對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展的認(rèn)識(shí)

● 於瑞敏 陳贏

對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展的認(rèn)識(shí)

● 於瑞敏 陳贏

單克隆抗體是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要內(nèi)容，本文對(duì)單克隆抗體的類別進(jìn)行了簡(jiǎn)單分析，并且明確指出了現(xiàn)階段應(yīng)用的多種單克隆抗體制備技術(shù)，同時(shí)，也對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展進(jìn)行了一定的介紹，希望能夠?yàn)槲覈?guó)生命科學(xué)研究事業(yè)的發(fā)展提供一定的理論支持。

單克隆抗體;制備技術(shù);應(yīng)用研究

在分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展的影響下，單克隆抗體技術(shù)逐漸被應(yīng)用在多個(gè)領(lǐng)域。單克隆抗體就是用特定的培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生長(zhǎng)又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過多年的研究，相關(guān)科研人員已經(jīng)意識(shí)到單克隆抗體技術(shù)對(duì)于科研發(fā)展的重要性，所以，我國(guó)加強(qiáng)了對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)的重視，不斷提高單克隆抗體制備技術(shù)水平。

1 單克隆抗體的類別

1.1 人源化抗體

抗體的人源化改造主要是對(duì)抗體進(jìn)行表面重塑或者重新構(gòu)造，其中，表面塑造是指對(duì)鼠源抗體特殊區(qū)域表面的氨基酸進(jìn)行重新塑造，這種方式具有一定的局限性，這只適合在與人抗體具有明顯差異的表面氨基酸，利用與人抗體相似的氨基酸殘基對(duì)其進(jìn)行替換，從而提高抗體與抗原的特異性結(jié)合;重構(gòu)抗體，是目前應(yīng)用最常見的基本方法，其中的互補(bǔ)決定區(qū)移植抗體是通過對(duì)鼠源抗體上的互補(bǔ)決定區(qū)，經(jīng)過分子克隆后，克隆到人體抗體與之相對(duì)應(yīng)的區(qū)域內(nèi)，但這種方法仍會(huì)存在非人源基因的少量殘留，仍存在因其人體免疫排斥的可能[1]。

1.2 嵌合單克隆抗體

圖1 小鼠單克隆抗體制備

自從單克隆抗體技術(shù)出現(xiàn)以來，單抗制備技術(shù)的一般流程就是從具有抗原免疫的小鼠中獲取它的脾細(xì)胞，再將其與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合處理，最后對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行克隆，從而培養(yǎng)出既能分泌抗體又能穩(wěn)定生長(zhǎng)的克隆細(xì)胞(如圖1)。首先，免疫細(xì)胞表面F鍛受體親和力弱，產(chǎn)生的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用較弱，而且它與人補(bǔ)體成分結(jié)合能力低，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力較弱，并且鼠源性抗體在人血循環(huán)中的半衰期短，它發(fā)揮細(xì)胞毒作用的時(shí)間較短;其次，鼠單克隆抗體具有自身的免疫原性，這極易導(dǎo)致宿主發(fā)生過敏反應(yīng)，這樣不僅會(huì)影響單抗的效價(jià)，而且會(huì)嚴(yán)重影響病人的身體狀況，所以，為了更好的應(yīng)用于臨床治療，相關(guān)人員還需要對(duì)鼠源單克隆抗體做進(jìn)一步的完善。

2 單克隆抗體制備技術(shù)

2.1 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)

噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)主要是促進(jìn)基因表達(dá)產(chǎn)物與親和選擇相結(jié)合的一種技術(shù)，它的實(shí)施載體是被改造的噬菌體，在噬菌體外殼蛋白質(zhì)基因區(qū)域插入待選基因片段，這就使得蛋白質(zhì)或者外源多肽的表達(dá)產(chǎn)物呈現(xiàn)在噬菌體的表面，進(jìn)而通過親和富集法表達(dá)有特異膚或蛋白質(zhì)的噬菌體，該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了基因型和表型的轉(zhuǎn)換。利用這種方式，促使一個(gè)具有上億個(gè)體外方式獲得的不同抗體基因數(shù)據(jù)庫(kù)的形成，使從真實(shí)的抗原中迅速分離高度相似的同族抗體成為可能，得到的抗體可用于制備完全人源化抗體。

