PTK7在不同級別結腸腺瘤組織及瘤旁非腫瘤黏膜組織中的表達意義

張東海　祁曉莉　張軼華　商曉青　劉洪波

【摘要】 目的：研究蛋白酪氨酸激酶-7（Protein tyrosine kinase-7，PTK7）在不同級別結腸腺瘤組織及瘤旁非腫瘤黏膜組織中的表達和意義。方法：收集31例結腸腺瘤組織標本，并進行免疫組化染色檢測PTK7蛋白的表達，結合患者的臨床病理資料進行統計分析。結果：非腫瘤黏膜組織中PTK7檢出率為29.6%（8/27），腺瘤組織中為77.4%（24/31）。瘤旁非腫瘤黏膜組織中，高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變比較，差異無統計學意義（ 字2=0.051，P>0.05）。非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織PTK7表達比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。腺瘤組織中，高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變比較，差異有統計學意義（P<0.05）。未發現PTK7表達與性別（P=0.198）或年齡（P=0.198）之間有相關性。結論：PTK7參與結腸腺瘤的發生發展，其陽性表達對結腸腫瘤的早期干預有提示意義，PTK7可作為預測結直腸癌的發生候選生物標志物。

【關鍵詞】 蛋白酪氨酸激酶-7； 結腸腺瘤； 上皮內瘤變； 免疫組織化學

Expression and Significance of PTK7 in Different Grade of Colonic Adenoma and Non Tumor Mucosa Adjacent to Tumor/ZHANG Dong-hai，QI Xiao-li，ZHANG Yi-hua，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（27）：116-119

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and significance of protein tyrosine kinase-7（PTK7） in different grade colorectal adenoma and non tumor mucosa adjacent to tumor.Method：31 cases of adenoma samples and immunohistochemical staining was used to detect the expression of PTK7 protein expressions，combined with cilinical pathological data were statistical analyzed.Result：The detection rate of PTK7 was 29.6%（8/27） in non-tumorous mucosa and adenoma tissues was 77.4%（24/31）.PTK7 expression in surrounding non-tumorous mucosa between high-grade adenoma and low-grade adenoma was no significant different（ 字2=0.051，P>0.05）.The difference of PTK7 expression between non-tumorous mucosa and adenoma tissues was statistically significant（P<0.05）.A marked difference of PTK7 expression was also found between high-grade epithelial adenoma and low-grade epithelial adenoma（P<0.05）.PTK7 expression was not found to be associated with patients gender（P=0.198） or age（P=0.198）.Conclusion：PTK7 may involved in the occurrence and development of colorectal adenoma，its overexpression may be a clue for early diagnosis of colorectal tumor，PTK7 may be a candidate biomarker to predict colorectal cancer genesis.

【Key words】 Protein tyrosine kinase-7； Colorectal adenoma； Intraepithelial neoplasia； Immunohistochemistry

First-authors address：Capital Medical University Daxing Hospital，Beijing 102600，China.

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.27.033

蛋白酪氨酸激酶-7（protein tyrosine kinase-7，PTK7）通常被認為是一種癌基因，研究發現PTK7與多種腫瘤如紅白血病細胞系表達以及食管鱗狀細胞癌、前列腺癌、黑色素瘤觀察、肺鱗狀細胞癌與肝細胞癌等的發生、發展有關[1-6]，但目前尚不清楚PTK7的表達是否與結直腸癌的發生、發展密切相關。本研究收集了31例結腸腺瘤組織標本進行免疫組化染色，檢測PTK7蛋白在不同級別腺瘤組織以及腺瘤旁非腫瘤黏膜組織的表達情況，比較其間的差異以及預后預測意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年1-6月本院病理診斷為結腸腺瘤的標本31例，男14例，女17例。組織學分級：低級別上皮內瘤變11例，高級別上皮內瘤變20例，腺瘤旁非腫瘤黏膜組織27例。所有腺瘤標本均為結腸鏡下高頻電刀切除，術前均未接受過與腺瘤相關的各種其他治療。endprint

