松墨天牛NCOA7基因的克隆及分析

劉琪司，陳敬祥，林 同*

(1.廣州市林業和園林有害生物防治檢疫管理辦公室,廣東 廣州 510060；2.華南農業大學林學與風景園林學院，廣東 廣州 510642)

松墨天牛NCOA7基因的克隆及分析

劉琪司1，陳敬祥2，林 同2*

(1.廣州市林業和園林有害生物防治檢疫管理辦公室,廣東 廣州 510060；2.華南農業大學林學與風景園林學院，廣東 廣州 510642)

【目的】本文探究了松墨天牛核受體共激活因子7基因的功能和作用方式。【方法】采用cDNA末端快速擴增(RACE)方法獲得了松墨天牛NCOA7基因的cDNA全長序列，命名為MaNCOA7 (GenBank登錄號：KU240004) ；通過RT-qPCR分析得出松墨天牛MaNCOA7 基因在卵、幼蟲、蛹、成蟲4個蟲態、幼蟲脂肪體等6個組織和成蟲鞘翅等10個部位的表達模式。【結果】MaNCOA7基因的cDNA序列全長為3345 bp，其中開放閱讀框(ORF) 長2970 bp，編碼989個氨基酸，由此推測的蛋白分子質量為111 220.4 ku，等電點為5.11。MaNCOA7的氨基酸序列與赤擬谷盜相似性最高，為83.6 %，與赤擬谷盜處在系統發育樹的同一個分支上；沒有信號肽和跨膜區，屬于親水性氨基酸，含有絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位點數分別為62、21、11 個。MaNCOA7基因在幼蟲蟲態表達量最高，在卵蟲態表達量最低；在幼蟲6個組織中均有表達，且有顯著差異(P< 0.05)，其中在幼蟲脂肪體中表達量最高，在幼蟲馬氏管中表達量最低；在成蟲10個部位中均有表達，且有顯著差異(P< 0.05)，其中在成蟲鞘翅的表達量最高，在成蟲馬氏管的表達量最低。【結論】推測MaNCOA7基因在松墨天牛幼蟲脂肪體中參與調控某些代謝過程或組織器官的生理功能，并可能參與了松墨天牛羽化過程中鞘翅和前胸背板的骨化過程。

松墨天牛；核受體共激活因子7；基因克隆；RT-qPCR；基因表達模式

【研究意義】松墨天牛(Monochamusalternatus)，屬鞘翅目(Goleoptera)，天牛科(Cerambycidae)，為有“森林癌癥”之稱的松材線蟲病Bursaphelenchusxylophilus的主要媒介昆蟲，對馬尾松等針葉樹種危害嚴重[1-2]。核受體是生物體內最豐富的轉錄因子超家族之一，核受體與其配體及眾多共激活因子相互作用的基因網絡的協調表達共同調控機體的生長發育、細胞分化、生理及代謝過程[3]。核受體共激活因子7 (nuclear receptor coactivator 7, NCOA7) 是一種雌激素受體蛋白[4]，可以保護細胞DNA 氧化損傷[5-8]。【前人研究進展】核受體調節轉錄，直接對其同源的激素配體進行反應，配體結合激活共激活體，通過內在的組蛋白修飾，重塑染色質。此外，配體結合的復合物直接地作用于轉錄過程，這表明核受體的轉錄調節可能涉及到染色質的改變，是調節啟動子的關鍵啟動組件[9]。核受體共激活因子通過參與一系列的酶活動，如乙酰化，甲基化，泛素化，磷化，或染色質重塑能引起增強的基因表達，除了參與調節啟動子外，廣泛參與從細胞核的mRNA轉運、mRNA翻譯和合成蛋白的轉錄后修飾[10]。研究認為，NCOA7對雞胚胎發育期的肌肉組織肌管發育和肌纖維形成可能有一定的促進作用，并可能對出生后雞肌肉的發育具有一定的負調控作用[11]。目前尚未見昆蟲NCOA7基因研究的相關報道。【本研究切入點】本研究從已構建的松墨天牛cDNA 文庫[12]中篩選出一條帶有5'末端的NCOA7基因序列，用RACE方法擴增了3'末端；經拼接獲得了這一基因的cDNA全長序列，并對其生物學特性和表達模式進行了分析。【擬解決的關鍵問題】該研究以期為深入研究該基因在松墨天牛中的功能奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

