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72份雪茄煙種質資源的鑒定評價和聚類分析

2017-11-16 05:52:09許美玲賀曉輝宋玉川劉勇李梅云樊有銀李永平
中國煙草學報 2017年5期
關鍵詞:資源質量

許美玲,賀曉輝,宋玉川,劉勇,李梅云,樊有銀,李永平

1 云南省煙草農業科學研究院,云南昆明,650021;

2 云南省香料煙有限責任公司,云南保山,678000

72份雪茄煙種質資源的鑒定評價和聚類分析

許美玲1,賀曉輝2,宋玉川2,劉勇1,李梅云1,樊有銀2,李永平1

1 云南省煙草農業科學研究院,云南昆明,650021;

2 云南省香料煙有限責任公司,云南保山,678000

為篩選出優質抗病的雪茄煙種質資源,在云南德宏開展72份雪茄煙種質的田間試驗,結果表明,PA Swarr Hibshman產量高;Havana 142上中等煙比例高;多數種質煙葉外觀質量好或較好;煙葉K2O為1.82%~5.75%,鉀氯比為6.47~44.23,化學成分變異系數:糖堿比>氮堿比>兩糖差>總植物堿>還原糖>總糖>鉀氯比>Cl->K2O>總氮;Havana 142、Little Hill、Havana 211等感官評吸質量檔次為較好,其余種質為較好-或中等+;多酚變異系數(29.38%~72.34%)排列為綠原酸>新綠原酸>隱綠原酸>莨菪亭>蕓香苷。將72份資源聚為5類,雪茄內包皮被歸在品質較好的第1、2類,雪茄外包皮被歸在第3、4類,而雪茄茄芯被歸在第3、4、5類。篩選出抗PVY的種質5份,對TMV免疫的10份,抗TMV的3份,抗黑脛病的種質1份,可供生產和育種選擇利用。

雪茄煙;種質資源;抗性鑒定;外觀質量;化學成分;多酚;感官評吸

雪茄是一種特殊的煙制品,其煙質特點是具有雪茄香型、香氣濃郁、吃味濃、勁頭大、煙氣呈堿性、焦油與煙堿比值小[1]。雪茄煙原料按其用途分為外包皮、內包皮和茄芯。世界上生產雪茄煙的國家主要有古巴、菲律賓、印度尼西亞、美國等。國內雪茄煙種植集中在長江流域及其以南地區,如四川什邡、浙江桐鄉和海南等[2]。國內雪茄煙葉優良品種嚴重匱乏,現有雪茄產區的主栽品種主要是從地方名優晾曬煙種質資源中篩選出來的,未經相關機構審定,品質差異較大,而且僅能用于茄芯生產,幾乎不可用作外包皮。為此,研究人員采用以下方法進行改進:對現有品種進行提純復壯,以保持其優良特性;引進國外優良品種等[3]。我國目前保存的雪茄煙種質資源不多,且多為引進種質,地方品種極少,其中最為著名的是浙江桐鄉的“督葉尖干種”,雪茄煙種質資源僅占我國煙草種質資源的3%[4]。陳榮平等通過鑒定篩選出2份抗PVY的雪茄煙資源(Havana 10、Criollo Salteno 11)[5]。國內曾開展過雪茄煙引進種植及生產調制的研究[6-9],但對于雪茄煙種質資源鑒定的未見報道。為此,本研究通過探索72份國外引進的雪茄煙種質資源的特性、抗逆性、產質量、適應性、調制方法等方面,篩選出適合生產和科研利用的優異的雪茄煙種質資源,為今后雪茄煙種植提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

參試的72份雪茄煙種質包括雪茄內包葉(CB cigar binde)、雪茄茄芯(CF cigar fi lled)、雪茄外包皮(CW cigar wrapper)等多種類型,分別來自于美國、哥斯達黎加、西班牙、德國、巴西、哥倫比亞、斯里蘭卡等國家,這些資源被美國收集保存,并在美國種質資源信息網絡(http://www.ars-grin.gov)信息系統中可查詢到PI號(Number of Plant Ididentity)、名稱和標示符、知識產權情況、是否可以對外共享、評注、歷史淵源、作物的家譜等信息[10],具體參見表1。

