血清HSP90α和VEGF在原發(fā)肝癌中的表達(dá)及臨床意義

宋海濤 劉國香 盛玉龍 張丹丹 胡佳璐 路中

血清HSP90α和VEGF在原發(fā)肝癌中的表達(dá)及臨床意義

宋海濤 劉國香 盛玉龍 張丹丹 胡佳璐 路中

目的研究血清人熱休克蛋白90α（HSP90α）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在原發(fā)肝癌患者中的表達(dá)水平及對原發(fā)肝癌早期診斷的臨床意義。方法通過酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）測定53例原發(fā)初診肝癌患者、40例肝硬化患者及50例健康體檢者的血清HSP90α和VEGF水平，用受試者工作特征曲線（ROC）比較HSP90α和VEGF相對于AFP診斷原發(fā)性肝癌的價值。結(jié)果相較于肝硬化組和對照組，血清HSP90α和VEGF在肝癌組中的表達(dá)水平較高（P＜0．05）；相較于對照組，同期住院的肝硬化組患者血清HSP90α和VEGF的水平較高（P＜0．05）。血清HSP90α和VEGF診斷原發(fā)性肝癌的敏感度均高于甲胎蛋白（AFP）。兩種聯(lián)合檢測的敏感度和特異性為0．823和0．731，較其中任一種均有提高。ROC曲線表明聯(lián)合檢測的曲線下面積（AUC），高于其中一種腫瘤標(biāo)記物檢測的AUC。結(jié)論血清HSP90α與VEGF在肝癌的診斷中敏感度跟特異性均高于AFP；血清HSP90α與VEGF的聯(lián)合檢測可協(xié)助AFP提高檢出原發(fā)性肝癌的可能性。

原發(fā)性肝癌；人熱休克蛋白90α；血管內(nèi)皮生長因子

過去二十年里，與肝癌相關(guān)的年度死亡率增加，肝癌已成為第二大全球癌癥相關(guān)死因[1]。在我國，每年約有近四十萬人死于肝癌，占全球因肝癌死亡總?cè)藬?shù)的半數(shù)以上，男性死亡率（37.4/100 000）高于女性（14.3/100 000）[2]。因此肝癌是不僅是全球更是我國的主要公共衛(wèi)生問題。研究表明，約80%的肝癌患者曾有乙型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）感染史，特別是在確定的肝硬化或晚期纖維化的情況下[3]。因此按時對肝硬化患者進(jìn)行肝癌篩查，是很有必要的。甲胎蛋白（alphafetoprorein，AFP）作為肝癌的腫瘤標(biāo)志物使用最為廣泛，但因其靈敏度和特異度不高，并且不推薦用于肝癌的高危人群[4]，尋找彌補(bǔ)或替代AFP不足的肝癌腫瘤標(biāo)志物已成為肝癌早期診斷的重要工作。本研究通過檢測原發(fā)肝癌患者血清中AFP，人熱休克蛋白90α（HSP90α）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）濃度水平，研究血清HSP90α和VEGF在原發(fā)肝癌的表達(dá)及其相關(guān)臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2016年1月—2017年1月原發(fā)性肝癌住院患者53例納入肝癌組，其中男性40例，女性13例；年齡30～75歲，平均（50.3±8.1）歲。肝硬化組為40例同期住院的肝硬化患者；對照組為50例同期住院的健康體檢者。肝硬化組患者男性21例，女性19例；年齡36～80歲，平均（46.4±7.8）歲。對照組男性31例，女性19例；年齡18～80歲，平均（48.0±7.5）歲。肝癌組患者均為初治，并經(jīng)肝穿刺或術(shù)后病理診斷明確診斷為原發(fā)性肝癌。3組臨床資料之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有入組患者于清晨空腹抽取靜脈血5 ml，存于乙二胺四乙酸（EDTA）試管，人工搖勻，在4℃離心機(jī)2 500 R離心15 min，取2 ml上層血清置于冷凍管。完成上述操作后，放置于-80℃冰箱以備后續(xù)使用。為使平衡溫度，所有血清標(biāo)本于測試開始前放置于4℃～8℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行復(fù)溫。AFP檢測采用羅氏E601電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)及配套試劑。HSP90α和VEGF采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測，HSP90α與VEGF試劑盒均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用P50（P25～P75）表示，多組間比較采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較，并采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，ROC曲線用于確定HSP90α、VEGF診斷肝癌的閾值，并比較其在肝癌診斷中的敏感度和特異性，P＜0.05，提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種血清標(biāo)志物在3組血清中的濃度比較

肝癌組患者血清AFP、HSP90α和VEGF的濃度高于肝硬化組和對照組（P＜0.05）；肝硬化組患者血清HSP90α和VEGF濃度高于對照組（P＜0.05），AFP的濃度在肝硬化組患者和對照組患者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 三組腫瘤標(biāo)志物的血清濃度比較P50（P25～P75）

2.2 4種腫瘤標(biāo)志物診斷原發(fā)性肝癌的價值比較

3種標(biāo)志物對診斷原發(fā)性肝癌的敏感度依次分別為HSP90α（0.811）VEGF（0.755）和AFP（0.698）；特異性由高到低依次為 VEGF（0.660）、HSP90α（0.720） 和 AFP（0.580）。 其 中HSP90α和VEGF的敏感度和特性高于AFP（P＜0.05）。兩種標(biāo)記物聯(lián)合檢測的敏感度和特異性為0.823和0.731，高于任何一種標(biāo)志物（P＜0.05），見表2。通過繪制ROC曲線計(jì)算聯(lián)合檢測的曲線下面積（AUC）為0.817，高于其中單獨(dú)任一種腫瘤標(biāo)志物的AUC，見圖1。

