西吡氯銨含漱液對兩種口腔感染真菌抗菌活性研究

王新紅，唐櫻花，晏麗婷

(廣州醫科大學附屬口腔醫院，廣州口腔疾病研究所，口腔醫學重點實驗室，廣東 廣州 510140)

西吡氯銨含漱液對兩種口腔感染真菌抗菌活性研究

王新紅*，唐櫻花，晏麗婷

(廣州醫科大學附屬口腔醫院，廣州口腔疾病研究所，口腔醫學重點實驗室，廣東 廣州 510140)

目的：檢測0.1%西吡氯銨含漱液對白色念珠菌、熱帶念珠菌及其部分臨床株的抗菌活性。方法：以CLSI推薦的微量肉湯稀釋法進行檢測。結果：西吡氯銨對白色念珠菌、熱帶念珠菌均有較好的抑制效果，標準菌株的MIC均為156.25μg/mL；臨床菌株的MIC在78.13μg/mL～312.5μg/mL之間。結論：0.1%西吡氯銨含漱液對白色念珠菌和熱帶念珠菌具有較好的抗菌效果。

西吡氯銨； 白色念珠菌； 熱帶念珠菌； 微量肉湯稀釋法

西吡氯銨(Cetylpyridinium chloride,CPC)化學成分為陽離子季銨化合物，具有表面活性劑的功能。因其有較好的抗菌效果，對黏膜無明顯刺激作用，且無著色效應[1]，故該制劑在國內外得到了廣泛應用，在臨床上多用于口腔衛生保健[2-3]。

真菌感染是臨床常見的口腔疾病之一，傳染性較強，流行廣泛。近年來，隨著口腔治療的廣泛開展，加之激素和免疫抑制劑的大量應用，口腔真菌感染越來越常見，尤其是對免疫低下的患者而言，更易引發嚴重后果甚至導致死亡。念珠菌屬所致感染在口腔真菌感染中最為常見，該屬真菌中致病性最強的是白色念珠菌(CanidiaAlbicans)和熱帶念珠菌(Candidatropicalis)[4]，其中白色念珠菌為常見的機會致病菌，可感染皮膚、黏膜和臟器，引起淺部或深部感染[5]。在口腔中，該菌可感染黏膜，引起口腔齲齒病變；熱帶念珠菌是最流行的非白色念珠菌[6]，近年來，由侵襲性熱帶念珠菌所致的口腔感染發生比例顯著升高[7]。故此，本研究以這兩種真菌的標準株及多株臨床分離株為實驗材料，對0.1%西吡氯銨含漱液的抗真菌活性進行了測定。結果顯示該含漱液對上述兩種真菌及其臨床分離株均有一定抑制效果。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥品

待檢制劑：0.1%CPC漱口液，由杭州民生藥業有限公司提供，批號170306，規格0.1%/200 mL(瓶)；3%過氧化氫消毒液，批號K1704302，規格3%/100 mL(瓶)。

1.1.2 培養基

實驗所用沙保弱瓊脂由北京奧博星生物公司生產，批號：20150707，YPD肉湯為北京奧博星生物公司生產，批號20160712；上述培養基均按說明書配制，并按說明書規定條件高壓蒸汽滅菌備用。

1.1.3 實驗菌株

實驗所用菌株由山東中醫藥大學微生物教研室惠贈。白色念珠菌(CanidiaAlbicans)標準菌株2株，為ATCC9028，CMCC(F)98001，臨床分離株共計7株。熱帶念珠菌(Candidatropicalis)標準株ATCC1369，臨床分離株共計5株。以上各菌株以沙保弱瓊脂進行接種，35℃48h培養后挑取生長良好的菌苔，以YPD肉湯配成1×105cfu/mL的對應菌液備用。

1.2 實驗方法

采用美國臨床和實驗室標準化委員會(CLSI)推薦的微量稀釋法[8]，參照文獻[9]稍作修改，以96孔板測定MIC(最小抑菌濃度)。在96孔板中每孔加入YPD肉湯100μL，然后在第1行中加入100μL西吡氯銨原液，隨后從第1行中吸取100μL混合液加入第2行，依次類推至第8行，西吡氯銨原液等效濃度為1mg/mL，依次遞倍稀釋得到2～256倍稀釋梯度。另單獨設置陰性對照，只加入YPD肉湯和對應菌液，觀察生長現象。同時設立藥物稀釋梯度和YPD肉湯空白做為輔助對比。陽性對照孔每孔加入10μL 3%過氧化氫消毒液。以上藥液和對照加樣完畢后，每孔加入1×105cfu/mL的對應真菌菌液10μL，每個藥物重復3孔，37℃24h培養，以真菌生長情況判斷結果。樣品的MIC判定以樣品孔與對照孔比較得出：若該孔肉眼觀察培養液清晰，下一孔出現渾濁，則該孔稀釋度視為其MIC；與空白孔對照出現渾濁則說明無抑制效果[10]。

2 結果

37℃24h培養結束后觀察結果。陽性孔中培養液澄清透明，無肉眼可見渾濁；陰性孔中均有明顯渾濁。各樣品孔結果如下。

2.1 白色念珠菌菌抑菌實驗結果(含標準株，見表1)

表1 白色念珠菌MIC結果

表1顯示，西吡氯銨含漱液對白色念珠菌ATCC9028和CMCC(F)98001標準菌株的MIC均為156.25μg/mL，對白色念珠菌各臨床菌株的MIC介于78.13μg/mL-312.5μg/mL之間。

