33份曬煙種質(zhì)資源SSR標記的指紋圖譜構建

劉國祥，鄒昆晏，任民，佟英，馮全福，楊愛國，戴培剛，徐宜民，張興偉

農(nóng)業(yè)部煙草生物學與加工重點實驗室，中國農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所，青島 266101

33份曬煙種質(zhì)資源SSR標記的指紋圖譜構建

劉國祥，鄒昆晏，任民，佟英，馮全福，楊愛國，戴培剛，徐宜民，張興偉

農(nóng)業(yè)部煙草生物學與加工重點實驗室，中國農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所，青島 266101

為分析我國曬煙種質(zhì)資源的遺傳多樣性，并構建曬煙種質(zhì)資源的指紋圖譜，本研究利用25對SSR標記對33份曬煙材料進行分析。結果表明，25對SSR引物共檢測到112個等位基因，平均每個標記4.31個，觀測雜合度(Ho)平均值為0.0028，預期雜合度(He)平均值為0.6039。Shannon’s信息指數(shù)I為1.1389，Nei’s多樣性指數(shù)（H）為0.5693，33份曬煙種質(zhì)資源的遺傳多樣性相對豐富。UPGMA聚類分析表明，在相似性系數(shù)0.345處，可將供試煙草資源分為兩個類群。同時，利用25對引物構建了33個曬煙品種的指紋圖譜，為曬煙品種鑒定體系的研究奠定理論基礎。本研究可為我國曬煙種質(zhì)資源的鑒定與利用、優(yōu)異基因的挖掘、育種親本材料的選擇等提供科學依據(jù)。

曬煙；種質(zhì)資源；簡單序列重復；遺傳多樣性；指紋圖譜

煙草（Nicotiana tabacumL.）是我國重要的經(jīng)濟作物，也是常用的模式植物之一。在長期的煙草育種過程中，研究人員多選用幾個國外引進的骨干材料做親本[1]，導致選育的煙草品種遺傳基礎狹窄[2]。因此，拓寬煙草種質(zhì)資源的遺傳背景是今后培育穩(wěn)產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗病煙草新品種工作的關鍵[3]。

最近幾十年，通過分子標記來實現(xiàn)遺傳背景分析的技術已經(jīng)成熟，分子標記能夠檢測不同個體之間的核苷酸序列差異，并在分子水平上直接反應個體間的遺傳多樣性[4]。煙草早期常用的第二代分子標記方法包括隨機引物多態(tài)性標記（RAPD）[5-7]、擴增片段長度多態(tài)性標記（AFLP）[8-10]、相關序列擴增多態(tài)性（SRAP）[11]、核糖體DNA和簡單序列重復（ISSR）[11-12]等。與上述幾種分子標記相比，簡單重復序列標記（SSR）具有穩(wěn)定性高、位點特異性強，呈現(xiàn)共顯性、高度多態(tài)性等諸多優(yōu)點，廣泛應用于分子標記輔助選擇、遺傳多樣性分析、群體遺傳分析、遺傳圖譜構建和基因克隆等工作。2011年，Bindler等公布了基于第一張煙草遺傳圖譜的高密度SSR遺傳圖譜，共定位了2317個SSR標記和2363個位點[13]。Fricano等對312份煙草種質(zhì)資源利用49對SSR標記進行多樣性分析，將312份資源分成6大類群，并進行了系統(tǒng)的遺傳結構和遺傳距離分析[14]。Xia等利用28對SSR標記對我國78份栽培煙草品種進行遺傳多樣性分析和群體結構預測，共檢測到127個等位基因，分成曬煙和烤煙兩個亞群，并發(fā)現(xiàn)這78個栽培品種遺傳基礎相對狹窄[15]。張雪廷等對38份國內(nèi)外晾曬煙資源進行遺傳多樣性和親緣關系分析，結果發(fā)現(xiàn)晾曬煙遺傳多樣性豐富，遺傳背景差異較大，親緣關系較遠[16]。因此，對曬煙種質(zhì)資源進行遺傳多樣性分析能夠了解煙草品種選育遺傳背景，加快煙草育種工作進程。目前，煙草種質(zhì)資源依然利用第二代分子標記(SRAP、ISSR、SSR)進行指紋圖譜構建工作。任學良等利用16對煙草核心SRAP引物構建了DNA指紋圖譜[17]。聶瓊等利用8對多態(tài)性高的ISSR引物構建了23份煙草種質(zhì)資源的指紋圖譜[18]。本研究利用篩選得到的25對SSR標記對33份湖北省收集到的曬煙資源進行遺傳多樣性分析，并進行SSR指紋圖譜和計算機化指紋圖譜的繪制，以期為重要基因挖掘、曬煙種質(zhì)資源鑒定、煙草品種選育和新品種審定等工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本研究供試的煙草種質(zhì)為湖北省種質(zhì)資源考察收集的材料，均為典型地方曬煙資源，有很長種植歷史，保存了曬煙更多的遺傳多樣性和優(yōu)異的基因資源。曬煙資源的編號、來源及種質(zhì)名稱（采用地方俗名）見表1。

