive Medicine Center， the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School from August 2014 to December 2015 were analyzed retrospectively. According to the fetal number and embryo culture media， these patients were divided into two groups： singletons group and twins group， both the two groups included Cook and Vitrolife subgroups. The birthweight and length of newborns were compared in singletons and twins groups. Results There were no significant differences in birthweight and length of the newborns between the Cook and Vitrolife subgroups in singletons group （P > 0.05）； while there were no significant differences in birthweight and length between the Cook and Vitrolife subgroups in twins group （P > 0.05）. Conclusion It can be concluded that embryos cultured in Cook and Vitrolife media after fresh cleavage embryo transfer do not affect the birthweight and length of newborns.

[Key words] IVF； Embryo culture medium； Birthweight； Length

隨著質(zhì)量控制體系的逐步完善，商品化胚胎培養(yǎng)液逐步應(yīng)用于人類胚胎，例如Vitrolife、G5、Cook、HTF和Quinn′s advantage[1-2]。然而一些研究表明，不同培養(yǎng)體系會(huì)改變基因印記的表達(dá)，包括Igf2、H19和DMR2[3]，尤其DMR2甲基化的缺失會(huì)導(dǎo)致貝克威思-威德曼綜合征[4]。因此，許多研究人員已經(jīng)開(kāi)始關(guān)注培養(yǎng)液對(duì)新生兒圍生期結(jié)局的影響。有研究表明，Cook和Vitrolife兩種培養(yǎng)液對(duì)新鮮周期移植、凍融周期移植的新生兒出生體重均有顯著影響[5-7]。Kleijkers等[8]研究發(fā)現(xiàn)，出生后的體重差異至少會(huì)持續(xù)到2歲。然而，Eaton等[9]指出，G1.3、Global和G1.5三種培養(yǎng)液用于體外培養(yǎng)人類胚胎時(shí)不影響新生兒出生體重。另一研究表明，HTF和Sage兩種培養(yǎng)液對(duì)出生體重的影響亦沒(méi)有顯著性差異[10]。為了進(jìn)一步研究，本研究比較了兩種商品化胚胎培養(yǎng)液（Cook、Vitrolife）在胚胎培養(yǎng)移植后對(duì)新生兒出生體重和身長(zhǎng)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)2014年8月～2015年12月在南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心行常規(guī)體外受精（in vitro fertilization，IVF）或卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）治療并獲妊娠的1441例患者臨床資料進(jìn)行回顧性分析。患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①女方年齡≤35歲；②不孕年限<10年；③第1周期患者；④長(zhǎng)方案治療；⑤女方體重指數(shù)（BMI）為18～25 kg/m2；⑥孕齡>28周；⑦新鮮周期分裂期雙胚胎移植。排除標(biāo)準(zhǔn)：①種植前遺傳學(xué)診斷/篩查周期（PGD/PGS）；②供精；③失訪。根據(jù)出生胎數(shù)和胚胎培養(yǎng)液種類分組，其中，單胎組分為Cook組（n=198）和Vitrolife組（n=683）；雙胎組分為Cook組（n=135）和Vitrolife組（n=425）。endprint

1.2 控制性超促排卵方案

采用促性腺激素（Gn）釋放激素激動(dòng)劑（GnRh-a，曲普瑞林，德國(guó)Ferring公司）/基因重組促卵泡激素（Gonal F，果納芬，瑞士雪蘭諾公司）/人絨毛膜促性腺激素（HCG）長(zhǎng)方案進(jìn)行控制性超排卵。當(dāng)發(fā)現(xiàn)至少一個(gè)卵泡直徑>18 mm時(shí)，注射HCG 10 U（Serono，Aubonne，瑞士），并于36 h后經(jīng)陰道B超引導(dǎo)下取卵。

1.3 卵子采集及胚胎培養(yǎng)

取卵當(dāng)日，卵泡穿刺獲得卵冠丘復(fù)合物，置于受精培養(yǎng)液IVF（Vitrolife，Sweden）或FM（Cook，Sydney）中培養(yǎng)3 h，卵母細(xì)胞經(jīng)IVF或ICSI術(shù)受精后轉(zhuǎn)移至卵裂培養(yǎng)液G1（Vitrolife，Sweden）或CM（Cook，Sydney）。16～18 h后將培養(yǎng)皿置于倒置顯微鏡（OLYMPUS IX71）下觀察原核。受精后44 h及68 h在倒置顯微鏡下評(píng)估胚胎質(zhì)量。

1.4 胚胎評(píng)估

根據(jù)ALPHA/ESHRE指南對(duì)胚胎質(zhì)量分級(jí)評(píng)估[11]，分裂期胚胎根據(jù)細(xì)胞數(shù)、卵裂球均一度、碎片等形態(tài)學(xué)參數(shù)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，其中，分裂胚細(xì)胞數(shù)7～12個(gè)、碎片小于20%、均一或輕度不均為優(yōu)質(zhì)胚胎。

1.5 移植與妊娠

取卵后第3天挑選兩枚優(yōu)質(zhì)分裂胚，于B超引導(dǎo)下進(jìn)行宮腔內(nèi)胚胎移植。胚胎移植后2周留晨尿行早孕檢查，陽(yáng)性結(jié)果確定為生化妊娠。移植后4周B超檢查，見(jiàn)妊娠囊者確診為臨床妊娠。

1.6 觀察指標(biāo)

收集所有患者的病例資料及一般信息，詳細(xì)記錄分娩孕齡、新生兒性別、出生體重、身長(zhǎng)等。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

