護手霜中菌落總數(shù)測定用培養(yǎng)基的探討

傅德江

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，福建 福州 350002；國家加工食品監(jiān)督檢驗中心（福州），福建 福州 350002）

護手霜中菌落總數(shù)測定用培養(yǎng)基的探討

傅德江

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，福建 福州 350002；國家加工食品監(jiān)督檢驗中心（福州），福建 福州 350002）

檢測化妝品菌落總數(shù)時，為使菌落在培養(yǎng)基中清晰可辨，允許在卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑（以下簡稱TTC）。文章以護手霜為樣品基質(zhì)，分別加入適當(dāng)菌含量的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、酵母工作菌懸液，制備5mg/100mL濃度的TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂，同時以不添加TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂平板進行驗證，以營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為對照，對菌落計數(shù)結(jié)果進行對比。結(jié)論：添加了5mg/100mLTTC的培養(yǎng)基用于化妝品菌落總數(shù)檢測時對G+有明顯的抑制作用，建議在日常檢測過程中需慎重選擇。

化妝品；菌落計數(shù)；TTC

化妝品中富含脂肪、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、無機鹽等營養(yǎng)成分，是微生物良好的碳源和氮源，為微生物的生長、繁殖提供了良好的條件。菌落總數(shù)是判定化妝品被污染程度的標(biāo)志，在實際工作中，乳膏狀樣品常因檢驗樣品含有沉渣給菌落鑒別造成一定的困難。為了有利于菌落計數(shù)，在培養(yǎng)基中加入適量的TTC，它能被細(xì)菌還原成為紅色物質(zhì)使菌落呈紅色[1]，目前化妝品的微生物學(xué)質(zhì)量及檢驗方法依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015版），菌落總數(shù)的檢驗所用培養(yǎng)基為卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在必要時可以使用5mg/100mL TTC[2]。該濃度TTC對化妝品菌落總數(shù)測定是否有影響，文章通過實驗做一些探討。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基

5mg/100mL TTC卵磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：國藥集團化學(xué)試劑有限公司；磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；營養(yǎng)瓊脂：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；滅菌生理鹽水：國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.2 樣品

護手霜：淘寶。

表1 菌液試驗

表2 樣品對照試驗

表3 驗證試驗

1.3 菌種

金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希氏菌ATCC25922、酵母ATCC9763、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778，以上菌種均由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.4 儀器

高壓滅菌器：日本HIRAYAMA；恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；冰箱：海爾集團

2 方法

2.1 菌液的制備

分別接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、酵母、蠟樣芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，36℃培養(yǎng)24h，上述培養(yǎng)物用無菌生理鹽水度稀釋，制成每1mL含菌量在30～300CFU的菌懸液。菌液制備后，保存在2～8℃，在24h內(nèi)使用。

2.2 供試液的制備

取10g護手霜加入到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩制成1：10供試液。

2.3 實驗方法

2.3.1 菌液試驗

分別取2.1中的菌液2mL，分別注入兩個平皿中，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測定菌液中的菌落數(shù)。

2.3.2 樣品對照試驗

取2.2中的1：10供試液2mL，分別注入兩個平皿中，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測定樣品中的菌落數(shù)。

2.3.3 驗證試驗

取2.2中的1：10供試液1mL和2.1中的菌液1mL分別注入同一平皿中，同時做平行，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測定菌落數(shù)。

3 結(jié)果與討論

表1結(jié)果表明5mg/100mL TT C對革蘭氏陰性桿菌的生長繁殖無影響，但對革蘭氏陽性葡萄球菌有較強的抑制作用，結(jié)果顯示無細(xì)菌生長。酵母在36℃生長較差，且不顯色[3]。在實際工作中，菌落計數(shù)選擇在30～300CFU之間，菌落容易計數(shù)，沒必要加入TTC，減少TTC對細(xì)菌的毒性。如果遇到樣品含較多顆粒，需要添加TTC時可以參考陳得云[4]等試驗在每100mL培養(yǎng)基加入TTC濃度2～3mg，可使多數(shù)菌落顯色且不抑制細(xì)菌的生長。

4 結(jié)論

應(yīng)用TTC指示劑在化妝品菌落總數(shù)測定，便于區(qū)別化妝品中的顆粒與細(xì)菌，結(jié)果易于觀察，計數(shù)快速準(zhǔn)確。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015版）中用5mg/100mL濃度的TTC在試驗中菌落均能顯色（酵母除外），但對金黃色葡萄球及蠟樣芽胞桿菌有較強的抑制作用，故在使用TTC進行菌落計數(shù)會造成檢測結(jié)果誤差。

[1]李奇英.應(yīng)用TTC顯色測定食品中菌落總數(shù)[J].食品工業(yè)科技,1998,4（2）：74-75.

[2]中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理總局.化妝品安全技術(shù)規(guī)范[EB/OL].（2015-12-23）[2017-01-02].http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0053/140161.html.

[3]孔秀珍.在化妝品菌落總數(shù)測定中應(yīng)用TTC的探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,7（2）：831-832.

[4]陳得云,胡偉寧.研究TTC在細(xì)菌菌落檢測計數(shù)中的安全用量和應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2004.14 ：145—146.

10.3969/j.issn.1007-550X.2017.06.004

R117

A

1007-550X（2017）06-0043-03

2017-03-20

傅德江（1986-），男，福建三明人，本科，助理工程師，主要從事食品微生物相關(guān)檢測。