1.2 方法

1.2.1 檢測標本 由首都醫科大學大興醫院提供。

1.2.2 免疫組織化學方法檢測 標本經4%甲醛固定常規脫水、石蠟包埋，4 μm切片，常規HE染色，置于3%過氧化氫15 min以消除內源性過氧化物酶的活性。用EDTA（pH值8.0）（中國北京中山金橋生物技術有限公司）高壓修復抗原。待冷卻至室溫后，用5%脫脂牛奶封閉切片1 h，之后孵育濃縮型兔多克隆抗體anti-ptk7（1∶7500，sab3500340，Sigma）在4 ℃過夜。應用兔/鼠通用型二抗（EnVisionTM Detection System Peroxidase/DAB，Dako），用現配的DAB顯色液（中國北京中山金橋生物技術有限公司）顯色，用蘇木素復染核。

1.3 觀察指標與判定標準 （1）免疫組織化學染色結果判斷：PTK7染色結果及評分由兩名高年資病理醫生獨立盲評。PTK7染色的免疫組化評分標準判定，分別按照染色陽性細胞百分數（PP）和染色強度（SI）進行計分。PP：0分（無）；1分（<25%）；2分（25%～75%）；3分（>75%）。SI：0分（無）；1分（弱）；2分（中）；3分（強）。免疫組化積分（IRS）=陽性細胞百分數計分（PP）×染色陽性強度計分（SI），0分視為陰性，大于0分為陽性。因標本量較少，故總結時僅分為0分、1分與2分三組。（2）觀察比較：高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變組間的PTK7檢出率；腺瘤組織的高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變組間的PTK7檢出率；瘤旁非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織之間的PTK7檢出率；檢驗PTK7表達與31例腺瘤患者性別之間有無相關性；檢驗PTK7表達與31例腺瘤患者年齡之間有無相關性。

1.4 統計學處理 選擇SPSS 10.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

31例結腸腺瘤組織及27例瘤旁非腫瘤黏膜組織PTK7免疫組織化學檢測結果，（1）在瘤旁非腫瘤黏膜組織中PTK7檢出率29.6%（8/27），高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變比較，差異無統計學意義（ 字2=0.051，P>0.05）。（2）在腺瘤組織中PTK7檢出率77.4%（24/31），高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變比較，差異有統計學意義（ 字2=24.74，P<0.05）。（3）瘤旁非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織比較，差異有統計學意義（ 字2=25.378，P<0.05）。（4）同時評估了PTK7表達與31例腺瘤患者臨床病理特征的相關性，未發現PTK7表達與患者性別（P=0.198）或年齡（P=0.198）之間有相關性。見表1。

3 討論

關于結直腸癌的發生，目前較公認的是“腺瘤→癌變（adenoma→carcinoma）”學說，因此通常將結腸腺瘤列為“結直腸癌的最主要癌前病變”[7]，臨床對早期發現的結腸腺瘤多數進行摘除，按照目前治療水平，多數在結腸鏡下進行[8]。對于摘除的結腸腺瘤，目前病理診斷多將既往的異型增生改稱為“上皮內瘤變”[7-8]，低級別上皮內瘤變對應于Ⅰ～Ⅱ級異型增生，高級別上皮內瘤變則對應于Ⅲ級異型增生和原位癌。上皮內瘤變是一種以形態學改變為特征的上皮性病變，包括組織結構和細胞形態學改變，伴細胞增殖動力學和分化異常，本研究分組是按照上述原則執行的。上述也提示對結腸腺瘤進行PTK7檢測確有必要性及有一定的臨床意義。

有研究顯示，PTK7在脊椎動物的胚胎發育和發生過程中發揮十分重要的作用，在許多腫瘤中PTK7出現高表達[9-13]。近期國內有學者在其他腫瘤方面有關于PTK7表達的研究報告[14]。王建東等[15]發現PTK7在腫瘤細胞核內皮細胞的遷移中發揮著重要的作用，在許多腫瘤中PTK7出現高表達[1]。黃群鋒等[16]用免疫組化法檢測了80例食管鱗狀細胞癌標本有47例（56.25%）PTK7蛋白表達陽性，但在63例癌旁組織及正常組織中PTK7表達均為陰性，而且PTK7表達越高，患者的5年生存率越低。張關亭等[17]發現，在急性淋巴細胞白血病患者中PTK7的表達量高于正常對照組，血清中PTK7的含量檢查對于診斷AML有潛在臨床價值，可以用于AML的早期診斷。張萍[18]曾研究PTK7與頭頸部鱗癌的關系，發現PTK7有可能成為頭頸部鱗癌一個比較理想的治療靶點，PTK7促進頭頸部鱗癌細胞的侵襲和生長，PTK7強陽性為頭頸部鱗癌的不良預后因素之一。王海燕等[19]發現，卵巢癌與正常組織及良性腫瘤中PTK7的表達差異有統計學意義，PTK7在交界性卵巢腫瘤中的表達與臨床分期（P=0.038），腹膜轉移和或淋巴結轉移（P=0.038）均有相關性。由此可見，PTK7的表達與腫瘤的生存率、預后評估關系較密切。

