大氣顆粒物PM10對小鼠淚膜功能和角膜上皮組織結構的影響*

李娟 ，譚鋼 ，吳安花 ，楊啟晨 ，葉蕾 ，王亞虹 ，邵毅

（1.陜西省西安市第四醫院 眼科，陜西 西安 710004；2.南華大學第一附屬醫院 眼科，湖南 衡陽 421001；3.廈門大學眼科研究所，福建 廈門 361102；4.南昌大學第一附屬醫院 眼科，江西 南昌 330006；5.陜西省西安市環境監測站，陜西 西安 710054）

大氣顆粒物PM10對小鼠淚膜功能和角膜上皮組織結構的影響*

李娟1，譚鋼2，吳安花2，楊啟晨3，葉蕾4，王亞虹5，邵毅4

（1.陜西省西安市第四醫院 眼科，陜西 西安 710004；2.南華大學第一附屬醫院 眼科，湖南 衡陽 421001；3.廈門大學眼科研究所，福建 廈門 361102；4.南昌大學第一附屬醫院 眼科，江西 南昌 330006；5.陜西省西安市環境監測站，陜西 西安 710054）

目的 研究大氣顆粒物PM10對小鼠淚膜功能和角膜上皮組織結構的影響。方法 24只雄性6～8周齡BALB/c小鼠，隨機分為A、B組，每組12只。空白對照組6只不作處理。B組采用5 mg/ml PM10點眼，A組采用無菌PBS點眼，3次/d。分別在干預前及干預第1、4和7天進行實驗小鼠淚膜功能相關檢查，包括采用酚紅棉線法檢查淚液分泌量、淚膜破裂時間（BUT）、熒光素染色及熒光素染色評分（FL）。根據分組于相應時間點收集其角膜組織，行蘇木精-伊紅染色及透射電子顯微鏡下觀察角膜上皮組織結構變化。結果 干預4和7 d后，A組淚液分泌量、BUT、FL較干預前無明顯變化（P＞0.05），而B組淚液分泌量減少、BUT、FL較干預前惡化（P＜0.05）。點眼7 d后，A組上皮細胞為（5±1）層，B組為（7±1）層，差異有統計學意義（P＜0.05）。電鏡觀察可見A組角膜上皮微絨毛呈指狀突起，微絨毛數量多，排列整齊；而B組角膜上皮微絨毛減少、變短、排列紊亂。結論 PM10會影響小鼠淚膜功能，小鼠淚液量分泌減少，淚膜穩定性下降；小鼠角膜上皮組織結構損壞。

PM10；淚膜功能；角膜上皮

空氣污染已成為世界許多地區一個重要的公共衛生問題。越來越多的流行病學和臨床證據表明，污染物使人群各種疾病的患病率增加[1]。大氣顆粒物（particular matter，PM）是不同大小和化學特征的液體和固體材料的混合物，包括釋放到空氣中的灰塵、污垢、煙塵、吸煙及液滴等。顆粒物依據其動力學直徑，將空氣動力學直徑≤10μm的固體顆粒物稱為PM10，主要由含碳物質、有機質、元素碳的總和、有機物組成[2]。PM10主要來源于人為燃燒、排放等過程。因為PM10是目前霧霾的主要成分，可能對人體健康產生負面影響，因此對PM10的監測和研究很重要。眼球作為機體的一個重要器官，眼表直接暴露于外界。本研究旨在探究PM10滴眼液對正常小鼠淚膜功能和角膜上皮組織結構的影響，為臨床防治提供一定的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 選取30只BALB/c雄性小鼠（18～22 g，西安交通大學醫學院實驗動物中心），為無特定病原體級實驗動物（SPF級動物）。使用裂隙燈顯微鏡及眼底鏡檢查眼前節、眼底無異常。30只小鼠置于標準環境：室溫（25±1）℃，濕度（60±10）%，12 h 晝 /夜循環照明（8∶00～20∶00）[3]。所有小鼠都給予相同的水量和食物。本研究所涉及的研究方法均遵循《赫爾辛基宣言》，動物實驗符合視覺與眼科協會規定的對動物眼科和視覺研究的使用，同時獲得西安交通大學醫學院動物倫理委員會批準[4]。

