前列腺等離子電切組織α1-腎上腺素受體的分布情況研究*

萬少平，蔡先姣，毛正，鮑俐戎，陳拓

（湖南省岳陽市二人民醫(yī)院，湖南 岳陽 414000）

前列腺等離子電切組織α1-腎上腺素受體的分布情況研究*

萬少平，蔡先姣，毛正，鮑俐戎，陳拓

（湖南省岳陽市二人民醫(yī)院，湖南 岳陽 414000）

目的 了解前列腺無炎癥增生組織和合并炎癥增生組織α1腎上腺素受體（α1-AR）的分布情況。方法 選取30例良性前列腺增生（BPH）患者，收集經(jīng)尿道前列腺等離子電切術(shù)后前列腺增生組織，采用雙免疫組織化學(xué)法，觀察前列腺增生組織中α1-AR 3種亞型的染色光密度（OD）和切片組織炎癥細(xì)胞的浸潤情況。結(jié)果 12例前列腺標(biāo)本切片未發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤，18例前列腺標(biāo)本切片有炎癥細(xì)胞浸潤。前列腺無炎癥增生組織α受體亞型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值與合并炎癥增生組織比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 前列腺無炎癥增生組織與合并炎癥增生組織的α受體亞型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR含量無差異。

經(jīng)尿道前列腺等離子電切術(shù)；α1腎上腺素受體；良性前列腺增生；炎癥

α腎上腺素受體（alpha adrenergic receptor，α-AR）廣泛分布于機(jī)體各組織器官中，介導(dǎo)平滑肌收縮等多種生理效應(yīng)。α-AR分為α1、α2 2種亞型，人前列腺平滑肌收縮主要由α1腎上腺素受體（alpha 1 adrenergic receptor，α1-AR） 亞型調(diào)節(jié)[1]。α1-AR興奮性增強(qiáng)，可引起后尿道壓力增加，出現(xiàn)下尿路梗阻癥狀。前列腺疾病狀態(tài)下的α1-AR分布數(shù)量變化情況是大家關(guān)注的問題。本研究收集前列腺增生電切術(shù)后的組織標(biāo)本，測量前列腺組織中α1-AR的含量，比較分析炎癥和非炎癥狀態(tài)前列腺增生組織中α1-AR的差異。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2013年7月-2014年7月湖南省岳陽市二人民醫(yī)院收治的前列腺增生患者30例，年齡65～87歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)患者病史、癥狀、體格檢查、彩超、血PSA檢查等確診為良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）。手術(shù)指征：反復(fù)尿儲(chǔ)留；反復(fù)血尿；反復(fù)泌尿系感染；膀胱結(jié)石；繼發(fā)性上尿路積水；BPH患者合并膀胱憩室、腹股溝疝、嚴(yán)重的痔瘡或脫肛；充溢性尿失禁的BPH患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有嚴(yán)重心力衰竭、心房顫動(dòng)、肺氣腫、腦梗死；前列腺癌、膀胱腫瘤；逼尿肌無力和不穩(wěn)定性膀胱、嚴(yán)重尿路感染[2]。

入院后行尿道前列腺等離子電切術(shù)（plasmakenitic resection of prostate，PKRP）。佳樂牌等離子電切機(jī)為英國Gyrus Medical Limited公司生產(chǎn)，膀胱沖洗液為生理鹽水。術(shù)后收集電切前列腺組織，手術(shù)切除后30 min內(nèi)送液氮-80℃冷凍保存。

1.2 主要試劑及試劑盒

1.2.1 試劑 PBS（pH=7.2～7.4），檸檬酸鹽緩沖液CB（pH=6.00，0.1 mol/L 1 000 ml，配制檸檬酸三鈉3.0 g∶檸檬酸 0.4 g），一抗（Alpha1B-AR，ab140695/abcam，兔，稀釋度 1∶100；Alpha1D-AR，ab84402/abcam，兔，稀釋度 1∶40；Alpha1A-AR，ab86772/abcam，兔，稀釋度1∶50）購自上海申科生物科技有限公司。

1.2.2 試劑盒 Ultra SensitiveTMSP免疫組織化學(xué)法染色試劑盒（KIT-0305，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。采用生物素標(biāo)記的二抗、鏈霉菌抗生物素蛋白連接的過氧化物酶，以及底物色素混合液，測定細(xì)胞和組織中的抗原。

1.3 主要儀器與設(shè)備

組織攤片烤片機(jī)（BT-330型，孝感博太電子科技有限公司），組織包埋儀（YB-7B型，孝感亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司），石蠟切片機(jī)（Taiva，R135，孝感泰淮電子設(shè)備有限公司），光學(xué)顯微鏡（Motic，DMB5-2231P1型，廈門麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司），Image-Pro plus 4.5圖像分析軟件（美國Media Cybernetics公司）。

1.4 方法

1.4.1 免疫組織化學(xué)法 將收集30例標(biāo)本送湘雅醫(yī)學(xué)院病理教研室，行雙免疫組織化學(xué)法分析，觀察前列腺組織中α1-AR 3種亞型的分布。

1.4.2 光鏡 光鏡觀察前列腺組織切片，棕黃色染色顆粒為α1-AR陽性顆粒。同時(shí)觀察組織切片中炎癥細(xì)胞情況，有炎癥細(xì)胞浸潤者為合并炎癥前列腺增生切片標(biāo)本。

1.4.3 圖像分析 在20倍視野下，每張切片隨機(jī)選擇1個(gè)視野，對(duì)陽性染色區(qū)域進(jìn)行圖像分析定量。采用Image-Pro plus 4.5圖像分析軟件，測定框內(nèi)陽性染色區(qū)域積分光密度（optical density，OD）[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用 t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 光鏡結(jié)果