本研究發現，在瘤旁非腫瘤黏膜組織PTK7檢出率29.6%（8/27），這與黃群鋒等[16]食管鱗狀細胞癌的結果不同，是否與腫瘤發生的部位不同相關，尚待進一步研究。在高級別上皮內瘤變與低級別上皮內瘤變組的瘤旁非腫瘤黏膜組織中，PTK7表達陽性率比較，差異無統計學意義（ 字2=0.051，P>0.05），提示無論何級別腺瘤的患者均有可能表達PTK7。在腺瘤組織中，PTK7檢出率77.4%（24/31），高級別上皮內瘤變組與低級別上皮內瘤變比較，差異有統計學意義（ 字2=24.74，P<0.05）。瘤旁非腫瘤黏膜組織與腺瘤組織之間PTK7檢出率也存在明顯差異（ 字2=25.378，P<0.05）。尚可看到，在PTK7陽性的腺瘤組織中染色強度為2分的比例達45.8%（11/24），而瘤旁非腫瘤黏膜組織無一例染色強度為2分，差異無統計學意義（P>0.05），可能與病例數較少有關，但也顯示了一種趨勢，即PTK7表達強度與結腸腺瘤級別有可能相關。結果提示，在結腸腺瘤組織中可以檢測到PTK7且有較高的陽性率，在少數瘤旁非腫瘤黏膜組織中也可檢測到。結合結腸腺瘤的病理特征，提示對于結腸腺瘤應該積極早期干預切除，同時應積極追蹤，特別是對于PTK7陽性的病例。而PTK7則可能作為早期發現指標（分子標志物），納入結腸腺瘤組織標本的常規檢查中，用于腫瘤的早期診斷以及預后判斷，也可能成為潛在的結、直腸癌治療靶點[20-21]。endprint

筆者曾對一個家族性腺瘤性息肉病家系進行了系統觀察，并對出現的息肉組織反復進行內鏡下切除治療。觀察期間發現，患者的息肉組織反復發生，此起彼伏，平均半年治療一次，每次治療需要處理的息肉達67枚。經過反復治療后，結腸組織的息肉分布逐漸稀疏，但每次治療均可見到0.5 cm左右的息肉出現。結合本文研究結果，提示在家族性腺瘤性息肉病患者，理論上講所有的結腸黏膜均可能發生腺瘤，而家族性腺瘤性息肉病理論上講可能100%發生癌變[7-8]。結合本文研究結果，在患者瘤旁非腫瘤黏膜組織中也可檢測到PTK7，是否提示患者的結腸黏膜瘤旁非腫瘤黏膜組織中同時存在發生的可能，只是病程未達到而已，這可能是與黃群鋒等[16]食管鱗狀細胞癌的結果不同的原因。而家族性腺瘤性息肉病患者在結腸鏡下治療后結腸組織的息肉分布逐漸稀疏，可能是由于電灼的作用從而使該局部組織黏膜受到破壞而失去了腺瘤發生的基礎。如果不進行結腸切除，腺瘤發生的可能性是始終存在的，這就是要求對家族性腺瘤性息肉病患者全結腸切除的原因[7-8]。

綜上所述，鑒于我國獨生子女現象的存在，目前發現家族性腺瘤性息肉病的幾率明顯下降，因此發掘新的結、直腸腫瘤標志物，是一項有意義的工作，而PTK7有可能成為其中的選擇。

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（收稿日期：2017-04-11） （本文編輯：程旭然）endprint