液滴數字聚合酶鏈式反應芯片及其在致病菌檢測中的應用

鄧雪蕾，張苑怡，袁浩鈞，劉松生，陳瑩瑩，郜晚蕾，周洪波，賈春平，趙建龍，卞曉軍,3,4*

(1.上海海洋大學 食品學院，上海 201306；2.傳感技術國家重點實驗室，中國科學院上海微系統與信息技術研究所，上海 200050;3.農業部水產品貯藏保鮮質量安全風險評估實驗室(上海)，上海 201306；4.上海海洋大學 食品學院 食品熱加工工程技術研究中心，上海 201306)

液滴數字聚合酶鏈式反應芯片及其在致病菌檢測中的應用

鄧雪蕾1，張苑怡1，袁浩鈞2，劉松生2，陳瑩瑩1，郜晚蕾2，周洪波2，賈春平2，趙建龍2，卞曉軍1,3,4*

(1.上海海洋大學 食品學院，上海 201306；2.傳感技術國家重點實驗室，中國科學院上海微系統與信息技術研究所，上海 200050;3.農業部水產品貯藏保鮮質量安全風險評估實驗室(上海)，上海 201306；4.上海海洋大學 食品學院 食品熱加工工程技術研究中心，上海 201306)

設計與制作了一種基于聚二甲基硅氧烷-玻璃(PDMS-Glass)的多功能集成式液滴數字聚合酶鏈式反應(ddPCR)芯片，該芯片由產生液滴的PDMS模塊和收集液滴的玻璃腔體模塊組成。PDMS模塊采用雙通道的T形結構設計，液滴產生速度快且通量高，在30 min內可生成2×106個直徑約為20 μm的微液滴。玻璃腔體模塊中存儲的液滴在整個實驗過程中無需轉移，可直接在原位PCR儀上進行擴增，每個液滴均是一個微反應器，經過多次熱循環后，液滴仍能保持良好的穩定性。選用副溶血性弧菌(VP)作為食源性致病菌的研究模型，考察了ddPCR芯片對其基因組DNA的絕對定量能力，結果表明，該ddPCR芯片對VP基因組DNA絕對定量的線性范圍寬，可跨越5個數量級(101～106copies/μL)，定量結果與DNA理論參考濃度間有很好的相關性。……