單胎組共881例，其中，Cook組198例，Vitrolife組683例，兩組女方年齡，不孕年限，女方體重、身高、BMI及臨床不孕因素、ICSI比例等比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。雙胎組共560例，其中，Cook組135例，Vitrolife組425例，兩組女方年齡，不孕年限，女方體重、身高、BMI，ICSI比例，男性因素，輸卵管因素，男性及輸卵管因素，子宮內(nèi)膜異位癥等比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 不同培養(yǎng)液對(duì)新生兒圍生期結(jié)局的影響

單胎組中，Cook組與Vitrolife組相比孕齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；新生兒體重與身長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；新生兒中男孩比例和早產(chǎn)兒比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；低體重兒和巨大兒比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。雙胎組中，Cook組與Vitrolife組孕齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；新生兒體重與身長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；新生兒中男孩比例和早產(chǎn)兒比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；低體重兒差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

各生殖中心使用的商品化胚胎培養(yǎng)液，營(yíng)養(yǎng)成分的類型和含量都有很大的差別[12]。同時(shí)，大多數(shù)商品化培養(yǎng)液都被證實(shí)含有未公開(kāi)的蛋白成分，這些蛋白成分可能影響種植前的胚胎發(fā)育、孕齡以及出生體重[13]。Carrasco等[14]研究Vitrolife、Cook兩種培養(yǎng)液在氨基酸組成上有很大差異，Chronopoulou等[15]的文章中指出氨基酸在胚胎發(fā)育的穩(wěn)態(tài)平衡調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。因此，胚胎培養(yǎng)液對(duì)體外胚胎的發(fā)育可能有一定的影響。本研究主要比較Vitrolife和Cook兩種商品化培養(yǎng)液對(duì)新生兒圍生期結(jié)局的影響，結(jié)果顯示，新生兒出生體重和身長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），同時(shí)，孕齡、性別比例、早產(chǎn)兒比例、低體重兒和巨大兒比例差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。

Dumoulin等[5]報(bào)道在新鮮周期分裂胚移植中，胚胎培養(yǎng)于Cook培養(yǎng)液的單胎出生體重顯著低于Vitrolife培養(yǎng)液。然而導(dǎo)致這個(gè)結(jié)果的原因可能是在Cook培養(yǎng)液中培養(yǎng)的移植胚胎有更少的卵裂球數(shù)目，且Cook組中胎兒母親也更矮小，體重更低，這也會(huì)影響到胎兒的體重，同時(shí)，這篇研究的樣本數(shù)也相對(duì)較少。Nelissen[6-7]發(fā)現(xiàn)在雙胎妊娠和冷凍胚胎中使用Cook培養(yǎng)液的新生兒體重更低。然而，在Cook組中低出生體重的人數(shù)較多，同時(shí)在Vitrolife組中發(fā)現(xiàn)5個(gè)高孕齡產(chǎn)婦，而Cook組中未發(fā)現(xiàn)。最近的研究發(fā)現(xiàn)使用不同的培養(yǎng)液后新生兒出生體重?zé)o顯著差異。比如，Lin等[16]在2013年的文章中回顧性研究了在分裂期胚胎移植周期中3種商品化培養(yǎng)液G5、Global和Quinn′s advantage media對(duì)單胎組和雙胎組的新生兒出生體重及身長(zhǎng)均無(wú)顯著影響。Gu等[17]在大樣本量回顧性研究中比較了Vitrolife和SAGE兩種商品化胚胎培養(yǎng)液在新鮮周期和冷凍周期移植中，對(duì)單胎新生兒出生體重的影響無(wú)顯著性差異。Wunder等[18]研究了Cook和Vitrolife兩種商品化培養(yǎng)液對(duì)單胎中新生兒出生體重?zé)o顯著性影響。Carrasco等[14]前瞻性和回顧性研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)Cook、Medicult和Vitrolife三種培養(yǎng)液對(duì)單例新生兒的出生體重有影響。這幾項(xiàng)研究結(jié)果與本研究一致。

有趣的是，不同人類胚胎培養(yǎng)液在不同的動(dòng)物模型中可以產(chǎn)生不同的基因表達(dá)和DNA甲基化模式。很多動(dòng)物研究表明，胚胎培養(yǎng)液影響基因表達(dá)[19-20]。在體外培養(yǎng)液中胚胎為了維持基因印記會(huì)做出不同的表觀遺傳學(xué)改變，這段時(shí)間特別敏感，任何表觀遺傳變化都可能改變胚胎生存方式，促使其適應(yīng)次優(yōu)的體外環(huán)境。而這些變化可能最終會(huì)影響到小鼠胎兒圍生期結(jié)局，如胎兒生長(zhǎng)和出生體重、葡萄糖代謝和瘦素水平、血壓和血管的變化問(wèn)題。并且，通過(guò)輔助生殖出生的小鼠已經(jīng)被證明表現(xiàn)出異常行為[21-22]。因此，胚胎培養(yǎng)液對(duì)胚胎表觀遺傳學(xué)的改變以及后續(xù)影響仍需更深入的研究。endprint

Zhu等[23]的研究結(jié)果顯示，單囊胚移植后獲得單胎的新生兒出生體重顯著高于單分裂期胚胎移植后的單胎新生兒。Makinen等[24]的研究結(jié)果中也發(fā)現(xiàn)囊胚移植后大胎齡兒的比例顯著高于第2天移植者。然而，本研究中只比較了分裂期胚胎移植的胎兒結(jié)局，并未涉及囊胚期培養(yǎng)。胚胎培養(yǎng)液對(duì)胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育有一定影響，這就涉及培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)和囊胚培養(yǎng)的安全性問(wèn)題。在以后的研究中，筆者將重點(diǎn)關(guān)注胚胎培養(yǎng)液對(duì)囊胚期移植患者圍生期結(jié)局的影響。

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（收稿日期：2017-06-07 本文編輯：程 銘）endprint