表1 曬煙種質(zhì)資源Tab.1 Sun-cured tobacco germplasm resources

1.2 試驗方法

1.2.1 基因組DNA的提取

從表1中的曬煙種質(zhì)資源中,每株種質(zhì)取5片真葉期煙葉。每份材料隨機選取10株，混合取樣，提取基因組DNA，TE溶解DNA，加入RNA酶水浴30min。經(jīng)核酸測定儀（NanoProp 2000 Thermo scienti fi c）測定DNA的質(zhì)量與濃度，將DNA濃度統(tǒng)一稀釋到50 ng/μL，在-20℃低溫下長期保存。

1.2.2 SSR引物合成

2000對已公布的公共SSR標記引物（從Bindler公布的2317對SSR引物中挑選擴增效果好的2000對SSR引物）[13]由六合華大（北京）基因科技有限公司合成。

1.2.3 SSR引物的PCR擴增

在PCR反應管中依次加入2×Dreamtaq Mix 10μL、模板 DNA1μL、上游引物1μL、下游引物1μL，最后用雙蒸水將反應體系補至20 μL。

反應程序為95℃預變性5min；95℃變性45 s，退火溫度60℃延伸30 s，72℃延伸45 s，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10min，10℃恒溫冷卻。取出PCR反應管，對擴增產(chǎn)物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

選擇帶型清晰的PCR擴增條帶進行人工讀帶，有條帶記為“1”，無條帶記為“0”，建立“0/1”矩陣，使用DataFormater軟件進行矩陣的轉(zhuǎn)換[11]。用Popgene32軟件計算：觀察等位基因數(shù)No（observed number of alleles），有效等位基因Ne（effective number of alleles），Nei’s基因多樣性指數(shù)H（Nei's gene diversity），Shannon’s多態(tài)信息指數(shù)I（Shannon’s information index）以及品種間成對Nei’s 遺傳距離（Nei’s genetic distance）[19-20]。對不同樣品量或引物數(shù)處理得到Nei’s遺傳距離，使用統(tǒng)計軟件NTSYS-PCver 2.1[21]分析33個供試煙草品種間遺傳相似系數(shù)，采用非加權配對算術平均數(shù)法（UPGMA，unweighted pair group method with arithmetic mean）進行聚類分析，繪制聚類分析樹狀圖。并在引物分析結果的基礎上構建33份曬煙資源的指紋圖譜。

2 結果

2.1 SSR引物的篩選

利用4份主要晾曬煙品種[22]（小花青、督葉尖桿軟葉子、自來紅、白花鐵桿子）篩選2000對Bindler公布的SSR標記[13]，選取多態(tài)性好，條帶穩(wěn)定清晰的引物25對，作為晾曬煙遺傳多樣性分析的引物，其序列見表2。

表2 SSR引物序列Tab.2 SSR primer sequences

2.2 SSR標記的遺傳多樣性分析

數(shù)據(jù)分析結果（表3）顯示觀測等位基因數(shù)（No）在2～7之間，平均值為4.32，位點PT20213等位基因數(shù)最多（7個）。有效等位基因數(shù)（Ne）在1.0644～5.5862之間，平均值為2.9250，位點PT20213有效等位基因數(shù)最多，為5.5862，位點PT50136有效等位基因最少（1.0644）。觀測雜合度（Ho）變化范圍為0.0000～0.0370，平均值為0.0028。期望雜合度（He）變化范圍為0.0615～0.8365，平均值為0.6039。平均 Nei’s多樣性指數(shù)（H）為0.5693。Shannon信息指數(shù)（I）在0.1391～1.8436之間，平均值為1.1389。不同位點之間遺傳參數(shù)存在差別，He的平均值大于0.5，表明供試曬煙資源之間遺傳多樣性較高。