本試驗使用的主要試劑見表1。

1.2 總RNA的提取與cDNA的合成

采用試劑盒法提取松墨天牛幼蟲、成蟲mRNA，通過1.5 %瓊脂糖凝膠電泳檢測mRNA 的提純質量，并用微量紫外分光光度儀 (Nanodrop 2000) 對其純度進行檢測并對其定量后，將檢測結果符合后續實驗要求的樣品暫存在-80 ℃超低溫冰箱供后續實驗使用。按 PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Eraser反轉錄試劑盒說明書對上述mRNA樣品進行反轉錄反應，將得到的第一鏈cDNA樣品暫存于-20 ℃冰箱，用于后續3' RACE實驗。

1.3 引物設計和3'RACE擴增

通過GenBank數據庫Blast比對從本實驗室所構建的松墨天牛cDNA文庫[12]中篩選出一條與昆蟲NCOA7相似的帶有完整5'末端的序列。用primer premier 5.0設計該序列的特異性引物用于3' RACE (MaNCOA7 Outer: GGAAATGGACACAGAGC; MaNCOA7 Inner: TCTTCAGCACCAGCCAG)，引物合成由上海生物工程有限公司完成。

結合3′-Full RACE Core Set with Prime Script TM RTase試劑盒提供的2個下游引物進行巢式PCR反應。根據試劑盒使用說明書方法，首先進行Outer PCR擴增，反應條件為：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，20 cycles，72 ℃ 10 min。然后進行Inner PCR擴增，反應條件為：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30 cycles，72 ℃ 10 min。通過1.5 % 瓊脂糖凝膠電泳對PCR產物的片段大小及樣品純度進行分析后，對目的片段進行純化回收，并將純化回收產物與pMD20-T 載體連接，轉化大腸桿菌后，挑選陽性克隆樣品送上海生物工程有限公司測序得到正確的重組子。

1.4 推測的編碼蛋白特性分析

對拼接后的序列查找其開放閱讀框(ORF) ，對其進行相似性比對分析、計算蛋白質的等電點與分子量、預測蛋白質信號肽、磷酸化修飾位點和糖基化修飾位點、分析蛋白質疏水性和跨膜結構域。具體蛋白質特性分析途徑見表2。

表1 實驗試劑

表2 蛋白質特性分析途徑

1.5 系統發育樹構建

使用DNAMAN軟件對從NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) GenBank數據庫中檢索得到的所有昆蟲NCOA 7氨基酸序列進行同源性比對，并應用Clustal X和MEGA 4.0軟件通過NJ法對昆蟲NCOA 7構建系統發育樹。

1.6 RT-qPCR

應用primer premier 5.0軟件在MaNCOA7基因ORF范圍內設計一對特異性引物MaQ F: 5′-GTGGAAATGGACACAGAGC-3′和MaQ R:5′-CGTGAAGGTGAATAAGGAG-3′用于RT-qPCR。采用RT-qPCR(SYBR Green)，以微管蛋白基因(β-actin)作為內參基因，以無菌超純水作為陰性對照，以MaNCOA7基因在松墨天牛卵的表達量作為標準參量，檢測MaNCOA7基因在幼蟲、蛹、成蟲各蟲態的表達模式；分別以松墨天牛幼蟲和成蟲的表達量作為標準參量，分別檢測MaNCOA7基因在幼蟲各組織和成蟲各部位的表達模式。使用羅氏LightCycler480熒光定量PCR 儀進行上述RT-qPCR反應，設置cDNA樣品各3次重復，反應程序為: 95 ℃預變性 30 s；Quantification: 95 ℃ 5 s，60 ℃ 20 s，40 cycles；Melting curves: 95 ℃ 1 s，65 ℃ 15 s；Cooling: 40 ℃ 30 s。反應結束后利用2-ΔΔCt相對定量法計算目標基因的表達模式。

2 結果與分析

2.1 MaNCOA7特性分析

將3′ RACE測序結果與已知序列片段拼接獲得松墨天牛NCOA7基因的cDNA全長序列，命名為MaNCOA7 (GenBank登錄號: KU240004) ，全長3345 bp，其中開放閱讀框(ORF)長2970 bp，編碼989個氨基酸(圖1)，推測的蛋白分子質量為111 220.4 ku，等電點為5.11。

