高原地區藏族ACE基因I/D多態性與腦出血的關系研究

任慶平， 吳世政

高原地區藏族ACE基因I/D多態性與腦出血的關系研究

任慶平， 吳世政

目的探討血管緊張素轉化酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多態性與高原地區世居藏族腦出血的相關性。方法收集青海地區高原世居藏族腦出血患者52例(男27例，女25例)為病例組，與之年齡、性別、居住地相匹配的同期體檢的世居健康藏族51例(男28例，女23例)為對照組，收集一般資料。利用聚合酶鏈式反應(PCR)檢測所有樣本的ACE基因I/D多態性。結果病例組ACE基因型：DD型9例(17.31%)，II型21例(40.38%)，ID型22例(42.31%)；等位基因頻率：D等位基因38.46%，I等位基因61.54%；對照組ACE基因型：DD型10例(19.61%)，II型19例(37.26%)，ID型22例(43.13%)；等位基因頻率：D等位基因41.18%，I等位基因58.82%。兩組間基因型、等位基因比較無顯著性差異(基因型χ2為0.14，等位基因χ2為0.16，P>0.05)。結論ACE基因I/D多態性與青海高原地區藏族腦出血無相關性，ACE基因I/D多態性可能不是高原世居藏族人群腦出血的遺傳易感因素。

高原； 藏族； 血管緊張素轉化酶； 基因多態性； 腦出血

腦出血是由于環境因素與遺傳因素相互作用、影響而引起的復雜疾病，近年來，遺傳因素受到越來越多的關注，其中，腎素-血管緊張素系統(renin angiotensin system,RAS)中的血管緊張素轉化酶(angiotensin converting enzyeme,ACE)基因與腦出血的相關性，成為研究熱點之一。有研究認為[1，2]，ACE基因的D等位基因和DD基因型可增加急性腦血管病的發病風險，DD基因型是自發性腦出血獨立的發病危險因素，也有研究認為，腦卒中的發病與ACE基因多態性無相關性[3]。然而不同種族、同種族內人群所具有的遺傳標記的差異性對腦出血發病的影響可能不同[4]，國內的研究多數以漢族人群為研究對象，目前對我國高原地區藏族人群相關的研究鮮有報道。

本研究對青海省高海拔地區世居藏族腦出血患者ACE基因I/D多態性進行分析，探討ACE基因多態性與高原地區藏族腦出血的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 均為高原同一地區世居藏族。

1.1.1 病例組 收集青海省玉樹地區(平均海拔3800米)世居藏族腦出血患者52例為病例組(男27例，女25例)，平均年齡(58.6±7.6)歲。腦出血診斷根據2014版中國腦出血診治指南[5]，嚴格的神經系統檢查，頭部CT或MRI檢查共同確診。排除繼發性腦出血(蛛網膜下腔出血、梗死后、腦血管畸形、外傷性、腫瘤性、血液病、藥物性等所致腦出血)，并排除心血管疾病、肝腎呼吸系統疾病。近1 m未接受過ACE抑制劑治療。

1.1.2 對照組 在同一醫院同期健康體檢的與病例組年齡相差不超過±5 歲，性別、居住地相匹配的世居藏族51例為對照組(男28例，女23例)，平均年齡(57.2±7.9)歲。排除各類心血管疾病、肝腎呼吸系統疾病，無血液病、腫瘤，既往無神經系統及腦血管疾病史，頭部影像學檢查均正常。近1 m未接受過ACE抑制劑治療。

所有受試者間無血緣關系，家族婚姻史世代均無族外通婚。所有研究對象均簽署知情同意書，并抽取外周靜脈血液5 ml。

1.2 方法 本研究所用試劑購買自德國Qiagen公司，ACE引物設計查閱相關文獻[6]，由上海生工生物公司合成，序列為：5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’；5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。嚴格按照試劑盒要求提取外周血白細胞DNA；采用PCR(聚合酶鏈反應)擴增DNA，擴增體系為：反應體系總體積50 μl，含反應液25 μl，上下游引物各0.5 μl，模板DNA2 μl，滅菌水加至總體積50 μl。反應條件為：先預變性95 ℃ 3 min，然后以下30次循環：95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃復性1 min；最后72 ℃延伸15 min。將PCR產物在2%瓊脂糖膠行電泳，將電泳后的瓊脂糖凝膠片放入凝膠成像分析系統，可有3種條帶，即ACE基因型，僅有490 bp條帶的為II基因型，190 bp條帶的為DD基因型，480 bp、190 bp兩種條帶都有為ID型。

