乳腺癌組織中熱休克蛋白70和p53表達及相關性

藍永洪 解 娜 饒朗毓 牛海艷 齊亞靈

(海南醫學院形態學實驗室，海南 海口 571199)

乳腺癌組織中熱休克蛋白70和p53表達及相關性

藍永洪 解 娜1饒朗毓2牛海艷1齊亞靈3

(海南醫學院形態學實驗室，海南 海口 571199)

目的探討熱休克蛋白(HSP)70和p53在乳腺癌組織中的表達及其相關關系。方法采用免疫組化技術檢測24例乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中HSP70與p53的表達情況。結果與癌旁正常乳腺組織相比，乳腺癌組織HSP70與p53的陽性率顯著升高(Plt;0.05)，與TNM分期和淋巴結轉移密切相關(Plt;0.05)，而與年齡和腫瘤的大小無關(Pgt;0.05)；同時HSP70與p53的表達呈正相關(r=0.516，P=0.013)。結論HSP70與p53在乳腺癌組織呈高表達且關系密切，在乳腺癌的發生發展中起到一定作用。

乳腺癌；熱休克蛋白70；p53

中國癌癥統計報告中指出預計2016年中國乳腺癌發病人數達268 600人，在女性惡性腫瘤中發病率為第一位，病死率為第二位〔1，2〕。熱休克蛋白(HSP)70廣泛存在于生物體內，是HSPs家族中最保守、應激過程中表達最高的一種蛋白質，在細胞凋亡、DNA損傷、免疫反應等方面起著重要的作用，具有分子伴侶、細胞保護、結合功能等功能，在缺血、損傷、感染、腫瘤等情況下可誘發 HSP70過量表達〔3〕。p53分為野生型和突變型，野生型p53在維持細胞正常生長，抑制細胞惡性增殖過程中起主要作用，而突變型p53失去抑癌作用，同時還因突變而具有癌基因的作用〔4，5〕。研究表明HSP70可與p53結合，介導其蛋白產物的構象成熟，進而影響細胞的周期，調控細胞的增殖能力〔6〕。本研究采用免疫組化檢測乳腺癌組織中HSP70與p53的表達情況，探討二者的表達關系及其在乳腺癌發生發展中的作用。

1資料及方法

1.1一般資料 2015年1月至2016年12月海南醫學院第一附屬醫院乳腺癌外科切除的病理標本24例，年齡35～72歲，平均(51.2±10.4)歲，術前均未行放、化療，術后經病理學證實。所取組織標本為乳腺癌組織及其癌旁正常乳腺組織，經10%中性甲醛溶液固定后，常規脫水和石蠟包埋，連續切片厚度5 μm，撈片后放入干燥箱中烤片。

1.2主要試劑 兔單克隆抗體HSP70為英國Abcam公司產品、鼠單克隆抗體p53為福建邁新的產品； PV-6001〔山羊抗兔IgG/辣根過氧化物(HRP)聚合物〕、PV-6002(山羊抗小鼠IgG/HRP聚合物)、DAB顯色試劑盒均為北京中杉金橋的產品。

1.3免疫組化方法 石蠟切片常規脫蠟和水化，置于枸櫞酸緩沖液中微波修復，自然冷卻后用3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶的活性，山羊血清封閉，加HSP70或p53抗體置于4℃冰箱中過夜，滴加PV-6001或PV-6002室溫下孵育，DAB顯色，觀察染色結果，適時終止反應，蘇木素復染，酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4結果判斷 HSP70、p53分別以胞質、胞核呈現棕黃色顆粒為陽性。高倍鏡下選擇10個視野，陽性細胞比例lt;20%為陰性(-)，≥20%為陽性(+)。

1.5統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行χ2檢驗和Spearman相關分析。

2 結 果

2.1HSP70和p53的表達情況 與癌旁正常乳腺組織(29.2%、20.8%)相比，乳腺癌組織中HSP70(83.3%)和p53的陽性率(75.0%)顯著升高(Plt;0.05)。HSP70和p53的表達見圖1。

2.2HSP70和p53陽性表達與乳腺癌臨床病理特征的關系 HSP70與p53陽性表達均與TNM分期和淋巴結轉移密切相關(Plt;0.05)，而與年齡和腫瘤的大小無關(Pgt;0.05)，見表1。

2.3HSP70和p53表達的相關性 20例HSP70陽性組織中有17例(85.0%)p53陽性，4例HSP70陰性組織中有1例(25.0%)

圖1 乳腺癌組織HSP70和p53的表達情況(×400)

