雷公藤多甙片對狼瘡性腎炎外周血單個核細胞多藥耐藥蛋白表達的影響

張文娟+肖厚勤+蘇玉玲

[摘要] 目的 研究雷公藤多甙片（TG）對狼瘡性腎炎外周血單個核細胞（PBMCs）多藥耐藥蛋白表達的影響。方法 選擇2015年11月～2017年5月我院收治的58例LN患者為研究對象，分為接受TG治療的TG組（29例）和接受常規激素治療的對照組（29例），分別提取兩組治療前后PBMCs，采用反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測TG對PBMCs多藥耐藥相關蛋白蛋白（MRP）和多藥耐藥相關基因（MDR1）和P-糖蛋白170（P-gp 170）表達的影響。結果 治療3個月后，兩組PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達量均明顯提高（P<0.05），且TG組PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達量顯著高于對照組（P<0.05）；兩組PBMCs P-gp 170陽性表達率均明顯提高（P<0.05），且TG組PBMCs P-gp 170陽性表達率顯著高于對照組（P<0.05）。 結論 TG可有效提高LN患者PBMCs MRP、MDR1及P-gp 170表達，提高患者免疫力，改善預后，LN患者治療中應檢測多藥耐藥蛋白表達水平以確定其耐藥性。

[關鍵詞] 狼瘡性腎炎；雷公藤多甙片；單個核細胞；多藥耐藥蛋白

[中圖分類號] R593.342 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）20-45-03

The effect of tripterygium glycosides on the expression of multidrug resistance proteins in peripheral blood mononuclear cells in patients with lupus nephritis

ZHANG Wenjuan XIAO Houqin SU Yuling

Department of Nephrology，Rheumatology and Immunology， the Fifth People's Hospital of Dongguan，Dongguan 523000，China

[Abstract] Objective To study the effect of tripterygium glycosides （TG） on the expression of multidrug resistance proteins in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） of patients with lupus nephritis （LN）. Methods A total of 58 patients with LN treated in our hospital from November 2015 to May 2017 were selected as study subjects and divided into TG group （treated with TG，29 cases） and the control group （given routine hormonotherapy，29 cases）.PBMCs of the two groups were extracted before and after treatment， and reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） was used to detect the effects of TG on the expression of multidrug resistance associated protein （MRP），multidrug resistance associated genes （MDR1） and P-glycoprotein 170 （P-gp 170） in PBMCs. Results After 3 months of treatment，the relative expression levels of PBMCs，MRP and MDR1 mRNA in two groups were significantly increased （P<0.05），and TG group，MDR1 mRNA expression was significantly higher than the control group （P<0.05） the relative expression of PBMCs MRP and MDR1 mRNA in of TG group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）.The positive expression rates of PBMCs P-gp 170 in two groups were significantly increased （P<0.05），and the positive rate of PBMCs P-gp 170 expression in the TG group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）. Conclusion TG can effectively improve the expression of PBMCs，MRP，MDR1 and P-gp 170 in patients with LN，improve the immunity of patients and improve the prognosis.The expression level of multidrug resistance protein should be detected in patients with LN in order to determine their drug resistance.endprint

[Key words] Lupus nephritis；Tripterygium glycosides；Mononuclear cells；Multidrug resistance proteins

狼瘡性腎炎（lupus nephritis，LN）是繼發于系統性紅斑狼瘡（SLE）最常見的嚴重疾病，其發病率高達60%，且存在腎臟病變，嚴重影響患者的生存率[1]。為阻止LN的進展和復發，保護患者腎功能，臨床主要的治療方法為免疫抑制治療的糖皮質激素（GC）治療，但復發率高、費用高，且存在副作用[2]。雷公藤多甙片（tripterygium glycosides，TG）是具有較強抗炎和免疫抑制作用的雷公藤提取物制成的片劑，對LN的療效較好[3]。本研究選取2015年11月 ～ 2017年5月我院收治的58例LN患者為研究對象，探討TG對LN患者外周血單個核細胞多藥耐藥蛋白表達的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年11月～2017年5月期間我院收治的58例本地區LN患者為研究對象，患者均符合美國風濕協會提出的SLE診斷標準[4]，經B超引導下腎穿刺活檢術，常規病理和免疫病理均符合LN病變，均為第一次治療；經本院倫理委員會同意；患者均簽署自愿入組同意書；排除月經不正常的女性、其他腎臟疾病、類風濕性關節炎或嚴重精神異常者。將58例患者隨機分為TG組（29例）和對照組（29例），TG組男/女為1/28，平均年齡（37.59±4.20）歲，平均病程2.4年；對照組男/女為1/28，平均年齡（38.06±4.29）歲，平均病程2.2年，兩組LN患者一般資料無統計學意義（P>0.05）。