30例確診為BPH患者行PKRP。光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，12例患者組織切片無炎癥細(xì)胞浸潤；18例患者組織切片前列腺增生合并炎癥細(xì)胞浸潤。見附圖。

2.2 前列腺無炎癥增生組織與合并炎癥增生組織的OD值比較

前列腺無炎癥增生組織α受體亞型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值與合并炎癥增生組織比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見附表。

附圖 α1–AR 3種亞型炎癥細(xì)胞浸潤情況（免疫組織化學(xué)法×20）

附表 兩組α受體亞型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值比較 （±s）

附表 兩組α受體亞型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值比較 （±s）

組別 α1A-AR α1B-AR α1D-AR合并炎癥增生組（n=18） 201.528±4.357 146.867±4.232 163.750±5.907無炎癥增生組（n=12） 206.103±5.181 150.654±4.848 160.461±4.817 t值 -2.612 -2.266 1.603 P值 0.511 0.471 0.479

3 討論

α1受體分為 α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR 3種亞型，在前列腺基質(zhì)平滑肌、前列腺被膜、膀胱頸部中存在。mRNA水平上的定量溶液雜交和蛋白質(zhì)水平上的免疫組織化學(xué)法研究α1受體3個(gè)亞型在前列腺不同組織中的含量存在差異[4-5]。α1A-AR存在于前列腺基質(zhì)和腺上皮細(xì)胞中。α1B受體主要存在于腺上皮細(xì)胞，基質(zhì)中很少；α1D-AR在腺上皮細(xì)胞中存在。正常前列腺中，α1A-AR占63%，α1B-AR占6%，α1D-AR占31%。但在BPH患者前列腺組織中，隨著基質(zhì)比例增加，α1A-AR亞型所占比例相應(yīng)增加，達(dá)85%，而α1B-AR、α1D-AR亞型只占1%和14%[6-7]。前列腺炎患者組織中，外周帶α1A-AR表達(dá)水平是正常組織的0.36倍，α1DAR表達(dá)水平是正常組織的0.3倍，有差異；移行帶α1A-AR表達(dá)水平是正常組織0.65倍，有差異；移行帶α1D-AR表達(dá)水平是正常組織0.75倍，無差異。這說明慢性前列腺炎患者的前列腺組織中α1A-AR、α1D-AR表達(dá)呈下降趨勢[8]。

本研究發(fā)現(xiàn)，前列腺無炎癥增生組織與合并炎癥增生組織的α1-AR分布無差異。這與上述單純前列腺增生組織的α1A-AR表達(dá)升高不一致，也與單純前列腺炎組織中α1A-AR、α1D-AR表達(dá)降低不一致。上述研究均是病變前列腺組織與正常前列腺組織中α1-AR表達(dá)水平的對(duì)照研究，本研究為前列腺無炎癥增生組織與合并炎癥增生組織的對(duì)照組研究，研究對(duì)象不同，因而結(jié)果也有差別。本研究結(jié)果顯示，前列腺增生合并炎癥患者中，炎癥細(xì)胞浸潤不能改變前列腺增生組織中α1-AR的分布情況。

α1-AR同時(shí)介導(dǎo)前列腺和膀胱頸平滑肌的收縮反應(yīng)[9]，影響排尿功能，阻斷α1-AR可以減少排尿次數(shù)。α1-AR阻滯劑對(duì)尿道、膀胱頸部及前列腺的α1-AR有高度選擇性，抑制平滑肌收縮。前列腺增生和前列腺炎癥患者，口服α1-AR阻滯劑，可以改善排尿不良癥狀，療效確切。α1-AR阻滯劑治療后，患者IPSS評(píng)分、尿流率峰值改善[10-13]。根據(jù)本研究結(jié)果，對(duì)前列腺增生合并炎癥和未合并炎癥的患者，如果口服α1-AR阻滯劑，因其α1-AR含量相同，口服α1-AR阻滯劑的治療效果應(yīng)該相似。

綜上所述，前列腺無炎癥增生組織與合并炎癥增生組織的α受體亞型α1A-AR、α1B-AR、α1DAR含量無差異。

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Study of alpha 1-AR distribution in benign prostatic hyperplasia tissues after PKRP*

Shao-ping Wan,Xian-jiao Cai,Zheng Mao,Li-rong Bao,Tuo Chen(Yueyang Second People's Hospital,Yueyang,Hunan 414000,China)

Objective To investigate the distribution of alpha 1 adrenergic receptor (α1-AR)in benign prostatic hyperplasia tissues with or without inflammation after transurethral plasmakinetic resection of prostate(PKRP).Methods The prostatic tissues of benign prostatic hyperplasia were collected from 30 patients after PKRP.The distribution of α1-AR was measured by immunohistochemistry using specific monoclonal antibodies of α1-AR subtypes.The inflammatory cell infiltration of prostatic tissues was observed at the same time.Results There were no inflammatory cells in 12 prostatic tissues.There were inflammatory cells in 18 prostatic tissues.The mean optical density (OD)of α1A-AR, α1B-AR and α1D-AR in the benign prostatic hyperplasia tissues was not statistically different between the non-inflammation group and the inflammation group (P ＞ 0.05).Conclusions The content of α1A-AR, α1B-AR and α1D-AR in the benign prostatic hyperplasia tissues with inflammation is not significantly different from that in the benign prostatic hyperplasia tissues without inflammation.

benign prostatic hyperplasia;alpha 1 adrenergic receptor;plasmakinetic resection of prostate;inflammation

R697.32

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.26.016

1005-8982（2017）26-0079-04

2017-01-17

湖南省醫(yī)藥衛(wèi)生科研計(jì)劃（No：B2013-143）[

蔡先姣，E-mail：CXJ3128@163.com

（童穎丹 編輯）