表3 25對SSR在33份材料中的多態(tài)性信息Tab.3 Polymorphic information of 25 SSR makers in 33 sun-cured tobacco germplasm resources

2.3 基于SSR標記遺傳多樣性的聚類分析

利用25對SSR引物對33個供試曬煙資源進行擴增，共擴增出112個等位基因，平均每對引物擴增出4.31個。對擴增結果進行統(tǒng)計分析，繪制0/1二維矩陣，使用NTSYS-pc（2.10e）計算33個供試曬煙資源之間的遺傳相似性系數(shù)和遺傳距離指數(shù)。結果表明，曬煙資源間的遺傳相似性系數(shù)在0.330～0.955之間，在相似性系數(shù)0.345處，可將供試曬煙資源分為兩個類群（圖1）。

從聚類圖中還發(fā)現(xiàn)，聚類結果與資源的地理來源沒有明顯的相關性，相似性系數(shù)較高地理來源一致的有3組，分別是編號B022、B023和B024，全部來自于湖北恩施；B089和B090，全部來源于湖北興山；B094和B095，全部來自于湖北南漳。還有些品種來源地一致，但品種間相似性差距較大，如湖北竹溪、湖北利川、湖北竹山、湖北鶴峰、湖北保康、湖北五峰、湖北秭歸的曬煙資源。

圖1 基于33個曬煙種質(zhì)資源25個SSR標記的聚類圖Fig.1 UPGMA dendrogram for 33 sun-cured tobacco germplasm resources with 25 SSR markers

2.4 33個曬煙種質(zhì)資源指紋圖譜的構建

根據(jù)25對SSR引物的擴增結果（以引物PT50425為例，圖2），結合參照分子量標記，構建33個供試曬煙資源的指紋圖譜（圖3）。結合構建的SSR指紋譜圖，從25個標記中選取6個標記，共33個多態(tài)位點，就可以將33份曬煙種質(zhì)完全區(qū)分開來。這6個SSR標記分別為PT20213（A）、PT51398（B）、PT50425（C）、PT20242（D）、PT50336（E）、PT20189（F）。將33個多態(tài)性位點依次排序，把擴增帶條的有無分別記為1和0，建立33份曬煙種質(zhì)資源的計算機化的指紋圖譜（表4）。在進行資源鑒定和品種審定時，可以利用25對SSR標記的擴增結果，獲得其指紋圖譜，與已有的指紋圖譜及計算機化的指紋圖譜進行比對，即可對資源和品種進行鑒定。

圖2 引物PT50425對33個曬煙種質(zhì)資源PCR擴增結果Fig.2 The ampli fi ed result of 33 sun-cured tobacco germplasm resources by primer PT50425

圖3 33個曬煙種質(zhì)資源的指紋圖譜Fig.3 Fingerprints of 33 sun-cured tobacco germplasm resources

表4 計算機化的指紋圖譜Tab.4 A computerized fi ngerprint of 33 sun-cured tobacco germplasm resources

3 討論和結論

煙草親本材料的收集鑒定是煙草育種工作的基礎，由于遺傳基礎狹窄導致難以培育出突破性的煙草品種。分析煙草資源的遺傳多樣性，對于煙草育種工作具有重要的指導意義。利用SSR標記進行煙草遺傳多樣性的研究國內(nèi)外已有報導，Moon等利用46對SSR引物分析了煙草屬內(nèi)3種類型54份材料的遺傳多樣性[1]；楊柳等利用14對SSR標記分析了25份煙草種質(zhì)資源的遺傳多樣性和品種間的親緣關系[23]。本研究利用Bindler公布的SSR引物信息[13]，篩選出37對適合曬煙遺傳多樣性分析的SSR標記（選擇25對進行多樣性分析）。對收集到的33份曬煙資源進行遺傳多樣性分析發(fā)現(xiàn)，平均Nei’s多樣性指數(shù)（H）為0.5693，Shannon信息指數(shù)（I）平均值為1.1389，期望雜合度（He）變化范圍為0.0615～0.8365，平均值為0.6039，He的平均值大于0.5，表明供試材料的遺傳多樣性高。各品種間的遺傳相似性系數(shù)在0.330～0.955之間。曬煙種質(zhì)資源聚類分析結果表明，曬煙的親緣關系與地理來源關系不大，研究結果與張吉順等的研究結果一致[24]。