2.2 熱帶念珠菌菌抑菌實驗結果(含標準株，見表2)

表2 熱帶念珠菌MIC結果

表2顯示，西吡氯銨含漱液對熱帶念珠菌標準株ATCC1369的MIC為156.25μg/mL，對熱帶念珠菌各臨床菌株的MIC介于156.25μg/mL～312.5μg/mL之間。

3 討論

國內外文獻報道顯示，西吡氯銨是一種表面活性劑，可通過降低表面張力，進而增加細胞壁和細胞膜的通透性而起到抑菌和殺菌作用。其抗菌譜較廣，對多種細菌如葡萄球菌、鏈球菌、幽門螺桿菌、大腸埃希菌、傷寒沙門菌等均有一定抑制效果[11-13]]，對口腔白色念珠菌感染也有較好療效[14]。因其對口腔正常菌群無顯著作用[15]，故而已有多家口腔醫院將其用作口腔消毒劑。

念珠菌屬是酵母菌中最大的一屬[16]，其中部分念珠菌寄生于人體，在正常菌群中分布廣泛，也屬于機會致病菌，臨床中該菌常引起的感染是口腔念珠菌病及念珠菌性陰道炎。其中口腔念珠菌感染是念珠菌屬感染所引起的急性、亞急性或慢性口腔黏膜疾病, 長期不愈還有惡變。應引起足夠的重視[17]。該病的主要病原菌為白色念珠菌，但熱帶念珠菌等其他念珠菌屬真菌也可引起類似感染[18]。白色念珠菌是臨床常見的口腔感染真菌之一，但亦可引起免疫低下者出現黏膜及全身感染。熱帶念珠菌是最流行的非白色念珠菌[19]，由于近年來對白色念珠菌患者過度使用抗真菌藥物，導致非白念珠菌定植率升高。如印度流行病學監測數據顯示，院內真菌感染主要由非白念珠菌引起，其中熱帶念珠菌占到絕大多數[20]。該菌易感染免疫低下患者，病死率高于其他念珠菌感染，易形成生物膜，可能導致院內播散，更需要予以重視[7]。有鑒于此，本研究選擇上述兩種具有代表性的真菌及其臨床菌株進行研究，能充分反映西吡氯銨含漱液對常見口腔真菌的抑菌活性。

實驗結果顯示，西吡氯銨含漱液對白色念珠菌ATCC9028和CMCC(F)98001標準株的MIC均為156.25μg/mL，對白色念珠菌各臨床菌株的MIC介于78.13μg/mL～312.5μg/mL之間；對熱帶念珠菌ATCC1369標準株的MIC為156.25μg/mL，對熱帶念珠菌各臨床菌株的MIC介于156.25μg/mL～312.5μg/mL之間。該結果顯示西吡氯銨含漱液對這兩種真菌均有較好的抑制效果，與臨床研究的結果基本一致。

近年來，由于廣譜抗生素、激素和免疫抑制劑的大量使用，加之艾滋病患者的不斷增加，口腔念珠菌感染的發病率不斷上升。研究顯示，白色念珠菌感染在真菌感染中最為常見，占53%～68%[21]；臨床中，熱帶念珠菌等非白色念珠菌日益增多，周小武[18]等的研究顯示，在口腔念珠菌病患者中，白念珠菌感染占61.43%，熱帶念珠菌占14.29%。目前臨床中，對口腔念珠菌感染常建議早期局部藥物治療。西吡氯銨可通過其表面活性劑作用，阻止菌體粘附于口腔黏膜上皮細胞表面，影響真菌的細胞壁和細胞膜，增強其通透性導致菌體內蛋白變性，進而殺滅真菌。此外，該藥物對口腔黏膜刺激性小，無明顯染色效應，故此，西吡氯銨是一種適用于防治口腔真菌感染的有效藥物，有進一步深入開發的價值。

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(本文文獻格式：王新紅，唐櫻花，晏麗婷.西吡氯銨含漱液對兩種口腔感染真菌抗菌活性研究[J].山東化工，2017，46(20)：19-20,25.)

AntibacterialactivityofCetylpyridniumChlorideGargleAgainstontwoOralInfectionFungi

WangXinhong1，TangYinghua1，YanLiting1

(Department of periodontics and oral medicine, Stomatology Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510140,China)

Objective:The in vitro antimicrobial activity of 0.1% cetylpyridinium chloride was determined against standard strains and clinical isolates ofCanidiaAlbicansandCandidatropicalis. Methods: Micro both dilution method. Results:The inhibition of cetylpridinium chloride onCanidiaAlbicansandCandidatropicalisare obvious, the MIC of standard strains is 156.25μg/mL; While the MICs of clinical isolates range from 78.13μg/mL～312.5μg/mL. Conclusion: 0.1% of cetylpyridinium chloride has significant antibacterial effect on Canidia Albicans and Candida tropicalis. and clinically isolated strains.

cetylpyridinium chloride;CanidiaAlbicans;Candidatropicalis;micro both dilution method

2017-08-17

廣東省醫學科學技術研究基金A2016223

王新紅(1976—)，女，山東威海人，博士研究生，副教授，主要從事牙周病及黏膜病學的醫教研工作。

R781.54

A

1008-021X(2017)20-0019-02