1.1.2 主要試劑及儀器 TH-16A 4通道大氣顆粒物智能采樣儀（武漢天虹儀表有限責任公司），聚四氟乙烯濾膜（美國Whatman公司），酚紅棉線（天津晶明醫用器材公司），熒光素鈉（廣州白云山明興制藥有限公司）。H-7650透射電子顯微鏡（德國HITACHI公司），裂隙燈顯微鏡（蘇州66視覺科技股份有限公司），游標卡尺（上海儀器一廠）。

1.2 方法

1.2.1 PM10混懸液的制備 ①PM10的采集：PM10由西安環境監測站提供（2015年10月1日-2015年10月31日，于西安市某超級站采用智能采樣儀，切割粒徑為10μm，采用聚四氟乙烯濾膜進行采樣。采樣時間為當天10∶30至次日8∶30，22 h/d連續采樣）。將載有PM10的聚四氟乙烯濾膜裁剪為1.0 cm×1.0 cm，浸入蒸餾水中，超聲振蕩45 min/次，共3次，用6層紗布濾過，真空下冷凍干燥、稱重，4℃冰箱保存備用；②PM10混懸液的制備：使用前，PM10稀釋于無菌的PBS中，濃度為5 mg/ml，用超聲漩渦處理。加入保存劑苯扎溴銨，其濃度控制在0.005%，4℃冰箱保存備用。

1.2.2 實驗分組 24只雄性6～8周齡BALB/c小鼠，隨機分為A、B兩組，每組12只，均為右眼。A組采用PBS點眼，B組采用5 mg/ml PM10混懸液點眼，3次/d，空白對照組6只不點眼，作為正常對照組。分別在干預前及干預后1、4和7 d各時間檢測并觀察實驗小鼠的淚液分泌量、淚膜破裂時間（break-up time，BUT）、熒光素染色（fluorescein stain test，FL）及其評分。干預7 d后，行角膜蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE）觀察小鼠角膜上皮情況，以及透射電子顯微鏡下觀察小鼠角膜上皮組織超微結構變化下的角膜上皮情況。

1.2.3 酚紅棉線試驗 取酚紅棉線，一端置于小鼠右眼外眥中外1/3處，計時60 s。用游標卡尺測量酚紅棉線紅色部分的長度，計算淚液分泌量。進行每次檢查時應注意控制變量，應由同一人在相同的時間、地點，相同的照明亮度、濕度及溫度下操作[5]。

1.2.4 BUT檢測 參照文獻[3]，使用1滴1%熒光素鈉滴眼，使其瞬目，在裂隙燈顯微鏡鈷藍光下觀察記錄角膜染色區出現第1個破裂點的時間[6]。每次檢查時應注意控制變量，由同一人在相同的時間、地點，相同的照明亮度、濕度及溫度下操作。

1.2.5 FL及評分 使用1滴1%熒光素鈉滴眼，使其瞬目，參考國家眼科研究臨床干眼評分系統[7]，分為0～3級：＜30個輕微點狀染色斑點為0級；＜30個非分散點狀染色斑點為1級；嚴重彌漫性染色，而無陽性斑塊為2級；熒光素斑塊為3級。

1.2.6 透射電子顯微鏡 參照文獻[8]，角膜標本經2.5%戊二醛前固定2 h，1%鋨酸后固定1 h，乙醇梯度脫水、包埋。經枸櫞酸鉛和醋酸雙氧鈾雙重染色后于透射電子顯微鏡下觀察并拍照。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 17.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組比較用方差分析或重復測量設計的方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組干預前后各項干眼檢測指標比較

2.1.1 淚液分泌量 兩組干預前、干預后1、4和7 d淚液分泌量比較，采用重復測量設計的方差分析，結果：①不同時間淚液分泌量有差異（F=12.658，P=0.004）；②兩組淚液分泌量有差異（F=23.852，P=0.001），B組較A組淚液分泌量低，淚液分泌破壞明顯；③A組與B組的淚液分泌量變化趨勢有差異（F=10.452，P=0.002）。兩組干預前淚液分泌量比較，經LSD-t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）。干預后1d，兩組淚液分泌量比較，經LSD-t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）；干預后4和7 d，A組淚液分泌量較干預前無變化（t=0.432和 0.547，P=0.486和 0.336），而B組淚液分泌量較干預前惡化（t=3.781和6.453，P=0.001和0.000）；干預后4和7 d，兩組淚液分泌量比較，經LSD-t檢驗，差異有統計學意義（t=2.064和 4.596，P=0.002 和 0.000）。見表 1。