新品種權是知識產(chǎn)權的一種重要形式，是推動育種創(chuàng)新、確保遺傳資源安全的重要制度保障。煙草品種的真實性和純度直接影響煙葉質(zhì)量。煙草有著成熟的育種、栽培、加工銷售體系，但在品種保護制度上存在缺失，沒有一套完整、有效的種質(zhì)資源鑒定及品種分子審定制度。指紋圖譜可以看作是資源的“身份證”，將資源、引物名稱、分子數(shù)據(jù)等組合在一起，形成每份資源特有的識別代碼。基于分子標記進行煙草種質(zhì)資源指紋圖譜的構建工作已有報導。徐軍等利用SSR標記構建了煙草核心種質(zhì)中80份普通煙草種質(zhì)的指紋圖譜，并從中選擇8對標記就能完成80份種質(zhì)資源的鑒定工作[25]。黃莉莎等從62對候選SSR引物中篩選出21對多態(tài)性高、穩(wěn)定好的引物，構建了9份煙草主栽品種的指紋圖譜[26]。本研究首次從2000對公共SSR標記[13]中篩選到25對進行曬煙遺傳多樣性分析及指紋圖譜構建的SSR標記，構建了33個曬煙資源的指紋圖譜，并利用其中6對SSR標記構建了計算機化的指紋圖譜，能夠?qū)?3個曬煙種質(zhì)資源完全區(qū)分開，證明這33個曬煙種質(zhì)資源中沒有重復收集的資源，此結果為以后曬煙種質(zhì)資源分子鑒定提供理論依據(jù)。本研究首次對大量SSR標記進行篩選，得到25對穩(wěn)定、遺傳多樣性高的SSR標記，并針對曬煙種質(zhì)資源進行系統(tǒng)的指紋圖譜構建工作，將其轉(zhuǎn)化為計算機化指紋圖譜，為以后曬煙資源鑒定及新品種審定提供理論基礎。

國家煙草種質(zhì)資源中期庫中現(xiàn)有曬煙資源2470份，以本研究獲得的25對SSR標記為基礎，后期可利用標記驗證群體進一步獲得新的SSR標記，構建所有曬煙資源的指紋圖譜，剔除國家煙草種質(zhì)資源中期庫重復收集的曬煙資源。同時，利用SSR標記可開展曬煙種質(zhì)資源指紋圖譜構建工作，探索曬煙種質(zhì)資源間的親緣關系，進而從基因組水平上揭示其遺傳變異程度，發(fā)掘優(yōu)異育種親本材料和基因資源，為選育優(yōu)異基因聚合新種質(zhì)奠定基礎。構建指紋圖譜為曬煙種質(zhì)資源鑒定和分類提供一種解決辦法，并為曬煙新品種審定、引進品種及地方品種鑒定奠定良好理論基礎。

[1]Moon H S,Nicholson J S,Lewis R S.Use of transferableNicotiana tabacumL.microsatellite markers for investigating genetic diversity in the genusNicotiana[J].Genome,2008,51(8):547-559.

[2]常愛霞，賈興華，馮全福，等.我國主要烤煙品種的親源系譜分析及育種工作建議[J].中國煙草科學，2013，34（1）：1-6.CHANG Aixia,JIA Xinghua,FENG Quanfu,et al.Parentage analysis of chinese flue-cured tobacco varieties and breeding suggestion[J].Chinese Tobacco Science,2013,34(1):1-6.

[3]馬冰，代帥帥，程亞增，等.烤煙種質(zhì)資源SSR核心引物的篩選及驗證[J].中國煙草科學，2016，37（5）：1-5,9.MA Bing,DAI Shuaishuai,CHENG Yazeng,et al.Screen and identification of SSR core primers for flue-cured tobacco germplasm[J].Chinese Tobacco Science,2016,37(5):1-5,9.

[4]趙淑清，武維華.DNA分子標記和基因定位[J].生物技術通報，2000，6：1-4.ZHAO Shuqing,WU Weihua.DNA molecular markers and mapping[J].Biotechnology Information,2000,6:1-4.