表1 各種質資源的來源及基本情況表Tab.1 Basic circs and origin of each germplasm resources

續表1

續表1

1.2 試驗設計及方法

田間試驗設在云南省德宏州芒市風平鎮那目村,面積0.27 hm2。采用隨機區組設計,重復3次,共216個小區,每小區11m2,行株距110cm×50cm,每小區種植20株。每公頃施純氮135 kg,N:P:K為1:1:3,底肥占60%,追肥占40%,追肥分2次施用,分別在移栽后7~10 d和25~30 d施用追肥的35%和65%。因天氣干燥,在移栽后30 d走水灌溉(半溝水為宜),淺中耕和破膜培土,打腳葉和根莖部產生的叉煙。移栽30 d后,噴施甲霜靈錳鋅和農用硫酸鏈霉素,防止黑脛病和碳疽病發生。煙葉初熟或適熟時采收,編桿后,利用現有鋼架棚進行晾制,調制時注意遮蔭、保濕(氣候干燥時)、防霉變(雨天)等。

1.3 煙葉取樣

打頂后在田間標記中部葉片(每株5片),分小區采收,編桿后調制,最后,取出作過標記的中部葉片做樣品。取重量達1 kg以上的50份煙葉送中國農業科學院煙草研究所進行感官評吸、多酚和化學成分檢測,其余樣品送云南省煙草農業科學研究院進行常規化學成分檢測。

1.4 主要病害抗性鑒定

PVY、TMV、黑脛病等主要病害的抗性鑒定各有專人負責,地點分別在云南省煙草農業科學研究院研和試驗基地17號、9號、2號溫室進行。

1.4.1 PVY抗性鑒定

采用漂浮育苗法育苗,當煙苗5~6片真葉時,移栽至3×5(15孔)的大孔育苗盤(孔徑20cm)中,每份材料移栽1~2盤。移栽成活后,用高壓噴槍摩擦接種;接種后14 d開始調查發病情況,每7 d一次,連續調查3次,計算發病率。以發病率最高的一次確定抗性。發病率=發病株數/總株數×100%。發病率小于或等于35%判斷為抗病(R);發病率大于或等于50%判斷為感病(S)。

1.4.2 TMV抗性鑒定

參照國家標準(GB/T 23224-2008),以感病對照品種發病最先達到感病(病情指數不低于60)時的調查數據為依據,進行抗病性評價。評價標準以病情指數或相對病情指數為準,分別為:高抗或免疫(HR)為0,抗病(R)0.1~20,中抗(MR)20.1~40,中感(MS)40.1~60;感病(S)60.1~80;高感(HS)80.1~100。

1.4.3 黑脛病抗性鑒定

采用莖基部菌谷接種法,將苗齡50 d左右的煙苗移栽至溫室病圃內移栽后5 d接種。將培養18 d左右的菌谷按0.5 g/株的量接種于煙苗的莖基部,并及時覆土保濕,接種后5 d、7 d和10 d調查病情,以5 d、7 d和10 d調查的平均抗病指數作為抗性劃分標準。病害分級按國家行業標準YC/T39-1996規定執行;根據病害嚴重度及對照品種的發病情況,病害分級(病指)為:抗病(R)(<25)、中抗(MR)(25.1~50.0)、中感(MS)(50.1~75.0)、感病(S)(>75)。

1.5 統計方法

在Excel表格中進行平均值計算、統計分析和制圖等;采用煙草科研統計系統(DPS)進行聚類分析。

2 結果與分析

2.1 物候期

從物候期來看,播種期2014年10月11日,出苗期10月16日,各種質出苗一致,移栽期11月19日。Petite Havana SR1現蕾、開花、頂葉成熟早,全生育期最短為143天;PR 5-65現蕾、開花較晚;TI 516、Garcia、Tabaco Blanco等種質全生育期較長為191 d;變異系數以現蕾期最大,腳葉成熟期最小(表2)。

