核桃油對大鼠青光眼模型視神經節細胞的保護作用

謝林英，謝靜，張海清

（贛南醫學院第一附屬醫院眼科，江西 贛州 341000）

核桃油對大鼠青光眼模型視神經節細胞的保護作用

謝林英，謝靜，張海清

（贛南醫學院第一附屬醫院眼科，江西 贛州 341000）

目的 觀察核桃油對大鼠青光眼視網膜神經節細胞的保護作用。方法 采用前房灌注生理鹽水法形成150 cmH2O（14.63 kPa）高眼壓，誘導大鼠視網膜缺血60min，建立急性青光眼模型。正常對照組、青光眼模型對照組、模型加藥組。均取左眼對照。分別在3 d、5 d、7 d觀察視網膜節細胞數及視網膜各層厚度。結果 模型對照組3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目均較正常對照組發生明顯降低（P＜0.05）；模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目均較模型對照組發生顯著升高（P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目比較差異無統計學意義。模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網膜內叢狀層、內核層厚度與模型對照組比較，均發生顯著增多或增厚，差異存在統計學意義（P＜0.05）。模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d時視網膜內叢狀層、內核層、外核層厚度比較差異無統計學意義。結論核桃油對實驗性青光眼視網膜神經節細胞具有保護作用，在今后的臨床研究與實踐中，應對其給予足夠的重視。

核桃油；青光眼；大鼠模型；視網膜神經節細胞；保護作用

核桃，又名胡核，核桃仁含油量高達65%～70%，其中不飽和脂肪酸含量高達80%以上。核桃油具有很高的營養價值，自古以來作為營養食品，尤其是其中富含亞油酸、亞麻酸及多種微量元素是神經組織中細胞脂肪成分的良好來源[1]。目前對核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分離方面，而對其視網膜神經節細胞的保護研究卻鮮有文獻報道[2]。本課題探討核桃油對青光眼視網膜神經節細胞影響以及作用機制，證明核桃是具有中國特色和開發價值的中醫藥品及食品。研究中，建立了急性青光眼大鼠模型，并展開了分組實驗，結果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗所需試劑包括：濃度為4%的中型甲醛，濃度為4%的水合氯醛，濃度為1%的利多卡因，濃度為1%的氯霉素眼藥水，核桃油。實驗所需儀器包括：尼康公司的光學顯微鏡，石蠟切片機（購自德國Nussloch）。實驗動物：90只健康、成年雄性SD大鼠。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 取Sprague Dawley成年大鼠，清潔級，雄性，體質量250～300 g。成年SD大鼠90只。隨機分為3組：正常對照組（對照組），青光眼損傷對照組（損傷組），青光眼損傷后核桃油喂養組[喂養動物喂養時間為30 d。核桃油的劑量為1 000mg/（kg·d）]。均取左眼對照。而后取3組大鼠視網膜病理切片及鋪片，顯微鏡觀察視網膜神經節細胞數及IPL、INL厚度。

1.2.2 造模方法 采用前房灌注生理鹽水法形成150 cm H2O（14.63 kPa）高眼壓，誘導大鼠視網膜缺血60min，建立急性青光眼模型。

1.2.3 標本采集 按照預先分組，在第3、5、7天進行斷頭處死大鼠，迅速將眼球摘除，經亞甲藍對角膜上極、視神經短端進行標記，角膜上扎一個小孔，浸潤在4%中型甲醛中，進行固定，持續24 h，而后將固定好眼球經角膜上極、視神經斷端對稱將眼球剖開，梯度酒精脫水，而后浸蠟。常規石蠟包埋后，連續4μm切片，進行常規蘇木精-伊紅染色。

1.2.4 顯微鏡觀察 經攝像顯微鏡對標本進行觀察，同時照相，對高倍視野內視網膜節細胞數目進行統計，同時對視乳頭周圍1mm處視網膜各層厚度進行測量。

1.3 觀察指標 對比分析各組實驗動物視網膜節細胞數、內叢狀層以及內核層、外核層厚度。

1.4 統計學方法 采取SPSS18.0統計學軟件進行處理，計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數資料以率（%）表示,采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組視網膜節細胞數目對比 經統計發現，模型對照組3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目均較正常對照組發生明顯降低（P＜0.05）；模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目均較模型對照組發生顯著升高（P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目比較差異無統計學意義，見表1。

表1 3組視網膜節細胞數目對比

表1 3組視網膜節細胞數目對比

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，與模型對照組比較，b P＜0.05

7 d 17.0±1.6 9.0±2.7a 17.0±2.1b組別正常對照組模型對照組模型加藥組3 d 21.0±3.2 10.0±1.3a 19.0±3.5b 5 d 18.0±2.4 9.0±3.1a 17.0±3.4b