臨床病理特征nHSP70P值p53P值年齡(歲) ≤4097(77.8)0.5726(66.7)0.465 gt;401513(86.7)12(80.0)腫瘤直徑(cm) ≤264(66.7)0.2063(50.0)0.102 gt;21816(88.9)15(83.3)TNM分期 Ⅰ63(50.0)0.0382(33.3)0.020 Ⅱ1312(92.3)11(84.6) Ⅲ55(100.0)5(100.0)淋巴結轉移 有1111(100.0)0.04410(90.9)0.040 無139(69.2)8(53.3)

p53陽性，乳腺癌組織中HSP70和p53的表達呈正相關(r=0.516，P=0.013)。

3 討 論

HSP70高表達通常與腫瘤細胞的低分化、淋巴結轉移、腫瘤耐藥等緊密相關，可能參與腫瘤細胞的生物學行為〔7〕。細胞中野生型p53蛋白分布少，且溶于水，免疫組化難以檢測，而突變型p53蛋白因為空間構象發生改變，穩定性增強，容易檢測出，因此免疫組化檢測到的p53基本為突變型p53蛋白〔8〕。近一半的腫瘤組織存在 p53蛋白的高表達，而p53蛋白的高表達與腫瘤的臨床病理特征密切相關〔9〕。本研究結果提示HSP70和p53參與了乳腺癌的發生發展；乳腺癌組織中的HSP70與p53兩者可能在乳腺癌的發生發展過程中相互影響，其原因可能為〔10～12〕：①HSP70的分子伴侶作用可以調節p53蛋白的構象平衡，避免p53蛋白被降解；②HSP70與p53蛋白結合形成復合物，導致p53蛋白在胞質積聚，共同參與腫瘤細胞的生物學行為。 綜上，HSP70與p53蛋白在乳腺癌組織中呈高表達且關系密切，在乳腺癌發生發展中起一定作用，可能成為判斷患者病情的指標；同時HSP70與 p53蛋白聯合檢測結果可以初步判斷乳腺癌所處的階段，也為其靶向治療研究提供了一個方向。

1Chen W，Zheng R，Baade PD，etal.Cancer statistics in China， 2015〔J〕.CA Cancer J Clin， 2016；66(2)：115-32.

2Siegel RL，Miller KD，Jemal A.Cancer statistics，2016〔J〕.CA Cancer J Clin，2016；66(1)：7-30.

3Silver JT， Noble EG.Regulation of survival gene HSP70 〔J〕.Cell Stress Chaperones， 2012； 17(1)：1-9.

4Li Y， Bhuiyan M， Vaitkevicius VK，etal.Structural alteration of p53 protein correlated to survival in patients with pancreatic adenocarcinoma 〔J〕.Pancreas， 1999； 18(1)：104-10.

5詹 媛，江錦良，鄔黎青.p53在乳腺癌基因治療中的研究進展〔J〕.中國老年學雜志， 2016；36(17)：4391-3.

6Tollv C，Morimoto RI.Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death〔J〕.J Natl Cancer Inst，2000；92(19)：1564-72.

7王曉東，陳善成，楊俊葆，等.星形膠質細胞瘤中HSP70的表達及生物學活性〔J〕.中國老年學雜志，2015；35(6)：1477-9.

8蒙健軍，藍 東，韋敏怡.P73、P5蛋白在胃癌中的表達及意義〔J〕.廣西醫學，2010；32(5)：510-2.

9張媛媛，付 麗.p53基因治療研究的新進展〔J〕.中華病理學雜志，2006；35(1)：49-50.

10范云霞.熱休克蛋白70與腫瘤〔J〕.國際腫瘤學雜志，2000；27(4)：196-9.

11李三峰，丁 偉.HSP70與p53蛋白在肝細胞癌組織中的表達及相關性研究〔J〕.腫瘤基礎與臨床，2009；22(6)：468-71.

12李延輝，夏明汗，康舉齡，等.HSP70和P53蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其與臨床病理特征的關系〔J〕.現代生物醫學進展，2011；11(13)：2504-7.

〔2017-02-19修回〕

(編輯 苑云杰)

R737.9

A

1005-9202(2017)21-5245-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.21.012

海南省自然科學基金(No.814301)；海南醫學院科研培育基金(No.HY2013-12)

1 病理學教研室 2 病原生物學教研室

3 組織學與胚胎學教研室

齊亞靈(1967-)，女，教授，醫學博士，博士生導師，主要從事腫瘤基因診斷及生物治療研究。

藍永洪(1978-)，男，碩士，高級實驗師，主要從事分子病理學研究。