表1 兩組干預前后不同時間淚液分泌量比較（n=12，mm/min，±s）

表1 兩組干預前后不同時間淚液分泌量比較（n=12，mm/min，±s）

注：?與A組、干預前比較，P＜0.05

組別 干預前 干預后1 d 4 d 7 d A 組 6.01±0.96 5.95±1.01 6.01±0.98 6.02±0.91 B 組 5.92±1.02 5.89±1.12 4.61±1.23? 2.89±1.42?

2.1.2 BUT 兩組干預前、干預后1、4和7 d BUT比較，采用重復測量設計的方差分析，結果：①不同時間BUT有差異（F=11.612，P=0.002）；②兩組的 BUT有差異（F=31.521，P=0.000），B組較A 組BUT低，淚膜破壞明顯；③兩組的BUT變化趨勢有差異（F=9.214，P=0.003）。兩組干預前BUT比較，經LSD-t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）。干預后1 d，兩組BUT比較，經LSD-t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）；干預后4和7 d，A組BUT較干預前無變化（t=0.432和0.527，P=0.227和0.261），而B組BUT較干預前惡化（t=5.232和 6.715，P=0.009和 0.000）；干預后 4和7 d，兩組BUT比較，經LSD-t檢驗，差異有統計學意義（t=4.498和 6.196，P=0.002和 0.001）。見表2。

表2 兩組干預前后不同時間BUT比較 （n=12，s，±s）

表2 兩組干預前后不同時間BUT比較 （n=12，s，±s）

注：?與A組、干預前比較，P＜0.05

組別 干預前 干預后1 d 4 d 7 d A 組 6.24±0.76 6.74±1.89 6.55±1.16 6.53±1.23 B 組 6.53±0.88 6.62±2.04 5.23±1.73? 3.47±1.19?

2.1.3 FL評分 A組與B組干預前及干預后1、4和7 d FL評分比較，采用重復測量設計的方差分析，結果：①不同時間FL評分有差異（F=7.319，P=0.006）；②兩組的 FL評分有差異（F=19.218，P=0.001），B 組較A組FL評分高，角膜上皮破壞明顯；③兩組的FL評分變化趨勢有差異（F=8.251，P=0.004）。A組干預前與干預后1、4和7 d FL評分比較，經LSD-t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）；B組干預前與干預后1 d FL評分比較，經LSD-t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）。干預7 d后，A組FL評分較干預前無變化（t=0.772，P=0.702），而 B 組 FL評分較干預前惡化（t=6.432，P=0.002）；兩組 FL 評分比較，經LSD-t檢驗，差異有統計學意義（t=6.121，P=0.007）。見表3。

表3 兩組干預前后不同時間FL評分比較（n=12，分，±s）

表3 兩組干預前后不同時間FL評分比較（n=12，分，±s）

注：1）與 A 組比較，P ＜0.05；2）與干預前比較，P＜0.05

組別 干預前 干預后1 d 4 d 7 d A 組 0.00±0.00 0.48±0.31 0.45±0.41 0.62±0.37 B 組 0.00±0.00 0.51±0.471） 0.77±0.631）2） 5.73±2.011）2）

2.2 兩組小鼠角膜HE染色情況

HE染色顯示，正常小鼠角膜上皮由整齊排列的4～6層上皮細胞組成，基底細胞為一單層柱狀上皮細胞層，排列緊密整齊（見圖1A）。PBS滴眼液點眼7 d后角膜上皮層數未見增加，基底細胞仍為一單層柱狀上皮細胞層，角膜上皮厚度基本未改變，表層上皮較為完整（見圖1B），而經過PM10混懸液點眼7 d后角膜上皮細胞層數開始增多，上皮厚度增加，翼狀細胞及基底細胞排列紊亂，同時伴有表層上皮細胞損傷、脫落，角膜表面欠光滑（見圖1C）。正常對照組上皮細胞為（5±1）層，治療 7 d后，A 組為（5±1）層，B組為（7±1）層，經方差分析，差異有統計學意義（F=31.809，P=0.007），A、B 兩組比較差異有統計學意義（t=7.541，P=0.007）（見圖 2）。