跨膜區域分析結果顯示，MaNCOA7蛋白在膜外，不存在跨膜區域，亦無信號肽。預測MaNCOA7的磷酸化修飾位點共有94個，其中絲氨酸(Ser)磷酸化位點、蘇氨酸(Thr)磷酸化位點和酪氨酸(Tyr)磷酸化位點分別有62、21和11個，這些位點在整個多肽鏈中呈現均勻分布。NetOGlye預測表明，MaNCOA7在164、217、312、921氨基酸位點存在N-糖基化修飾。疏水性分析表明在MaNCOA7的300～350氨基酸位有一個明顯的疏水性區域，但在整個多肽鏈中，親水性氨基酸多于疏水性氨基酸，因此MaNCOA7屬于親水性氨基酸。

2.2 同源性比對及進化樹構建

MaNCOA7與赤擬谷盜(Triboliumcastaneum)等15種昆蟲的NCOA7氨基酸序列同源性比對結果見表3，可見MaNCOA7與赤擬谷盜的同源性最高，為83.6 %，與其它14種昆蟲的同源性介于45 %～55 %。基于這15種昆蟲NCOA7所構建的系統發育樹表明：松墨天牛與赤擬谷盜處在系統發育樹的同一個分支上，與其余昆蟲遺傳距離相對較遠(圖2)。這一結果與這些昆蟲的分類地位是一致的。

2.3 MaNCOA7 的表達模式

通過RT-qPCR分析MaNCOA7 在松墨天牛4個蟲態、幼蟲6個組織和成蟲10個部位的表達模式，結果表明:MaNCOA7 基因在松墨天牛幼蟲蟲態中的表達量最高，在卵蟲態中的表達量最低，在松墨天牛蛹蟲態和成蟲蟲態中的表達量分別是在松墨天牛卵蟲態中的表達量的1.21和1.34倍，基因表達水平在4個蟲態之間有顯著差異(P< 0.05，圖3)。

MaNCOA7 基因在松墨天牛幼蟲各組織中的表達模式為：在脂肪體中的表達量最高，為對照的5.5倍；其次為在頭部的表達量，是對照的2.55倍；在體壁和中腸中的表達量相同，同為對照的1.69倍。MaNCOA7 在上述4個幼蟲組織中的表達量高于對照。該基因在馬氏管中的表達量最低，為對照的0.91倍。基因在幼蟲各組織中的表達有顯著差異(P< 0.05，圖4)。

起始密碼子表示為下劃波浪線，終止密碼子表示為*，特異性引物outer表示為單下劃線，特異性引物inner表示為雙下劃線，蘇氨酸磷酸化位點以矩形表示，絲氨酸磷酸化位點以圓形表示，酪氨酸磷酸化位點以三角形表示，糖基化位點以加粗字體表示，疏水性區域以灰色字符底紋突出顯示The translation start codon ‘ATG’ is marked with a wavy underline; The stop codon ‘TAA’ is marked with an asterisk; The specific primers outer is marked with a single underline and the specific primers inner is underlined with double line; The threonine phosphorylation sites, serine phosphorylation sites and p-hydroxyphenylalanine sites are marked with squares, rounds and triangles, respectively; The glycosylation sites are marked in bold; The hydrophobic region is highlighted by gray character shading圖1 MaNCOA7的核苷酸和氨基酸序列Fig.1 MaNCOA7 nucleotide and amino acid sequences

中文名稱學名分類地位與MaNCOA7的同源性(%)赤擬谷盜Triboliumcastaneum鞘翅目83.60毀側溝繭蜂Microplitisdemolitor膜翅目54.62子彈蟻Dinoponeraquadriceps膜翅目54.55畢氏粗角猛蟻Cerapachysbiroi膜翅目54.26苜蓿切葉蜂Megachilerotundata膜翅目53.19麗蠅蛹集金小蜂Nasoniavitripennis膜翅目52.52紅火蟻Solenopsisinvicta膜翅目51.93新疆菜葉蜂Athaliarosae膜翅目51.32法老小家蟻Monomoriumpharaonis膜翅目50.54小火蟻Wasmanniaauropunctata膜翅目50.54切葉蟻Attacephalotes膜翅目50.16弓背蟻Camponotusfloridanus膜翅目49.65短管赤眼蜂Trichogrammapretiosum膜翅目48.57麥莖蜂Cephuscinctus膜翅目45.46瓜實蠅Bactroceracucurbitae雙翅目45.79