1.2 治療方法

所有患者均給予常規激素治療，TG組加用TG（廣東華南藥業集團有限公司，Z44023753，10mg），口服20mg/次，3次/d，兩組均持續治療1個月。

1.3 檢測方法

1.3.1 RT-PCR法檢測治療前后PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達水平 分別于治療前和治療后采集空腹10h外周靜脈血2ml，采用梯度離心法分離提取PBMCs，提取RNA后反轉錄合成cDNA直接進行RT-PCR擴增，擴增條件：94℃預變性5min；MRP：94℃變性50sec，退火54℃50sec，72℃延伸1min，共38個循環，72℃10min，42℃ 5min；MDR1：退火溫度為56℃，其他與MRP一樣；以β-actin為內參物，引物由上海生物工程技術有限公司合成，見表1。擴增產物均在1.5%瓊脂糖凝膠中電泳，使用凝膠成像分析儀進行光密度掃描，結果采用2-△△CT的方法計算MRP和MDR1的相對表達量。

1.3.2 流式細胞儀檢測P-gp 170水平 采集治療前和治療后空腹血樣標本50μL→加入6μL PE標記的P-gp 170→混勻后，室溫避光孵育15min→加入500μL溶血素，溶血10min→加入9g/L鹽水1mL混勻→離心5min，棄上清液→加入250μLPBS，混勻→使用Beckman CytoFLEX流式細胞儀測定淋巴細胞和P-gp 170陽性表達率。

1.4 統計學處理

應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達量等計量數據用（）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達水平比較

治療前，兩組PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達量比較，均無統計學意義（t=1.22，0.89，P>0.05）；治療3個月后，兩組PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達量均明顯提高（t=8.39，8.77，3.27，4.09，P<0.05），且TG組PBMCs MRP、MDR1 mRNA相對表達量顯著高于對照組（t=5.49，3.72，P<0.05）。見表2。

2.2 兩組治療前后PBMCs P-gp 170水平比較

治療前，兩組PBMCs P-gp 170陽性表達率比較，無統計學意義（t=0.22，P>0.05）；治療3個月后，兩組PBMCs P-gp 170陽性表達率均明顯提高（t=12.28，3.76，P<0.05），且TG組PBMCs P-gp 170陽性表達率顯著高于對照組（t=7.96，P<0.05）。見表3。

3 討論

大多中醫學者認為LN的病機為素體氣陰虧虛，肝腎不足，熱毒或濕毒乘虛而入，其治療應以中藥為佳，不僅療效優于單純西藥治療，還能減輕西藥的不良反應和減少病情反復[5]。雷公藤多甙片是近年來被臨床證實是治療LN的佳藥，其藥物成分為雷公藤根部提取物，而雷公藤是由二萜、生物堿、三萜、甙、糖、醇等多種成份共同發揮抗炎、免疫調節、抗菌等藥理作用[6-7]。LN患者治療失敗或病情反復的主要原因為其治療中的獲得性多藥耐藥，發生的機制較復雜，按照細胞內藥物作用靶點的不同，可分為MDR1的過度表達和MRP介導的耐藥性等[8]。MDR1基因可編碼膜糖蛋白P-gp，P-gp170是其產物之一，它可識別多種化學結構或性質不同的藥物，可通過消耗能量將進入細胞內的藥物跨膜泵出細胞外，降低細胞內藥物濃度，通過降低細胞毒作用而存活，從而產生多藥耐藥作用[9]。MRP基因是一種人體非P-gp的多藥耐藥基因[10]。近年研究表明，MDR1、P-gp170及MRP在正常人體中表達具有廣泛性、低水平、不均勻等特性，遍布人體各大器官組織，且各器官的表達水平差異較大[11]。

筆者研究發現，LN患者PCMCs均有MDR1、P-gp170及MRP的表達，且治療后表達量明顯高于治療前，提示MDR1、P-gp170及MRP的表達與激素耐藥具有相關性，機體在激素刺激下，MDR1和MRP基因活化，導致PCMCs多藥耐藥蛋白表達也升高，降低機體對激素的敏感性，繼而產生激素耐藥[12]。而TG組治療后MDR1、P-gp170及MRP的表達水平明顯高于于治療前和對照組，因為TG與激素聯用具有協同作用，TG能通過cAMP穩定激素受體mRNA，上調其數量，從而增強激素作用[13]。同時TG具有抑制和雙向調節LN患者免疫功能的作用，它能通過抑制淋巴細胞活化、T淋巴細胞的表達和誘導活化的T淋巴細胞凋亡，發揮其免疫抑制作用，減輕LN患者腎臟病理改變，還可通過其雙向免疫調節作用降低機體對藥物刺激的非特異性免疫抵抗[14]。過往研究表明，抗腫瘤藥物的MDR1、P-gp170及MRP的表達率明顯高于正常人，因為抗腫瘤藥物能誘導PCMCs 凋亡，隨著藥物使用時間的延長，PCMCs MDR1、P-gp170及MRP的表達逐漸上升，P-gp170可與TG結合，將TG從胞內轉運至胞外，從而發揮緩解細胞毒作用，同時也降低胞內藥物濃度，進一步產生耐藥現象[15]。endprint

[參考文獻]

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