圖1 3組小鼠用不同滴眼液處理7 d后角膜染色情況 （HE染色×400）

圖2 3組小鼠用不同滴眼液處理7 d后角膜上皮細胞層數比較

2.3 兩組小鼠角膜上皮細胞超微結構的變化

正常角膜上皮細胞會向外伸出許多微絨毛和微皺襞，排列整齊。A組用PBS點眼7 d后，透射電鏡下可見表層上皮細胞有豐富的微絨毛，呈指狀突起，排列規則（見圖3A）。B組使用PM10點眼7 d后，小鼠角膜上皮微絨毛明顯減少，微絨毛形態也與A組有很大差別，偶見指狀突起，大部分微絨毛變短，且排列不規則（見圖3B）。

圖3 兩組小鼠用不同滴眼液處理7 d后角膜上皮細胞微絨毛形態 （醋酸雙氧鈾和枸櫞酸鉛染色×30 000）

3 討論

PM10是我國主要空氣污染物之一[5]，其對人類健康的影響一直是討論的熱點[9]。PM10不僅直徑小，可以通過呼吸道進入體內[10]，而且吸附的有毒物質，如多環芳烴類（包括萘、蒽、菲、芘等）[11]、元素碳等[12]，也會對人體健康造成損害。有研究報道，PM10可以引起呼吸系統和循環系統的癥狀，如慢性阻塞性肺氣腫、呼吸衰竭、動脈粥樣硬化、心率不齊、心肌梗死等[13-14]。PM10對眼的影響也引起人們越來越多的關注。CHANG等[15]通過對2007年～2009年非特異性結膜炎門診患者進行統計分析后認為，空氣中PM10的濃度升高，會增加患者就診的概率，可能會造成非特異性結膜炎。WIWATANADATE等[16]發現PM10與視力模糊呈正相關。

眼部微環境穩態維持著眼的正常生理功能。作為與外界直接接觸的淚膜，對維持視力及眼睛的健康至關重要。淚膜分為3層：黏蛋白層、水液層、脂質層。黏蛋白層約為2.5～5.0 μm，附著于角膜表面；水液層約為4μm，含有水溶性離子、蛋白質等；最外層的脂質層，其厚度受到外界環境的影響，約為0.015～0.160μm[17]。TORRICELLI等[18]認為，空氣污染對眼表的影響是因為造成淚液高滲透壓和淚膜的不穩定。淚液高滲透壓會使淚液中炎癥因子的釋放增多，從而進一步影響上皮細胞，對上皮細胞造成損傷，導致上皮細胞凋亡、杯狀細胞丟失，以及黏蛋白表達失調。而這些變化又進一步導致淚膜不穩定，繼續加重淚液的高滲透壓，形成一個惡性循環。有研究表明，當人暴露于污染的環境中時，不僅淚膜的穩定性會降低，而且光滑的折光系統也被破壞，導致視力降低[19]。淚膜不穩定引起的各種眼部不適的總稱，被認為是干眼綜合癥（dry eye syndrome，DES）[20]。常見的干眼癥狀包括：眼部不適、疼痛感、異物感、視疲勞、眼睛發紅腫脹、眼睛發癢、眼皮抽搐等[21-22]。DES還可能導致角膜嚴重侵蝕和繼發感染，甚至視力喪失[23]。

本實驗中采用PM10混懸液點眼，模擬空氣中PM10對淚液和角膜上皮的作用，得出一部分實驗數據。本研究結果發現，用PM10混懸液干預4和7 d后，SIT、BUT、FL較干預前惡化，整個角膜熒光素染色增加，角膜上皮細胞層增厚，角膜表面微絨毛變短，以及數量減少，進一步說明PM10會損傷小鼠角膜上皮。而使用PBS滴眼4和7 d后，淚液分泌量、BUT較干預前無明顯變化，兩組結果對比后說明滴用PM10可能破壞淚膜的穩定性，從而使有害化學物質和病原體侵襲，進一步損傷角膜上皮細胞，導致干眼的形成。目前，治療干眼病一方面是通過增加淚膜的濕潤度，來彌補丟失的眼淚成分，以及降低淚膜的滲透壓和蒸發，從而減少干眼的相關癥狀[24]。另一方面，對于DES的某些患者，雖然眼表面微環境被破壞，但是可通過增加上皮細胞來提高眼部自身防御力，維持一個相對良好的狀態來防止感染。