圖2 基于16種昆蟲的NCOA7基因氨基酸序列所構建的系統發育樹Fig.2 Phylogenetic relationships of based on 16 insects NCOA7

圖3 MaNCOA7基因在松墨天牛4個蟲態的表達模式Fig.3 MaNCOA7 expression pattern in 4 Monochamus alternatus stages

圖4 MaNCOA7基因在松墨天牛幼蟲6個組織的表達模式Fig.4 MaNCOA7 expression pattern in 6 Monochamus alternatus larva parts

MaNCOA7 基因在松墨天牛成蟲各部位中的表達模式為: 在鞘翅中的表達量最高，是對照的58.49倍；其次是在前胸中的表達量，為對照的34.54倍；

圖5 MaNCOA7基因在松墨天牛成蟲10個部位的表達模式Fig.5 MaNCOA7 expression pattern in 10 Monochamus alternatus adult parts

該基因在上述2個成蟲部位中的表達量顯著高于其在其它成蟲部位中的表達量。除上述2個成蟲部位外，該基因還在成蟲的中腸、具翅胸、腹部、足和觸角中的表達量高于對照。MaNCOA7 基因在馬氏管中的表達量最低，為對照的0.78倍，除此之外，其在成蟲頭部和卵巢中的表達量亦均低于對照，分別為對照的0.83和0.81倍。在各部位間，MaNCOA7基因表達差異顯著(P< 0.05，圖5)。

3 小 結

本研究采用RACE技術得到松墨天牛核受體共激活因子7基因，這是在松墨天牛中發現的第一個NCOA7，對其進行了相似性比對分析、蛋白質的等電點與分子量計算、蛋白質信號肽、磷酸化修飾位點和糖基化修飾位點預測、蛋白質疏水性和跨膜結構域分析，并通過RT-qPCR分析得出松墨天牛MaNCOA7 基因在卵、幼蟲、蛹、成蟲4個蟲態、幼蟲脂肪體等6個組織和成蟲鞘翅等10個部位的表達模式。

對MaNCOA7基因的生物信息學分析表明，該基因的cDNA序列全長為3345 bp，其中開放閱讀框(ORF) 長2970 bp，編碼989個氨基酸，由此推測的蛋白分子質量為111 220.4 ku，等電點為5.11。MaNCOA7的氨基酸序列與赤擬谷盜相似性最高，為83.6 %，與赤擬谷盜處在系統發育樹的同一個分支上；沒有信號肽和跨膜區，屬于親水性氨基酸，含有絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位點數分別為62、21、11 個。

對MaNCOA7基因表達模式的實驗結果顯示，MaNCOA7基因在幼蟲蟲態表達量最高，在卵蟲態表達量最低；在幼蟲6個組織中均有表達，且有顯著差異(P< 0.05)，其中在脂肪體中表達量最高，馬氏管中表達量最低；在成蟲各部位均有表達，且有顯著差異(P< 0.05)，其中在鞘翅的表達量最高，馬氏管的表達量最低。

4 討 論

同源比對分析表明，MaNCOA7與其它昆蟲NCOA7同源一致性介于45 %～85 %，說明NCOA7亞型具有多樣性。系統發育樹中各目昆蟲的NCOA7最后均各自匯聚為一支，表明NCOA7可能在不同目的昆蟲中發揮不同的功能。MaNCOA7與赤擬谷盜NCOA7同源相似性最高，且二者在系統發育樹匯聚為一支，表明MaNCOA7最有可能與赤擬谷盜NCOA7來自同一祖先基因，并在這兩種昆蟲中行使相似的功能。

蛋白質翻譯后修飾通過使蛋白質的結構更加復雜，達到完善蛋白質功能，使蛋白質作用更專一，調節能力更強大的效果[13]。N-糖基化位點是了解糖鏈功能的基礎，而糖基化在蛋白的翻譯調控、信號傳導以及細胞免疫和蛋白降解等生物過程中均起著重要的作用[14]。蛋白質磷酸化作用于細胞信號轉導[15]。真核生物主要通過絲氨酸、蘇氨酸及酪氨酸等氨基酸殘基的磷酸化廣泛調節細胞的信號因子釋放、基因表達、蛋白合成、能量儲存、形態變化、肌肉收縮和生化代謝等功能[16]。本研究中糖基化位點預測顯示MaNCOA7氨基酸序列中存在4個N-糖基化修飾位點，分別位于164、217、312、921氨基酸位點；預測到MaNCOA7的絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位點數分別為62、21、11 個，據此推測MaNCOA7可能在上述功能中發揮作用。