表2 主要物候期分析及其極值對應的種質資源Tab.2 Analysis of main phenophase and its extremum corresponding germplasm resources d、%

2.2 形態特征和特性

圖1 形態特征和特性分類圖Fig.1 Classi fi ed morphological and biological characters

72份種質資源的株型均為塔形;葉形主要有寬橢圓形、披針形、心臟形、長橢圓形;葉尖有鈍尖、急尖、漸尖等;葉面有皺、平2種;葉色有濃綠、淡綠和綠3種;Dumbara無葉耳、有葉柄,其余種質均有葉耳、無葉柄,Tabaco Blanco較特殊,葉耳較長,2或3個葉片由葉耳相連;各種質的花序、花色、蒴果形狀、莖葉角度和主側脈角度等有差異;各性狀份數及所占百分比見圖1。

2.3 主要病害抗性鑒定

30份雪茄煙資源苗期PVY抗性鑒定:14 d、21 d、28 d調查值平均值分別為7.96%、62.20%、73.16%。即接種后,隨著時間的延長,各種質發病率也在上升。以病率最高的一次來評判PVY的抗性,篩選出抗病資源11份(Havana 38、Havana 142、Havana 211、Havana 263、Havana K-2-24、Petite Havana SR1;Havana 503、Havana 503b、Little Dutch(Ohio)、Havana 322、Havana 425)(表3)。

44份雪茄煙資源苗期TMV抗性鑒定:免疫的10份(Havana 425、Havana 426、Havana 503、Havana 503b、Mass Ck-1、Lancaster Seed Leaf(ohio)、Pennbel 69、Pennlan、PR 5-65、911)、抗3份(PA SwarrHibshman、Red Rose、Virginia)、中抗7份(Havana K-2、Greider、Long Penn Binder、PA Broadleaf、Zimmer Spanish、589、658),中感21份和感3份。

35份雪茄煙資源苗期黑脛病抗性鑒定:Havana 503b抗黑脛病,其余種質感或中感黑脛病(表3)。

表3 各種質資源TMV、黑脛病和PVY抗性評價Tab.3 Resistance evaluation of TMV,black shank and PVY for each germplasm resources

續表3

續表3

2.4 化學成分

圖2所示的各主要化學成分范圍頻次,36.11%的種質總糖和還原糖有在18.0%~24.0%和6.0%~22.0%的適宜范圍;54.17%的種質總植物堿在1.0%~2.0%的雪茄煙適宜范圍;76.39%的種質氧化鉀在3%以上,其中,PR 1-60、7D等種質氧化鉀>5.0%,19份種質氧化鉀在4%~5%之間。變異系數(CV)糖堿比>氮堿比>兩糖差>總植物堿>還原糖>總糖>鉀氯比>Cl->K2O>總氮(表4)。按優質雪茄煙葉主要化學成分標準[8]來衡量,分別有39份和3份資源的煙堿和氮堿比在優質雪茄煙標準范圍,所有參試種質的氯和鉀/氯比達標,其中,PR 1-60、PR 5-65、Swarr、PR 4-65、Swarr-hibshman、Long Penn Binder、Havana 501等種質鉀氯比>30.50。

圖2 主要化學成分范圍頻次比較圖Fig.2 Compare with frequency distribution for primary chemical component