綜上所述，PM10會損傷小鼠淚膜功能，影響小鼠角膜上皮組織結構。今后筆者將進一步研究PM10損傷眼表是否與結膜杯狀細胞的黏蛋白分泌、眼瞼腺體（包括瞼板腺和淚腺）形態變化而導致的淚膜黏蛋白層和脂質層成分改變等有關。同時筆者還將積極尋找有效地防護和治療方法，以減少PM10對眼部的損害，促進人們的眼部健康。

[1]FENG C,LI J,SUN W,et al.Impact of ambient fine particulate matter (PM2.5)exposure on the risk of influenza-like-illness:a time-series analysis in Beijing,China[J].Environmental Health:a Global Access Science Source,2016,15(1):1-12.

[2]ROGULA-KOZLOWSKA W,KLEJNOWSKI K,ROGULA-KOPIEC P,et al.Spatial and seasonal variability of the mass concentration and chemical composition of PM2.5in Poland[J].Air Quality,Atmosphere,Health,2014,7(1):41-58.

[3]LIN Z,LIU X,ZHOU T,et al.A mouse dry eye model induced by topical administration of benzalkonium chloride[J].Molecular Vision,2011,17(17):257-264.

[4]YU Y,ZOU J,HAN Y,et al.Effects of intravitreal injection of netrin-1 in retinalneovascularization ofstreptozotocin-induced diabetic rats[J].Drug Design Development and Therapy,2015,9(63):6363-6377.

[5]環境保護部機動車排污監控中心.環境保護部發布《2013年中國機動車污染防治年報》[J].環境與可持續發展,2014,39(1):9-10.

[6]邵毅,余靜,余瑤,等.無縫線骨髓間充質干細胞羊膜移植預防角膜緣干細胞缺乏的實驗研究[J].眼科新進展,2013,33(11):1011-1015.

[7]LEMP M A.Report of the national eye institute/industry workshop on clinical trials in dry eyes[J].Eye Contact Lens,1995,21(4):221-232.

[8]LIN Z,HE H,ZHOU T,et al.A mouse model of limbal stem cell deficiency induced by topical medication with the preservative benzalkonium chloride[J].Investigative Ophthalmology Visual Science,2013,54(9):6314-6325.

[9]SHAH A S,LANGRISH J P,NAIR H,et al.Global association of air pollution and heart failure:a systematic review and metaanalysis[J].Lancet,2013,382(9897):1039-1048.

[10]BROWN J S,GORDON T,PRICE O,et al.Thoracic and respirable particle definitions for human health risk assessment[J].Particle and fibre Toxicology,2013,10(1):12.

[11]TUTINO M,DI GILIO A,LARICCHIUTA A,et al.An improved method to determine PM-bound nitro-PAHs in ambient air[J].Chemosphere,2016,161:463-469.

[12]SONG X,YANG S,SHAO L,et al.PM10mass concentration,chemical composition,and sources in the typical coal-dominated industrial city of Pingdingshan,China[J].The Science of the Total Environment,2016,571(1):1155-1163.

[13]張亮,王子軍.大氣污染中可吸入顆粒對人類健康的影響[J].中國公共衛生管理,2016,(1):47-49.

[14]BLOEMSMA L D,HOEK G,SMIT L A.Panel studies of air pollution in patients with COPD:systematic review and metaanalysis[J].Environ Res,2016,151:458-468.

[15]CHANG C J,YANG H H,CHANG C A,et al.Relationship between air pollution and outpatient visits for nonspecific conjunctivitis[J].IOVS,2012,53(1):429-433.

[16]WIWATANADATE P.Acute air pollution-related symptoms among residents in Chiang Mai,Thailand[J].Journal of Environmental Health,2014,76(6):76-84.

[17]CWIKLIK L.Tear film lipid layer:a molecular level view[J].Biochimica Biophysica Acta,2016,1858(10):2421-2430.

