橡膠草3—羥基—3—甲基戊二酰輔酶A基因表達的初步分析

趙李婧　曹新文　李永梅

摘要：分析橡膠草HMGR基因的表達情況，構建原核表達載體，轉化BL21菌株并誘導表達。構建細胞融合表達載體，轉化GV3101菌株并侵染洋蔥表皮細胞，在共聚焦顯微鏡下觀察基因表達情況。構建植物過表達載體并侵染煙草，利用紫外分光光度法檢測三萜含量的變化。通過IPTG誘導和SDS-PAGE檢測，獲得分子量為62659 1 ku的蛋白，與預期蛋白相符合，且37 ℃誘導6 h時表達最明顯；通過激光共聚焦顯微鏡觀察，該基因主要在細胞膜上表達；紫外可見分光光度法表明轉基因煙草中三萜的含量高于空白煙草。橡膠草HMGR基因分別在大腸桿菌、洋蔥鱗片內表皮和煙草中成功表達。

關鍵詞：橡膠草；HMGR基因；原核表達；亞細胞定位；總三萜提取物

中圖分類號： Q786文獻標志碼：

文章編號：1002-1302（2017）16-0042-04

收稿日期：2016-03-31

基金項目：國家自然科學基金（編號：31360060）。

作者簡介：趙李婧（1989—），女，山西晉城人，碩士研究生，主要從事植物基因工程的研究。E-mail：851409674@qqcom。

通信作者：閆潔，博士，副教授，主要從事生物化學和分子生物學教學和科研工作。E-mail：1653842328@qqcom。

天然橡膠的生物合成是通過產膠植物體內的異戊二烯代謝途徑完成的，而3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMGR）基因及其啟動子是該代謝途徑中的關鍵限速酶基因，它控制著碳流的流向和代謝反應速率，也是萜類化合物代謝調控的重要位點。目前，已經從橡膠樹、水稻、甘草、皂苷、陽春砂、三七、雷公藤、擬南芥、番茄、杜仲等植物中克隆得到了該酶的基因及其啟動子，它們以基因家族的形式存在并控制著代謝途徑中產物的合成[2-11]。……