表4 化學成分分析Tab.4 Chemical component

2.5 外觀質量和感官評吸

不同類型的雪茄煙種質,其外觀質量有差異,以Havana 38、Havana 211、Havana 425、Havana 426、Havana 501、Havana 503、Havana 503b、Havana K-1、Havana K-2、Mass Ck-1、Greider、Hill lsland、Holbein、PA Broadleaf、PR 4-65、Red Rose、Swarr、Swarr-hibshman、4R、7D、56-92、Azul Nalioc、Garcia、Volumteer Plant、Chaco Chivo、TI 528、Tabaco Blanco等種質外觀質量較好。感官評吸香型風格均為雪茄,香型程度為較顯+、較顯-、有+、有等;勁頭適中、適中+,質量檔次有較好、較好-,中等+;香氣質以Havana 142和Havana 211為好;香氣量和濃度以Havana 307較高;余味以Havana 142和Havana 426較好;雜氣以Havana 142較少;刺激性Havana 426最好;灰色和燃燒性相差不大。綜合得分以Havana 142、Little Hill、Havana 211等較高,質量檔次較好;其余資源質量檔次較好-和中等+(表5)。

表5 各種質資源外觀質量和感官評吸表Tab.5 Appearance quality and Sensory quality of each germplasm resources

續表5

續表5

2.6 聚類分析

(1)對自然株高、打頂株高、莖圍、節距、(下、中、上部)葉長和葉寬、葉數、產量、中上等煙比例、原煙葉長、單葉重、總糖、還原糖、兩糖差、總氮、總植物堿、Cl-、糖堿比、氮堿比、K2O、K/Cl等25項采用標準化轉化、歐氏距離、離差平方和法進行聚類,在截距為1.5附近將72份資源分為5類(圖3),每一類都可以分成2個亞類,各類的極值、標準差、平均值、變異系數見附表1(因版面原因不在紙質版刊登,詳見電子版)。各類分述如下:

第1類:包含種質36份(1、30、8、9、12、16、11、63、65、18、66、72、67、47、64、44、57、58、70、71、19、27、49、24、44、50、48、61、68、51、52、53、62、60、54、56、55), 前20份為第1亞類(7份雪茄內包葉、9份雪茄外包皮、4份雪茄茄芯);后16份為第2個亞類(13份為雪茄外包皮,3份為雪茄茄芯資源)。這一類的特點是植株較高,產量中等,葉片較小,總糖、還原糖、煙堿含量適中,鉀含量平均3.3%。

圖3 系統聚類圖Fig.3 Cluster analysis diagram

第2類(5份):17、37、38、59、69,這一類的植株較高,莖桿較細,節距大,葉片數少,葉片較小,產量低,中上等煙比例低,糖低,總氮和總植物堿含量高,鉀含量低。

第3類(13份):2、7、3、6、5、4、15、14、13、45、46、25、26,這一類植株較矮,葉片較大,產量中等,糖低,總氮和總植物堿中等,鉀含量較高。

第4類(4份):10、36、39、40,這一類植株較高,葉片數多,葉片大小中等,莖圍、節距中等,產量中等,糖、總氮、總植物堿等含量中等,鉀含量最高。

第5類(14份):20、32、33、28、29、35、21、23、22、41、31、34、42、43,這一類植株矮,節距小,產量高,中上等煙比例較高,糖高、總氮和總氮較低,鉀含量較高。

(2)對資料齊全的50份資源的總糖、還原糖、兩糖差、總氮、總植物堿、Cl-、糖堿比、氮堿比、K2O、K/Cl、香氣質、香氣量、濃度、余味、雜氣、刺激性、燃燒性、灰色、得分、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷、總多酚等25項品質指標,采用標準化轉化、歐氏距離、離差平方和法進行聚類,在截距為1.5左右處將50份資源分為5類(圖4),圖4編號對應的種質編號見附表2(因版面原因不在紙質版刊登,詳見電子版)。雪茄內芯葉主要被歸在第1、2類,雪茄外包皮主要被歸在第3、4類,而雪茄茄芯則主要被歸在第3、4、5類。同一類種質的化學成分、感官評吸和多酚指標相似度較高,品質相近的被聚同在一類。各類所包含資源編號及主要特點(附表3,因版面原因不在紙質版刊登,詳見電子版)如下:

第1類:含雪茄內包葉12份(2、3、4、6、8、9、11、12、13、15、16、18)、雪茄外包皮1份(49)。該類糖、總氮、總植物堿等含量中等,鉀含量較高,香氣量、余味、雜氣、刺激性、燃燒性較好,新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蕓香苷、總多酚含量較高,其余指標中等。

第2類:含雪茄內包葉4份(24、25、26、27)、雪茄外包皮1份(68)。總氮含量高,總糖、還原糖含量低,糖堿比較低,香氣量、濃度、灰色較好,評吸總分第一,其余指標中等。

圖4 系統聚類圖Fig.4 Cluster analysis diagram

第3類:含雪茄內包葉1份(14)、雪茄茄芯3份(37、45、46)、雪茄外包皮4份(48、50、60、61)。煙堿含量高,氮堿比和K/Cl低,香氣質差,刺激性強,灰色差,評吸總分最低,綠原酸、蕓香苷和總多酚含量低,其余指標中等。

第4類:雪茄內包葉含 1份(10)、雪茄茄芯7份(21、22、23、28、30、31、41)、雪茄外包皮6份(58、63、64、65、66、72)。總糖、還原糖含量高,煙堿含量較低,糖堿比和氮堿比大,鉀含量低,雜氣重,莨菪亭含量低,其余指標中等。

第5類:含雪茄茄芯10份(29、32、33、34、35、36、39、40、42、43)。兩糖差大,鉀含量高,氯含量低,K/Cl大,莨菪亭含量高,總氮含量低,香氣量少,濃度弱,余味不舒適,評吸總分較低,新綠原酸和隱綠原酸含量低,其余指標中等。

3 討論和結論

適宜的生態環境是生產優質雪茄煙葉的基礎[15]。世界上的優質雪茄煙產地均分布在南北回歸線之間,特別是在23°N附近地區,該地區具有優質雪茄煙生產的獨特生態條件,其中尤其以古巴最為著名。古巴最重要的優質雪茄煙種植區為Pinar del Rio 省的Vuelta Abajo 地區[9]。本項試驗地設于芒市,芒市地處云南西部,德宏州東南部,位于東經98°05′~98°44′,北緯 24°05′~24°39′之間,年平均氣溫 19.6℃,日照時數2252.9小時,無霜期315 d,雪茄煙種植季節的平均氣溫:秋季(9~11月)21.2℃、冬季(12~2月)13.7℃、春季(3~5月)20.9℃。而芒市試驗點的基本條件與古巴較為接近,為獲得完整的雪茄煙種質資源特征特性資料提供有宜條件。

我國的雪茄煙資源較為缺乏,特別是外包皮煙葉,國內雪茄工業企業對優質外包皮的需求基本完全依賴進口[9,11-16]。本文包含雪茄內包葉、雪茄茄芯、雪茄外包皮等類型的資源,若能應用于生產,將為解決雪茄煙品種單一和雪茄外包皮品種缺乏的問題起到關鍵性的作用。但是,由于我國目前沒有完整的雪茄煙葉分級標準,無法對各個種質資源進行經濟效益分析;另外,由于雪茄煙調制技術不夠完善,為解決調制過程中因雨水多而煙葉調制難的問題,還有許多工作要做。

本文綜合田間試驗、化學成分、外觀質量、感官評吸和系統聚類分析等多方面研究,對72 份雪茄煙資源的特征特性進行了全面的分析,篩選出一批特異性的雪茄煙資源,其主要特性如下:

Havana 211、Havana 142等為雪茄內包葉,其產量中等,上中等煙比例較高,煙葉化學成分協調、外觀質量較好、香氣質好、香氣量高、評吸質量檔次較好,抗PVY,是優質的雪茄煙資源,可作為抗病親本用于育種。

Little Hill、PA Swarr Hibshman、Glessnor、Holbein、PR 1-60等為雪茄茄芯資源,其產量相對較高,單葉重較大(11.0 g左右),油分多,葉片結構疏松或較疏松,煙葉外觀質量較好、化學成分協調;PR 1-60氧化鉀含量位居首位(5.75%),評吸質量檔次較好(Little Hill)、較好-或中等+,而均為良好的雪茄茄芯。但由于感黑脛病,可考慮在黑脛病發生輕的地方種植。