[18]TORRICELLI A A,MATSUDA M,NOVAES P,et al.Effects of ambient levels of traffic-derived air pollution on the ocular surface:analysis of symptoms,conjunctival goblet cell count and mucin 5AC gene expression[J].Environmental Research,2014,131(3):59-63.

[19]BERRA M,GALPERIN G,DAWIDOWSKI L,et al.Impact of wildfire smoke in buenos aires,argentina,on ocular surface[J].Arq Bras Oftalmol,2015,78(2):110-114.

[20]LI L,BRAUN R J,MAKI K L,et al.Tear film dynamics with evaporation,wetting,and time-dependent flux boundary condi-tion on an eye-shaped domain[J].Physics of Fluids,2014,26(5):69-87.

[21]TORRICELLI A A,NOVAES P,MATSUDA M,et al.Correlation between signs and symptoms of ocular surface dysfunction and tear osmolarity with ambient levels of air pollution in a large metropolitan area[J].Cornea,2013,32(4):e11-e15.

[22]邵毅,余瑤,黃國棟,等.鬼針草葉治療更年期女性中重度干眼癥臨床研究[J].中國中藥雜志,2012,37(19):2985-2989.

[23]LU H,WANG M R,WANG J,et al.Tear film measurement by optical reflectometry technique[J].Journal of Biomedical Optics,2014,19(2):DOI:10.1117/1.JBO.19.2.027001.

[24]DIENES L,KISS H J,PERENYI K,et al.The effect of tear supplementation on ocular surface sensations during the interblink interval in patients with dry eye[J].PLoS One,2015,10(8):DOI:10.1371/journal.pone.0135629.

Influence of air pollutant PM10on tear film and corneal epithelium in mice*

Juan Li1,Gang Tan2,An-hua Wu2,Qi-chen Yang3,Lei Ye4,Ya-hong Wang5,Yi Shao4
(1.Department of Ophthalmology,Xi'an Fourth Hospital,Xi'an,Shaanxi 710004,China;2.Department of Ophthalmology,the First Affiliated Hospital of University of South China,Hengyang,Hunan 421001,China;3.Eye Institute of Xiamen University,Xiamen,Fujian 361102,China;4.Department of Ophthalmology,the First Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang,Jiangxi 330006,China;5.Environmental Monitoring Station of Xi'an City,Xi'an,Shaanxi 710054,China)

Objective To investigate the influence of PM10on tear film functions and corneal epithelium in mice.Method Totally 30 male BALB/c mice at the age of 6-8 weeks (30 eyes)were divided into 3 groups:group A (PBS eye drops,n=12),group B (PM10eye drops,n=12)and blank control group (n=6).The group B used 5 mg/ml PM10eye drops,50 μl each time,3 times a day,for 7 consecutive days.The group A used sterile PBS as eye drops,3 times a day,for 7 consecutive days.The tear film function tests including tear secretion level,breakup time of tear film (BUT)and fluorescein staining and fluorescein staining score(FL)were performed before therapy and 1,4 and 7 d after treatment.On the 7th d after treatment,the corneas of all the mice were collected for HE staining and ultrastructural examination under transmission electron microscope.Results On the 1st,4th and 7th d after treatment,there was no statistical change in tear secretion level,BUT or FL in the group A (P＞0.05);but there were statistical changes in all items in the group B (P＜0.05).On the 7th d after therapy,the mean layers of corneal epithelial cells in the group A were significantly fewer than those in the group B (P＜0.05).Under electron microscope,the microvilli of corneal epithelium in the group A were finger-like and in regular arrangement;in contrast,a cluster of disordered,shorter and fewer microvilli was observed in the group B.Conclusions PM10can influence tear film functions and damage corneal epithelial structure in mice.

particular matter 10;tear film function;corneal epithelium

R772

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.26.002

1005-8982（2017）26-0007-06

2016-08-30

國家自然科學基金（No：81400424）；陜西省科學技術研究發展計劃（No：2014K11-03-07-04）；2017年陜西省創新人才推進計劃-青年科技新星項目（No：2017KJXX-87）

邵毅，E-mail：freebee99@163.com

（童穎丹 編輯）