2.2 核糖體展示技術(shù)

核糖體展示技術(shù)的基本原理就是利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，使其形成DNA文庫(kù)，同時(shí)，將啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)等加入其中，并且將它們放置在具有藕聯(lián)轉(zhuǎn)錄翻譯的無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)中進(jìn)行發(fā)育，在核糖體表面上承載目的基因的翻譯產(chǎn)物，并且形成mRNA—蛋白質(zhì)—核糖體的三元復(fù)合體，最后通過常規(guī)的免疫學(xué)檢測(cè)方法，通過固相化的靶分子直接從三元復(fù)合體中篩選出感興趣的核糖體復(fù)合體，再利用RTPLR擴(kuò)增，經(jīng)過多次循環(huán)過程，最終篩選出高親和力的目標(biāo)分子[2]。

3 單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用前景

3.1 應(yīng)用于疾病的檢測(cè)

單克隆抗體可以對(duì)病原體類型進(jìn)行準(zhǔn)確識(shí)別，并且針對(duì)感染性疾病能夠進(jìn)行精確判斷。同時(shí)，單克隆抗體還可以通過檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面分子，并且能夠判斷出淋巴細(xì)胞的分化階段。其中，激素類單克隆抗體能夠測(cè)定人體內(nèi)的激素含量，并且利用該信息可以對(duì)體內(nèi)的內(nèi)分泌情況進(jìn)行判斷。

3.2 應(yīng)用于疾病的臨床治療

單克隆抗體可以針對(duì)多種疾病進(jìn)行治療，其中對(duì)腫瘤臨床治療具有明顯的效果。單克隆抗體治療腫瘤的方式主要有生物導(dǎo)彈和純抗體兩種，現(xiàn)階段已有幾十種特異性單克隆抗體應(yīng)用于臨床治療，推動(dòng)了腫瘤治療技術(shù)的發(fā)展。

3.3 均應(yīng)用于疾病的預(yù)防

人體免疫主要由自身主動(dòng)免疫及特異性免疫等構(gòu)成，特異性免疫屬于被動(dòng)免疫，在抗原侵入人體后，在人體內(nèi)部加入抗體，對(duì)病原體進(jìn)行中和及清除，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的預(yù)防。主動(dòng)免疫是指在對(duì)病原體進(jìn)行減毒化操作后，將其接種到人體內(nèi)，使人體產(chǎn)生一定的免疫，促使體內(nèi)的抗體對(duì)其產(chǎn)生相應(yīng)的記憶，比如，對(duì)人體接種卡介苗等。雖然這兩種免疫方式有所不同，但是，它們都可以利用單克隆抗體技術(shù)進(jìn)行免疫。

4 結(jié)束語(yǔ)

本文通過對(duì)單克隆抗體的類別、單克隆抗體制備技術(shù)、單克隆抗體制備技術(shù)應(yīng)用前景的研究分析，明確了單克隆抗體制備技術(shù)對(duì)于我國(guó)科學(xué)研究事業(yè)發(fā)展的重要作用。單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用研究主要體現(xiàn)在用于疾病的檢測(cè)、治療及預(yù)防等方面，這充分的體現(xiàn)出了單克隆抗體制備技術(shù)不僅關(guān)乎科學(xué)事業(yè)的發(fā)展，而且還關(guān)系到人類的健康水平，所以，加強(qiáng)對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

(作者單位：基蛋生物科技股份有限公司)

[1]郭粉粉,梁文波,張學(xué)梅.單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2011,08：1129-1131.

[2]張力文.單克隆抗體制備技術(shù)的類別與應(yīng)用[J].科技風(fēng) ,2017,03：256.