4R、7D、Azul Nalioc、Garcia、Volumteer Plant、Chaco Chivo、TI 528、Tabaco Blanco等 為雪茄外包皮資源,其煙葉油分多或較多,色澤好,葉片結構疏松或較疏松,葉片柔韌性好,外觀質量較好,評吸質量檔次較好-或中等+,是良好的雪茄外包皮資源。只因感黑脛病,注意在黑脛病輕的區域種植。

Havana 38(雪茄內包葉)的綠原酸、蕓香苷、總多酚等含量居首位,氧化鉀含量較高(4.53%),香氣量好,感官評吸質量較好-,抗PVY。

Petite Havana SR1(雪茄內包葉)總氮和總植物堿含量高,但產量較低,外觀質量中等,感黑脛病和TMV,抗PVY。

Havana 503抗黑脛病,TMV免疫,PVY顯示壞死斑,其產量中等,外觀質量好,氧化鉀含量較高(3.37%),感官評吸質量較好-。

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Identi fi cation,evaluation and cluster analysis of 72 cigar tobacco germplasm resources

XU Meiling1*,HE Xiaohui2,SONG Yuchuang2,LIU Yong1,Li Meiyun1,FAN Youyin2,LI Yongping1
1 Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences,Kunming 650021,China;
2 Yunnan Oriental Tobacco Company Ltd.,Baoshan 678000,Yunan,China

In order to select high quality sigar tobacco germplasm resources for breeding,field experiments using 72 cigar tobacco germplasm resources were conducted in Dehong,Yunan Province.Results revealed that,PA Swarr Hibshman was the highest yielding,followed by Glessnor.Havana 142 was the highest in upper and middle class tobacco leave proportion,followed by Havana 263.Most germplasm resources had better quality of facial appearance,and several of them had medium quality of facial appearance.Potasslum content ranged from 1.82% to 5.75%,and K2O/Cl-from 6.47 to 44.23.Oredr of coefficient of chemical indicants is as follows,ratio of Sugar-nicotine>ratio of nitrogen-nicotine>Di ff erence of total sugar and reducing sugar>nicotine>reducing sugar>total sugar>ratio of potassium-chlorine>chlorine>potassium>total nitrogen content.As for sense of smoking,Havana 142,Little Hill,Havana 211 had top quality,and the rest had better or medium quality.Coefficient of polyphenol contents was in the following order,chlorogenic acid>neochlorogenicacid>cryptochlorogenin acid >scopoletin content>rutin contents.72 cigar germplasm resources were classi fi ed into 5 groups by cluster analysis,cigar binde in groups 1 and 2,cigar wrapper in groups 3 and 4,cigar fi ller in group 3、4、5.Field experiment and data analysiscan help to group tobacco germplasm and can be used in variety breeding.Five germplasm resources showed PVY resistance,and ten were immune to TMV,three resistance to TMV,and one resistance to black shank.

cigar tobacco; germplasm resources; evaluation of anti-disease; quality of appearance; chemical indicants; polyphenol; sense of smoking

許美玲,賀曉輝,宋玉川,等.72份雪茄煙種質資源的鑒定評價和聚類分析[J].中國煙草學報,2017,23(5)

中國煙草總公司云南省公司資助項目(2014YN07)

許美玲(1963—),碩士,研究員,主要研究方向為煙草種質資源,Tel:0871-65100947,Email:lqlxumeiling@sina.com

2017-06-05;< class="emphasis_bold">網絡出版日期:

日期:2017-09-18

:XU Meiling,HE Xiaohui,SONG Yuchuang,et al.Identi fi cation,evaluation and cluster analysis of 72 cigar tobacco germplasm resources[J].Acta Tabacaria Sinica,2017,23(5)

*Corresponding author.Email:lqlxumeiling@sina.com

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