NCOA7屬于雌激素受體蛋白[4]，是核受體超家族成員之一。核受體是生物體內最豐富的轉錄因子超家族之一，核受體與其配體及眾多共激活因子相互作用的基因網絡的協調表達共同調控機體的生長發育、細胞分化、生理及代謝過程[3]。本研究分析了MaNCOA7 基因的表達量，顯示其在各齡期、幼蟲各組織和成蟲各部位廣泛表達，暗示該基因可能參與松墨天牛機體的生長發育、細胞分化以及體內某些特定的生理、代謝過程的調控。

探究MaNCOA7在松墨天牛幼蟲各組織中的表達模式發現，該基因在脂肪體中的表達量顯著高于在其它組織中的表達量。脂肪體是昆蟲生命代謝活動的中心組織，是多種激素作用的靶組織,它強烈地影響昆蟲體內各個組織器官的生理功能[16]。由此可推測MaNCOA7在松墨天牛幼蟲脂肪體中參與調控某些代謝過程或組織器官的生理功能。

在分析松墨天牛成蟲各部位MaNCOA7表達模式中發現，鞘翅和前胸的表達量顯著高于其它各部位[17]。還發現MaNCOA7在蛹中的表達量顯著低于成蟲，可能的原因是：鞘翅目昆蟲鞘翅和前胸背板高度骨化，根據觀察，松墨天牛蛹期尚無明顯骨化現象，在羽化之后鞘翅、前胸背板骨化過程基本完成，因而推想該基因可能參與了松墨天牛羽化過程中鞘翅和前胸背板的骨化過程。

本研究使首次研究松墨天牛NCOA7基因，該基因在昆蟲領域鮮有文章報道，故有待進一步深入研究才能充分證明推測和預測的可靠性。依據本研究的推想，后續實驗擬對松墨天牛每日齡的蛹及初羽化成蟲進行MaNCOA7 基因的表達量檢測，以確定MaNCOA7在蛹和初羽化成蟲中的動態表達模式；對松墨天牛蛹和初羽化成蟲MaNCOA7進行RNA干擾，并結合RT-qPCR以及電鏡觀察等確定該基因是否與松墨天牛鞘翅、前胸的骨化過程相關并深入研究MaNCOA7在松墨天牛鞘翅骨化過程中的作用機理。

[1]胡長效，蘇新林，張艷秋. 我國松墨天牛研究進展[J].河北林果研究，2003，18(3)：293-299.

[2]呂傳海，濮厚平，韓 兵，等. 松墨天牛生物學特性研究[J]. 安徽農業大學學報，2000，27(3)：243-246.

[3]Howard M B, Ekborg N A, Taylor L E, et al. Identification and analysis of polyserine linker domains in prokaryotic proteins with emphasis on the marine bacteriumMicrobulbiferdegradans[J]. Protein Sci, 2004, 13(5): 1422-1325.

[4]Qin Y, Wei X, Song X. Engineering endoglucanase II fromTrichodermareeseito improve the catalytic efficiency at a higher pH optimum[J]. J Biotechnol, 2008, 135(2): 190-195.

[5]Durand M, Kolpak A, Farrell T, et al. The OXR domain defines a conserved family of eukaryotic oxidation resistance proteins[J]. BMC Cell Biol, 2007, 8(1): 13.

[6]Shao W, Halachmi S, Brown M. ERAP140, a conserved tissue-specific nuclear receptor coactivator[J]. Mol Cell Boil, 2002, 22(10): 3358-3372.

[7]Shkolnik K, Ben-Dor S, Galiani D, et al. Molecular characterization and bioinformatics analysis of NCOA7B, a novel ovulation-associated and reproduction system-specific NCOA7 isoform[J]. Reproduction, 2008, 135(3): 321-333.

[8]Lijian Yu, Ed Croze, Ken D. Yamaguchi, et al. Induction of a unique isoform of the NCOA7 oxidation resistance gene by interferon β-1b[J]. Journal of Interferon & Cytokine Research, 2015, 35(3): 186-199.