表2 4種腫瘤標(biāo)志物診斷原發(fā)性肝癌的價值比較

圖1 4種腫瘤標(biāo)志物檢測原發(fā)性肝癌的ROC曲線

3 討論

肝癌是第六大全球常見癌癥，占男性第五位（占總數(shù)的7.5%），女性第九位（占總數(shù)的3.4%）。每年診斷出約78 200例新病例。肝癌預(yù)后非常差（總體死亡率為發(fā)病率的95%）。最為常見肝癌病理類型是肝細(xì)胞癌（HCC），還有其他類型的肝癌，如肝膽管細(xì)胞癌和混合型肝癌。約80%的肝癌病例是由乙型肝炎病毒（HBV）和（或）丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的，特別是在有肝硬化或晚期肝纖維化的情況下，發(fā)生肝癌可能性增大。肝硬化是肝癌發(fā)展的最大最直接風(fēng)險因素，合并肝硬化的患者占肝原發(fā)性肝癌患者的70%～90%。因此，肝癌的早期診斷非常重要。

AFP是目前對原發(fā)性肝癌篩選、檢測和隨訪最常用的指標(biāo)。但有充足的研究分析表明，AFP檢測缺乏足夠的敏感性和特異性[5-7]。AFP水平尤其是在肝癌早期呈現(xiàn)低敏感性，而在肝硬化患者或慢性肝炎或膽管癌等情況下AFP卻可為陽性。因此AFP對原發(fā)性肝癌的診斷、特別是早期診斷，是不讓人滿意的。VEGF在血管生成中起了刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，增加血管通透性的重要作用。而實(shí)體腫瘤的發(fā)展與血管生成密切相關(guān)[8]。HSP90α參與PI3KAkt信號通路和許多其他癌癥相關(guān)途徑，并與肝癌轉(zhuǎn)移行為密切相關(guān)。HSP90α具備作為肝癌的潛在生物標(biāo)志物的潛質(zhì)[9]。

本研究通過檢測53例原發(fā)性肝癌患者血清AFP、HSP90α和VEGF的水平 ，結(jié)果顯示，相比于健康對照組，3種腫瘤標(biāo)志物在肝癌患者血清中均出現(xiàn)升高，其中HSP90α和VEGF的診斷敏感度和特異性較高。在肝硬化患者的血清中，血清AFP、HSP90α和VEGF水平也出現(xiàn)了升高，但是與健康對照組患者比較，只有HSP90α和VEGF的升高與對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而AFP的升高無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ROC曲線分析表明HSP90α和VEGF的AUC均高于AFP，分別達(dá)到0.746和0.776，通過聯(lián)合2種標(biāo)志物檢測，可增加其診斷優(yōu)勢，曲線下面積達(dá)到0.817，可見HSP90α和VEGF聯(lián)合檢測提高了原發(fā)性肝癌的檢出率。

綜上所述，血清HSP90α和VEGF的檢測可協(xié)助AFP診斷原發(fā)性肝癌，聯(lián)合HSP90α和VEGF可提高原發(fā)性肝癌的檢出率。HSP90α和VEGF對肝硬化也具有一定的診斷價值。

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The Expression and Clinical Significance of Serum HSP90 Alpha and VEGF in Primary Liver

SONG Haitao LIU Guoxiang SHENG Yulong ZHANG Dandan HU Jialu LU Zhong Department of Oncology, Affiliated Hospital of Weifang Medical University, Weifang Shandong 261031, China

ObjectiveTo study the expression level of HSP90 alpha(HSP90 alpha) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in patients with primary liver cancer and the clinical significance of early diagnosis of primary liver cancer.MethodsSerum HSP90 alpha and VEGF levels were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 53 patients with primary liver cancer, 40 patients with cirrhosis and 50 health checkers, and the value of HSP90 alpha and VEGF in the diagnosis of primary hepatocellular carcinoma was compared with receiver operatingcharacteristic curve(ROC).ResultsCompared with the liver cirrhosis group and the control group, serum HSP90 alpha and VEGF were markedly higher in the primary liver cancer group (P ＜ 0.05). Compared to the control group, the serum HSP90 alpha and VEGF were markedly higher in the patients with liver cirrhosis in the same period (P ＜ 0.05). In the sensitivity of the diagnosis of primary liver cancer, serum HSP90 alpha and VEGF were better than the AFP. The sensitivity and specificity of the joint detection of two tumor markers were 0.823 and 0.731, which were higher than any of them. The ROC indicates that the area under the curve (AUC)of the combined assay was significantly higher than that of one of the tumor markers.ConclusionThe sensitivity and specificity of serum HSP90α and VEGF in the diagnosis of hepatocellular carcinoma were higher than that of AFP. The combination of serum HSP90 alpha and VEGF can help AFP significantly improve the likelihood of detection of primary liver cancer.

primary liver cancer; HSP90α; VEGF

R575

A

1674-9316（2017）22-0044-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．22．021

山東省濰坊市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（名稱：駱駝蓬堿調(diào)控PPARγ途徑逆轉(zhuǎn)慢性肝病肝纖維化的機(jī)制研究 編號：B17112-068）

山東省濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，山東 濰坊 261031通信作者：路中