[5]Del Piano L,Abet M,Sorrentino C,et al.Genetic variability inNicotiana tabacumandNicotianaspecies as revealed by RAPD procedure[J].International Contribution to Tobacco Research,2000,19(1):1-15.

[6]Arslan B,Okumus A.Genetic and Geographic Polymorphism of Cultivated Tobaccos(Nicotiana tabacumL.)in Turkey[J].Russian Journal of Genetics,2006,42(6):667–671.

[7]Bai D,Reeleder R,Brandle J.Identi fi cation of two RAPD markers tightly linked with theNicotiana debneyigene for resistance to black root rot of tobacco[J].Theoretical and Applied Genetics,1995,91(8):1184-1189.

[8]Ren N,Timko M P.AFLP analysis of genetic polymorphism and evolutionary relationships amongcultivated and wildNicotianaspecies[J].Genome,2001,44(4):559-571.

[9]Julio E,Verrier J L,Dorlhac De Borne.Development of SCAR markers linked to three disease resistances based on AFLP withinNicotiana tabacumL[J].Theoretical and Applied Genetics,2006,112(2):335-346.

[10]Siva R K,Madhav M S,Sharma R K,et al.Genetic polymorphism of Indian tobacco types as revealed by ampli fi ed fragment length polymorphism[J].Current Science,2008,94(5):633-639.

[11]祁建民，梁景霞，陳美霞，等.應用ISSR與SRAP分析煙草種質(zhì)資源遺傳多樣性及遺傳演化關系[J].作物學報，2012，38（8）：1425-1434.QI Jianmin,LIANG Jingxia,CHEN Meixia,et al.Genetic diversity and evolutionary analysis of tobacco(Nicotiana tabacumL.)germplasm resources based on ISSR and SRAP markers[J],Acta Agronomica Sinica,2012,38(8):1425-1434.

[12]Jessada D,Sornsuda S,Wilasinee S,et al.Determination of local tobacco cultivars using ISSR molecular marker[J].Chiang Mai Journal of Science,2010,37(2):293-303.

[13]Bindler G,Plieske J,Bakaher N,et al.A high density genetic map of tobacco(Nicotiana tabacumL.)obtained from large scale microsatellite marker development.Theoretical and Applied Genetics,2011,123(2):219-230.

[14]Fricano A,Bakaher N,Piffanelli P,et al.Molecular diversity,population structure,and linkage disequilibrium in a worldwide collection of tobacco(Nicotiana tabacumL.)germplasm.BMC genetics,2012,13(1):18.

[15]Xia Y S,Guo P G,Li R H,et al.Analysis of genetic diversity and population structure using SSR markers in tobacco.Advanced Materials Research,2013,850-851(3):1243-1246.

[16]張雪廷，童治軍，焦芳蟬，等.38份晾曬煙種質(zhì)資源遺傳關系的SSR分析[J].植物遺傳資源學報，2013，14（4）：653-658,678.ZHANG Xueting,TONG Zhijun,JIAO Fangchan,et al.Genetic relationship analysis of thirty-eight sun/Air-cured tobacco germplasms based on simple sequence repeat(SSR)Markers[J].Journal of Plant Genetic Resources,2013,14(4):653-658,678.

[17]任學良.煙草種質(zhì)資源DNA指紋圖譜[M].北京：科學出版社，2010.REN Xueliang.DNA fingerprint of tobacco germplasm resources[M].Beijing:Science Press,2010.

[18]聶瓊，劉仁祥.23份煙草種質(zhì)遺傳多樣性的SSR和ISSR標記分析[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2011，24（1）：15-19.NIE Qiong,LIU Renxiang.Genetic diversity of 23 tobacco germplasm resources by SSR and ISSR analysis[J].Southwest China Journal of Agricultural Sciences,2011,24(1):15-19.

[19]Nei M.Genetic distance between populations[J].The American Naturalist,1972,106(949):283-292.

[20]Nei M.Estimation of average heterozy gosity and genetic distance from a small number of individuals[J].Genetics,1978,89(3):583-590.

[21]Rohlf F J.NTSYS-pc:Microcomputer programs for numerical taxonomy and multivariate analysis[J].The American Statistician,1987,41(4):330.

[22]中國農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所.煙草栽培技術[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1980.Institute of tobacco research of CAAS.Tobacco cultivation techniques[M].Beijing:Agricultural Press,1980.

