不同濃度D+半乳糖致大鼠卵巢早衰的實驗研究

包秀芳，孫 萍

（1.內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028000；2.內蒙古民族大學臨床醫學院，內蒙古 通遼 028000）

不同濃度D+半乳糖致大鼠卵巢早衰的實驗研究

包秀芳1.2，孫 萍1.2

（1.內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028000；2.內蒙古民族大學臨床醫學院，內蒙古 通遼 028000）

目的探討不同濃度D＋半乳糖致大鼠卵巢早衰的結果。方法選取9～12周齡SPF級大鼠58只，并按照隨機平均的原則，將其分為實驗組與對照組。實驗組與對照組各29只大鼠，所有大鼠均予以35%半乳糖食物丸以及20%標準食物丸。在飼養的第80d，對大鼠體內半乳糖、E2、FSH、清蛋白水平以及總蛋白進行血檢測，并對大鼠行促排卵檢查對大鼠卵巢功能實施檢查。利用光鏡對大鼠卵巢以及肝組織形態學變化進行觀察。結果經過比較發現，實驗組E2、清蛋白水平顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論通過在大鼠中利用35%半乳糖產生的代謝作用，發現建立卵巢早衰動物模型可行性較高，可為卵巢早衰患者生育治療問題提供一定依據。

不同濃度；D＋半乳糖；大鼠；卵巢早衰

卵巢早衰指的是卵巢功能提前衰退，主要在40歲之前婦女所出現的非生理性停經，常伴有繼發或原發不育、雌二醇下降、生殖器萎縮等等。該種疾病在人群中的發病率為2%左右，在閉經患者中占據8%左右。就現今來看，對POF患者實施人體在體研究，或直接獲取人體卵巢用于研究的難度較大，因而，在臨床研究時，許多學者都尋找可靠性較高的方式進行，深入研究卵巢早衰的情況[1]。建立卵巢早衰的動物模型就是其中較為可行的一種研究思路。為了驗證這種研究方式的有效性，本文選取9～12周齡SPF級大鼠58只，并按照隨機平均的原則，將其分為實驗組與對照組。實驗組與對照組各29只大鼠，分別予以35%半乳糖食物丸以及20%標準食物丸，發現在大鼠中利用35%半乳糖產生的代謝作用，提示建立卵巢早衰動物模型可行性較高，可為卵巢早衰患者生育治療問題提供一定依據。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取9～12周齡SPF級大鼠58只，并按照隨機平均的原則，將其分為實驗組與對照組。實驗組與對照組各29只大鼠，雌性，體重200～400 g。保持實驗大鼠每日自由進食進水，光照時間為12 h。

1.2 模型建立方法

實驗組大鼠喂半乳糖食物丸，其中碳水化合物64%，蛋白質含量28%，脂肪6%，復合礦物質8%，復合維生素1%，半乳糖27%[2]。對照組大鼠喂正常食物丸，碳水化合物含量65%，蛋白質含量19%，脂肪7%，復合礦物質7%，復合維生素2%。所有大鼠飼養時間為80d，利用陰道脫落細胞涂片對大鼠動情周期進行測定。

1.3 血清性激素、半乳糖水平以及肝功能測定

采用陰道脫落細胞涂片測定大鼠動情期，并對大鼠體重進行稱重，眼眥靜脈缺血，離心血液標本，將取得的血清保存在-20℃條件下保存。利用放免法對大鼠血清E2、FSH水平進行測定，利用半乳糖氧化酶法對大鼠血清半乳糖水平進行測定，利用雙縮脲法以及溴甲酚綠對血清中總蛋白以及清蛋白濃度進行測定。

1.4 肝組織及卵巢形態學觀察

利用陰道脫落細胞涂片測定大鼠動情期，斷頸處死大鼠，去除大鼠肝臟及側卵巢，并稱重，利用10%甲醛對其固定后，作光鏡切片。

1.5 統計學方法

采用SPSS18.0統計學軟件進行處理，計數資料采用x2檢驗，計量資料以表示，采用t 檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 肝組織光鏡檢查

實驗組大鼠經肝細胞病理切片僅發現出現少量顆粒樣改變，對照組大鼠檢驗發現出現肝細胞紅染，并出現顆粒大小一致的情況。

2.2 大鼠血清E2、FSH、半乳糖、總蛋白、清蛋白水平比較

經過比較發現，實驗組E2、清蛋白水平顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。但實驗組FSH、半乳糖以及總蛋白水平與對照組相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 兩組大鼠血清E2、FSH、半乳糖、總蛋白、清蛋白水平比較

3 討 論

在本次實驗中，通過給大鼠喂養濃度不同的半乳糖食物丸，在飼養80 d后，對大鼠血清中的半乳糖含量進行檢測。喂養濃度存在差異的半乳糖食物丸，飼養80 d后，檢測大鼠血清中含有的半乳糖。將其與正常組別比較，發現大鼠體內半乳糖含量明顯增加，導致大鼠代謝物出現蓄積，進而導致機體代謝出現較為嚴重的紊亂，表現在大鼠肝功能受損，清蛋白含量減少。尤其半乳糖含量較高條件下，也會導致大鼠肝細胞切片出現壞死或變性。卵巢萎縮以及重量減輕也會導致卵巢組織中卵泡發育出現受阻[3-4]。通過本次實驗，發現在大鼠中利用35%半乳糖產生的代謝作用，提示建立卵巢早衰動物模型可行性較高，可為卵巢早衰患者生育治療問題提供一定依據。

[1] 王 冰,王旭東.中醫藥對不同卵巢早衰模型治療的研究進展[J].醫學綜述,2016,06:1156-1159.

[2] 楊玉彬,劉 琛,李 瓊.加味八珍方對卵巢早衰的作用[J].廣東醫學,2016,20:3013-3015.

[3] 馬靈芝,金季玲,夏 天.補腎調沖方對半乳糖致卵巢早衰大鼠卵巢功能的影響[J].江蘇中醫藥,2011,06:91-92.

[4] 朱萱萱,王海丹,倪文鵬,等.烏鱉顆粒拮抗D半乳糖致小鼠卵巢早衰的實驗研究[J].中華中醫藥學刊,2011,10:2179-2181.

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ISSN.2095-8803.2017.15.073.02

內蒙古自治區自然科學基金項目（No.2016MS08122)