2 結 果

2.1 病例組、對照組間基本臨床資料的比較 病例組共52例(男/女，27/25)，年齡51～68歲，平均年齡(58.60±7.60)歲，體重指數為(22.21±1.61)kg/m2。對照組51例(男/女，28/23)，年齡49～66歲，平均年齡為(57.20±7.90)歲，體重指數(22.13±1.41)kg/m2。兩組間性別、年齡、體重指數比較均無統計學差異。說明兩組樣本具有可比性。

病例組高血壓49例(94.23%)，對照組高血壓4例(7.84%)，兩組間比較有統計學差異(P<0.05)，病例組吸煙14例(26.92%)，對照組6例(11.76%)，兩組間有統計學差異(P<0.05)。其他指標兩組間比較無明顯統計學差異(見表1)。

2.2 病例組、對照組間血液學指標的比較 兩組間血紅細胞數、血紅蛋白、總膽固醇及甘油三酯、載脂蛋白A、載脂蛋白B的比較，均無統計學差異(P>0.05)；空腹血糖、高密度脂蛋白的比較均有統計學差異(病例組高血糖23例，低HDL-C 27例;對照組高血糖3例，低HDL-C 12例,P<0.05)(見表2)。

2.3 病例組與對照組ACE基因I/D多態性的基因型及等位基因分布頻率比較 兩組樣本基因型分布符合(Harydy-Weinberg)遺傳平衡檢驗(病例組：χ2=0.27P=0.88;對照組：χ2=0.51，P=0.78,兩組P>0.05)。病例組與對照組基因型、等位基因頻率的比較均無統計學差異(基因型χ2=0.14，P=0.93;等位基因χ2=0.16，P=0.69)(見表3)。

2.4 腦出血危險因素的多因素非條件Logistic回歸分析 為調整腦出血環境因素的影響，將是否有腦出血做為因變量，吸煙(吸=1，不吸=0)、血壓(SBP≥140 mmHg,或DBP≥90 mmHg=1，SBP≤140 mmHg或DBP≤90 mmHg=0)、HDL-C(>1.42 mmol/L=0，<1.2 mmol/L=1)、FBG(>6.1 mmol/L=1，<6.1 mmol/L=0)、ACE(ID、DD=1，II=0)為自變量。Logistic回歸分析顯示，本研究人群中吸煙、高血壓、低HDL-C是腦出血的危險因素(OR值分別為2.15、4.70、3.87)，空腹血糖雖進入方程，但此次入院未診斷為糖尿病，故可能不是此腦出血的危險因素。而ACE基因型并不是腦出血發生的危險因素(見表4)。

表1 病例組、對照組基本臨床資料比較[n(%)]

與正常對照組比較差異有統計學意義*P<0.05

表2 病例組、對照組血液學指標比較

與正常對照組比較差異有統計學意義*P<0.05

表3 病例組、對照組ACE基因型及等位基因頻率分布[n(%)]

表4 腦出血危險因素的Logistic回歸分析

3 討 論

腦出血的發生是遺傳和環境因素相互作用的結果，對腦出血遺傳因素的研究必須重視環境因素對遺傳因素的影響，還應考慮到民族差異的影響，因為不同民族人群本身所具有的遺傳標記的差異性對腦出血發病的影響可能不同。

有研究報道，高原地區各類腦血管疾病中，腦出血占37.2%，且病死率極高，高達63.6%[7]；但目前針對高海拔地區腦出血的相關研究較少，青海玉樹地區平均海拔3800 米，人口以世居藏族為主，本研究在該地區世居藏族中進行腦出血與ACE基因I/D多態性相關性研究，具有一定的可靠性。

腦出血發病的環境因素中，高血壓是最主要的危險因素，長期吸煙以及血高密度脂蛋白膽固醇降低也增加了腦出血的危險性，本文的研究結果與上述結論相一致。而本研究病例組與對照組的血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇無明顯差異，可能與本次樣本量以及藏族人群飲食、遺傳有關。此外，腦出血組空腹血糖較對照組高，但患者既往無糖耐量異常及糖尿病史，此次入院亦未診斷為糖尿病，可能為腦出血應激刺激交感-腎上腺素系統興奮，引起血糖增高。

