高效液相法測(cè)定八寶坤順丸中黃芩苷的含量

●韓達(dá)斌

高效液相法測(cè)定八寶坤順丸中黃芩苷的含量

●韓達(dá)斌

目的：建立測(cè)定八寶坤順丸中黃芩苷含量的高效液項(xiàng)色譜(HPLC)法。方法：采用Elite-ODS（5μm，4.6mm×250 mm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇－0.4%磷酸（體積比47:53）；流速：1.0 mL · min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)290nm，柱溫為25℃。結(jié)果：在上述條件下,黃芩苷在0.1394μg～1.2546μg范圍內(nèi)與色譜峰面積之間線性關(guān)系良好,加樣平均回收率為98.86%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于八寶坤順丸中黃芩苷的HPLC測(cè)定。

八寶坤順丸；黃芩苷；HPLC

八寶坤順丸是由熟地黃、黃芩、白芍、當(dāng)歸等17味藥組成，主治月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)期超前錯(cuò)后，量少或淋漓日久不止，神疲乏力，經(jīng)行腰酸腹痛；閉經(jīng)，月經(jīng)數(shù)月不行，面色萎黃；赤白帶下，帶下量多，胸脅脹痛，四肢疲倦；胎動(dòng)不安，腹中痛，胎漏下血，胞衣不下及產(chǎn)后惡血未盡，臍腹刺痛，產(chǎn)后血暈、血崩等癥。八寶坤順丸收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，原標(biāo)準(zhǔn)無(wú)黃芩苷含量測(cè)定項(xiàng)目。方中黃芩具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎。用于濕溫、暑溫胸悶嘔惡的功效 ，黃芩苷是其中主要化學(xué)成分。本文采用高效液相色譜法對(duì)黃芩苷含量進(jìn)行研究，以控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試劑

Waters 2695-2487高效液相色譜儀；Sartorius R200D電子天平；KQ5200B型超聲波清洗器；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

黃芩苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)生物制品檢定所提供，含量測(cè)定用；八寶坤順丸樣品（批號(hào)20140405、20140406、20140407），陰性對(duì)照，均由知名生產(chǎn)企業(yè)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用Elite-ODS（5μm ，4.6mm×250 mm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇－0.4%磷酸（體積比47:53）；流速：1.0 mL ·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)290nm，柱溫為25℃。理論板數(shù)按黃芩苷計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml含50μg的溶液，即得（實(shí)際濃度69.7μg·ml-1）。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，剪碎，精密稱取1g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)即得。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

圖1 八寶坤順丸HPLC色譜圖

按照處方的組成，取除黃芩外的其余藥味，按制備工藝要求制成不含黃芩的制劑，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備陰性對(duì)照溶液，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果在與對(duì)照品溶液色譜峰相應(yīng)的位置上，陰性供試品溶液無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5 線性關(guān)系

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液（69.7μg·ml-1）2、4、6、10、14、18μl，按上述條件分別注入色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積積分值進(jìn)行回歸，得回歸方程y = 2042.7x - 3.6283， r=0.9999，結(jié)果表明黃芩苷在0.1394μg～1.2546μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察

精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按色譜條件操作進(jìn)行，測(cè)得峰面積，以峰面積計(jì)算RSD=0.32%，結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取上述供試品溶液（批號(hào)20140405）分別在0、5、10、15、20小時(shí)進(jìn)樣，進(jìn)樣量10μl，測(cè)得黃芩苷峰面積，以峰面積計(jì)算RSD=0.36%，結(jié)果表明，供試品溶液在20小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

按照上述含量測(cè)定方法對(duì)相同批號(hào)樣品（批號(hào)20140405）制備5份供試液，進(jìn)樣10μl，測(cè)得峰面積，計(jì)算RSD=0.14%，結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取樣品（批號(hào)20140405）6份，每份取約0.5g，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品2.3175mg（精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液0.1545mg.ml-1，15ml，蒸干），按供試品溶液的制備方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為98.86%，RSD=0.81%

2.10 樣品測(cè)定

按正文含量測(cè)定方法，對(duì)3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)得三批樣品含量在5.9～6.1mg·丸-1之間(n=6)

3 討論

（1）用HPLC法測(cè)定八寶坤順丸中黃芩苷的含量未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。比較了多種比例的乙腈-水、甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-磷酸溶液的分離效果，以甲醇－0.4%磷酸（體積比47:53）為優(yōu)，分離效果較好，保留時(shí)間適中，且無(wú)干擾。本方法操作簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，適用于八寶坤順丸中黃芩苷含量的測(cè)定

（2）本文采用HPLC法測(cè)定黃芩苷的含量，方法學(xué)驗(yàn)證表明，其精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率和重現(xiàn)性均能滿足定量的要求。故本方法可用于對(duì)八寶坤順丸的質(zhì)量控制，建議標(biāo)準(zhǔn)修訂時(shí)增加黃芩苷的含量測(cè)定

（作者單位：青海省食品藥品監(jiān)督管理局食品藥品審評(píng)中心）

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010.433.

[2]郭景強(qiáng).HPLC法測(cè)定八寶坤順丸中芍藥苷的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥雜志,2004(9):25.

[3]翁代群 喻強(qiáng).中成藥制劑中黃芩苷含量測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].《重慶中草藥研究,2003,(2):22.

韓達(dá)斌（1978～），男，主管藥師，研究方向?yàn)槭称匪幤窓z查認(rèn)證工作。