[23]楊柳，汪斌，童治軍，等.25份普通煙草種質(zhì)資源遺傳多樣性的SSR標記分析[J].福建農(nóng)林大學學報（自然科學版），2013，42（2）：171-175．YANG Liu,WANG Bin,TONG Zhijun,et al.Genetic diversity analysis of 25Nicotiana tabacumL.germplasm resources based on SSR marker[J].Journal of Fujian Agriculture and Forestry University(Natural Science Edition),2013,42(2):171-175.

[24]張吉順，張孝廉，楊春元，等.地方曬煙種質(zhì)資源SRAP標記的遺傳多樣性分析[J].分子植物育種，2016，14（07）：1906-1913.ZHANG Jishun,ZHANG Xiaolian,YANG Chunyuan,et al.The genetic diversity analysis of sun-cured tobacco landraces germplasms by SRAP markers[J].Molecular Plant Breeding,2016,14(07):1906-1913.

[25]徐軍，劉艷華，任民，等.普通煙草種質(zhì)資源的SSR標記與指紋圖譜分析[J].中國煙草科學，2011，32（2）：62-65.XU Jun,LIU Yanhua,REN Min,et al.SSR fi ngerprint map analysis of tobacco germplasms[J].Chinese Tobacco Science,2011,32(2):62-65.

[26]黃莉莎，曹恒春，王毅，等.煙草主栽品種的SSR指紋圖譜的構建及其應用[J].山東農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版），2013，44（4）：509-515.HUANG Lisha,CAO Hengchun,WANG Yi,et al.Using SSR markers to construct a fingerprint map of major tobacco cultivars[J].Journal of Shandong Agricultural University(Natural Science Edition),2013,44(4):509-515.

Construction of SSR markers’ fi ngerprints of 33 sun-cured tobacco germplasm resources

LIU Guoxiang,ZOU Kunyan,REN Min,TONG Ying,FENG Quanfu,YANG Aiguo,DAI Peigang,XU Yimin,ZHANG Xingwei*
Key Laboratory of Tobacco Biology and Processing,Ministry of Agriculture,Tobacco Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Qingdao 266101,Shandong,China

In order to analyze genetic diversity and to construct fingerprint of sun-cured tobacco germplasm resources,33 sun-cured tobacco germplasm resources were studied using 25 simple sequence repeat(SSR)markers.Results showed that a total of 112 alleles among these varieties were identi fi ed at all of 25 SSR markers loci,and an average of 4.31 alleles was observed for each primer pair with average heterozygosity(Ho)0.0028,average expected heterozygosity(He)0.6039.Shannon’s index was 1.1389,Nei’s index was 0.5693.Results also showed that genetic diversity of 33 sun-cured tobacco germplasm resources was relatively abundant.These varieties were divided into two groups at genetic similarity coefficient of 0.345 by UPGMA cluster analysis.Meanwhile,25 pairs of primers were used to construct fi ngerprints of 33 sun-cured tobacco,which laid a theoretical foundation for research on identi fi cation system of sun-cured tobacco varieties.The study can provide reference for sun-cured tobacco germplasm resources identi fi cation,utilization and gene discovery.

sun-cured tobacco; germplasm resources; simple sequence repeat(SSR); genetic diversity; fi ngerprint

劉國祥，鄒昆晏，任民，等.33份曬煙種質(zhì)資源SSR標記的指紋圖譜構建[J].中國煙草學報，2017,23（5）

國家煙草專賣局專項“中國煙草種質(zhì)資源平臺建設”（國煙辦綜[2005]501號）、中國煙草總公司海南省公司項目（20164600020007）和中國農(nóng)業(yè)科學院科技創(chuàng)新工程（ASTIP-TRIC01）

劉國祥（1988—），助理研究員，博士，主要研究方向為煙草種質(zhì)資源，Tel：0532-88702169，Email:liuguoxiang@caas.cn

張興偉（1978—），副研究員，博士，主要研究方向為煙草種質(zhì)資源，Tel：0532-88702169，Email:zhangxingwei@caas.cn

2017-05-05；< class="emphasis_bold">網(wǎng)絡出版日期：

日期：2017-09-06

：LIU Guoxiang,ZOU Kunyan,REN Min,et al.Construction of SSR markers’ fi ngerprints of 33 sun-cured tobacco germplasm resources[J].Acta Tabacaria Sinica,2017,23(5)

*Corresponding author.Email：zhangxingwei@caas.cn