長期的低溫、缺氧環境可導致部分高原人群的紅細胞及血紅蛋白數增高，紅細胞及血紅蛋白數的長期增高，可引起血管壁的損傷，容易引起腦出血[8]。但本次研究未發現病例組與對照組間紅細胞及血紅蛋白數有統計學差異。提示在藏族人群腦出血的危險因素中紅細胞及血紅蛋白的增高并非其危險因素，其機制可能與藏族對高原環境獲得較好的適應有關[9]。

在分子遺傳學研究中，尚未發現在各人群中普遍證實的腦出血易感基因，目前研究較多的是ACE I/D多態性與腦出血的相關性。

RAS廣泛存在于人體的腦、心以及腎血管中，在關鍵酶ACE的作用下可使血管緊張素(AngⅠ)轉換為血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)，其中，AngⅡ是強縮血管物質之一；而且ACE可降解緩激肽使其失活，影響機體內水鈉的平衡、醛固酮的分泌、血管舒縮及血管平滑肌增殖。中樞神經系統內存在獨立的RAS，與循環系統RAS共同參與了大腦結構及功能的調節，而腦內自身局部的RAS起更重要更直接的作用[10]。

有關ACE基因多態性與疾病的關聯研究，不同民族、地域的研究結果不一致[11,12]，國內多數研究認為ACE基因I/D多態性與原發性高血壓相關，D等位基因增加了原發性高血壓的危險性，雖然高血壓是腦出血最主要的危險因素，但本研究未發現ACE基因I/D多態性與腦出血的相關性，此結果與國內、外一些研究結果一致[13,14]。

各研究存在差異，可能的原因為：(1)關聯分析是根據目前已知的遺傳學及分子生物學知識，選取與某疾病相關的基因進行研究，因此在排除該基因與其他疾病的關系時存在一定困難，可能導致假陽性的結果;(2)在研究基因多態性時，須考慮到民族、地區的差異，民族、地區不同可導致研究結果的差異。

本研究對象限于原發性腦出血，排除了繼發性腦出血，病例對照的選擇采取性別、年齡、居住地相匹配，使樣本具有代表性，應用多因素分析，降低了常見危險因素對分析的干擾。本研究正常對照組ACE基因I/D多態性基因型及等位基因頻率分布與文獻報道的漢族正常人群相近[15]，而腦出血與ACE基因I/D多態性無相關性，可能與本研究的樣本量、民族的差異、遺傳背景等原因有關。

總之，本研究沒有發現高原地區藏族腦出血與ACE基因I/D多態性間有相關性。在以后的研究中，考慮進一步增加樣本量以及缺血性腦卒中病例，以期對腦卒中與ACE基因的關系有更全面的認識，對高原地區腦血管病的研究及防治提供幫助。

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AssociationofACEgeneI/DpolymorphismwithintracerebralhemorrhageinTibetanpatientsofplateauarea

RENQingping,WUShizheng.

(DepartmentofNeurology,People’sHospitalofQinghaiProvince,Xining810007,China)

ObjectiveTo investigate the association of angiotensin converting enzyme (ACE) gene insertion/deletion (I/D) polymorphism with intracerebral hemorrhage in Tibetan patients of plateau area.MethodsWe collected 52 Tibetan patients (27 males,25 females) with cerebral hemorrhage in Qinghai province as case group,andthe control group was the 51 cases of healthy subjects (28 males,23 females),who did physical examination in the same period,and their age,gender and place of residence were the same as case group.And collected detailed information of all subjects,inclu-ding laboratory data.PCR-RFLP method was used to detect genotype of ACE in all samples.ResultsThe distribution of ACE genotypes in the case group was as follow:DD was 9 cases (17.31%),II was 21 cases (40.38%),ID was 22 cases (42.31%);the alleles frequency were:D38.46%,I 61.54%.And the control group:DD was 10 cases (19.61%),II was 19 cases (37.26%),ID was 22 cases (43.13%);the alleles frequency were:D41.18%,I 58.82%.The frequencies of ACE genotypes and the allels revealed no significant difference between the two groups (genotype:20.14,allel:20.16，P>0.05).ConclusionThe ACE gene I/D polymorphism is not related to the cerebral hemorrhage in Tibetan patients of plateau area,and it may not be a genetic predisposing factor for cerebral hemorrhage in Tibetan population.

Plateau; Tibetan; Angiotensin converting enzyme; Gene poly-morphism; Intracerebral hemorrhage

R743.34

A

1003-2754(2017)10-0884-04

2017-08-16；

2017-10-03

(青海省人民醫院神經內科，青海 西寧 810007)

吳世政，E-mail：wushizheng2005@hotmail.com