[9]DM Lonard,BW O′Malley.The Expanding Cosmos of Nuclear Receptor Coactivators[J].Cell, 2006, 125 (3):411.

[10]BD Lemon,LP Freedman.Nuclear receptor cofactors as chromatin remodelers[J].Current Opinion in Genetics & Development, 1999, 9 (5):499-504.

[11]汪芳杰，劉冉冉，鄭麥青，等. 雞NCOA7基因在成肌細胞分化和腿肌組織發育中的表達特性分析[J].中國家禽，2013，35(S)：74-77.

[12]韋春梅，羅淋淋，吳華俊，等. 松墨天牛幼蟲cDNA文庫的構建及EST分析[J]. 基因組學與應用生物學，2014，33(1)：113-120.

[13]白海艷，呂 軍，張 穎，等.蛋白質磷酸化位點的識別[J]. 內蒙古工業大學學報(自然科學版)，2011，30(2)：108-115.

[14]李 軍，杜 鑫，Hosseini，等. 蛋白質糖基化修飾研究進展[J]. 科技通報， 2009，25(6)：773-778,783.

[15]梁前進，王鵬程，白燕榮.蛋白質磷酸化修飾研究進展[J]. 科技導報，2012，30(31)：73-79.

[16]潘 暢，張宇宏，謝佳沁，等. 孟氏隱唇瓢蟲氣味結合蛋白ComOBP1基因的克隆和時空表達[J]. 環境昆蟲學報，2016，38(2)：249-260.

[17]吳秋雁. 昆蟲脂肪體的代謝作用[J]. 昆蟲知識，1981(2)：92-95.

CloningandAnalysisofNuclearReceptorCoactivator7GenefromMonochamusalternatus

LIU Qi-si1, CHEN Jing-xiang2, LIN Tong2*

(1.Guangzhou Forestry and Landscape Pest Control and Quarantine Office，Guangdong Guangzhou 510060, China 2.College of Forestry and Landscape Architecture, South China Agricultural University, Guangdong Guangzhou 510642, China)

【Objective】In this paper, the function and mode of nuclear receptor coactivator 7 gene inMonochamusalternateswere studied.【Method】A full length sequence ofNCOA7 designated asMaNCOA7 (GenBank: KU240004) fromMonochamusalternatuswas cloned by RACE (rapid-amplification of cDNA ends) method, and the expression pattern ofMaNCOA7 in different stages and different parts of both larvae and adults ofMonochamusalternatuswere detected by RT-qPCR.【Result】The full-length cDNA ofMaNCOA7 was 3345 bp, which contained a 2970 bp open reading frame (ORF),encoding 989 amino acids, with a calculated molecular mass of 111 220.4 ku and an isoelectric point of 5.11. The MaNCOA7 indicated the highest homology withTriboliumcastaneum(83.6 %),andM.alternatusandT.castaneumwere on the same branch in the phylogenetic tree;The MaNCOA7 protein was hydrophilic, without the signal peptide and transmembrane helices, and there were serine, threonine and p-hydroxyphenylalanine phosphorylation at 62, 21 and 11 sites in MaNCOA7, respectively. The expression pattern ofMaNCOA7 detected by RT-qPCR indicated that the expression level ofMaNCOA7 in larvae was the highest, and the lowest in eggs;MaNCOA7 was prominently expressed in all of the larvae and adults parts (P< 0.05)．The expression level in larvae fat-body and adults elytra were the highest while the lowest were in both larvae and adults Malpighian tubes (P< 0.05).【Conclusion】It is speculated that theMaNCOA7 gene participate in the regulation of certain metabolic processes or physiological functions of tissues and organs in the fat bodies ofMonochamusalternateslarvae and may be involved in the process of the ossification of elytron and pronotum ofMonochamusalternates.

Monochamusalternates;NCOA7; Gene cloning; RT-qPCR; Gene expression pattern

1001-4829(2017)10-2256-07

10.16213/j.cnki.scjas.2017.10.017

2016-09-20

國家自然科學基金(31470653)；廣東省自然科學基金(1414050001666)

劉琪司(1993-)，女，廣東興寧人，碩士研究生，主要研究方向：昆蟲分子生物學，E-mail：949082502@qq.com，Tel：13724043273；*為通訊作者，林 同，E-mail：lintong@scau.edu.cn。

S763.38;Q785

A

(責任編輯 陳 虹)