2.2 視網膜 經統計發現，模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網膜內叢狀層、內核層厚度與模型對照組比較，均發生顯著增多或增厚，差異存在統計學意義（P＜0.05）。模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d時視網膜內叢狀層、內核層、外核層厚度比較差異無統計學意義，見表2、3、4。

表2 3組視網膜內叢狀層厚度比較

表2 3組視網膜內叢狀層厚度比較

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，與模型對照組比較，b P＜0.05

組別正常對照組模型對照組模型加藥組7 d 57.1±4.5 26.5±2.1a 43.6±3.1b 3 d 58.4±4.3 28.9±1.6a 49.8±4.3b 5 d 56.9±3.7 28.1±2.3a 46.7±2.5b

表3 3組視網膜內核層厚度比較

表3 3組視網膜內核層厚度比較

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，與模型對照組比較，b P＜0.05

組別正常對照組模型對照組模型加藥組7 d 31.2±3.2 16.6±2.1a 21.5±3.2b 3 d 30.2±3.1 19.9±2.3a 24.1±2.5b 5 d 29.9±2.7 17.3±1.4a 22.3±1.5b

表4 3組視網膜外核層厚度比較（

表4 3組視網膜外核層厚度比較（

7 d 41.1±1.7 39.2±1.4 39.2±2.3組別正常對照組模型對照組模型加藥組3 d 40.5±2.1 38.8±1.6 40.8±1.8 5 d 41.3±1.8 37.2±1.9 39.9±1.6

3 討論

青光眼是最常見的眼科疾病之一，可發于各年齡段，是危害人群致盲的首要原因。青光眼嚴重影響了人群的生活及工作。青光眼最早期癥狀往往表現為視力的明顯下降，出現視網膜神經節細胞的凋亡。有研究證實，青光眼患者中，存在諸多致病因素，會造成患者視神經細胞凋亡[3]。開發一種安全、經濟、有效的對青光眼視網膜神經節保護作用的藥物具有重要的臨床意義[4]。近幾年，隨著醫學技術水平的不斷提高，基因工程、細胞因子學、中西醫保護視網膜神經細胞凋亡的研究越來越多[5]。核桃自古以來作為營養食品，它富含的亞油酸、亞麻酸及多種微量元素對神經細胞具有很好的修復作用[6]。目前對核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分離方面，而對其神經營養保護功能及機制研究鮮有文獻報道[7]。本次研究中，出于對核桃油對大鼠青光眼模型視神經節細胞的保護作用進行研究分析的目的，建立了急性青光眼大鼠模型，并展開了分組實驗，結果發現，模型對照組3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目均較正常對照組發生明顯降低；模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目均較模型對照組發生顯著升高；模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d的視網膜節細胞數目無明顯差異。模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網膜內叢狀層、內核層厚度與模型對照組比較，均發生顯著增多或增厚，差異有統計學意義（P＜0.05）。模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d時視網膜內叢狀層、內核層、外核層厚度無明顯差異。這一結果與相關文獻[8]報道結果相似，充分證實核桃油對實驗性青光眼視網膜神經節細胞具有保護作用，在今后的臨床研究與實踐中，應對其給予足夠的重視。

[1] 袁援生.青光眼流行病學研究進展[J].昆明醫學院學報,2010,31(9):1-3.

[2] 樓航芳,葛鋼鋒.中西醫聯合用藥對糖尿病大鼠視網膜神經節細胞bcl-2和bax基因表達的影響[J].浙江中醫藥大學學報,2010,34(2):146-145.

[3] 游玉霞,李玉潔,張海娟,等.杞貞膠囊對視網膜神經節細胞保護作用及其作用機制的實驗研究[J].眼科,2014,23(6):402-405.

[4] 張芳玲,邵蔚.銀杏葉提取物注射液對NMDA誘導的視網膜神經節細胞損傷的保護作用[J].南京中醫藥大學學報.2014,30(3):283-286.

[5] 杜然然,畢宏生,郭俊國,等.枸杞多糖對體外培養視網膜神經節細胞的保護作用[J].眼科新進展,2014,34(2):119-122.

[6] 李諾,黃麗娜,曾平.白蒺藜皂苷對慢性高眼壓兔視網膜SOD活性和MDA含量的影響[J].國際眼科雜志,2013,13(5):854-856.

[7] 沈惠芳,謝欣,楊文忠,等.注射用鼠神經生長因子多藥聯合治療對缺血性視神經病變的作用[J].中國醫院藥學雜志,2015,35(15):1412-1414.

[8] 余勇軍,曾志成.益氣養陰活血化瘀中藥對青光眼術后視神經保護作用的研究[J].國際眼科雜志,2011,11(12):2106-2109.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.069

贛州市指導性科技計劃（GZ2015ZSF094)