三種不同干燥方式對金銀花活性成分與抗氧化性的影響

宋夢璐,藍孝浩,陳瀟瀟

(山東中醫藥大學,山東 濟南 250355)

三種不同干燥方式對金銀花活性成分與抗氧化性的影響

宋夢璐,藍孝浩,陳瀟瀟

(山東中醫藥大學,山東 濟南 250355)

目的:探究不同干燥方法對金銀花中活性成分的含量與抗氧化性的影響。方法:采用陰干、烘干、曬干三種方法對金銀花進行干燥,用紫外分光光度法測定總酚酸、總黃酮的含量,以總還原力、DPPH清除率、·OH清除率為指標比較不同干燥方法對金銀花抗氧化性的影響。結果:烘干金銀花中總酚酸及黃酮含量最高,分別為6.23±0.28mg/g、6.90±0.28mg/g,曬干藥材中總黃酮、總酚酸含量最低。所測定的三種抗氧化性指標中,總還原力以烘干藥材最強;陰干藥材DPPH自由基清除率最強,烘干與陰干藥材間的清除率無顯著性差異;·OH清除率同樣以陰干藥材最高,烘干次之;總還原力與總酚酸、黃酮含量呈顯著正相關。結論：綜合考慮干燥效率及活性成分含量、抗氧化性三個方面,烘干干燥應在金銀花產區進行大力推廣。

金銀花;干燥方式;總酚酸;總黃酮;抗氧化性

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thumb.的干燥花蕾或帶初開的花,為我國常用大宗商品藥材,具有清熱解毒、疏散風熱的功效,主要用于癰腫疔瘡,喉痹,丹毒,熱毒血痢,風熱感冒等疾病的治療。現代研究表明,金銀花富含黃酮類、酚酸類、環烯醚萜類、皂苷類等多種成分,具有抗菌、抗病毒、抗氧化、保肝等多種藥理活性。

金銀花需求量大,為滿足需求,在山東、河南、河北、陜西等地廣泛種植,產地不同,其產地加工方法存在一定差異,山東多采用曬干,河南、河北多采用烘干,烘干又分為爐火烘干、殺青烘干等,而傳統上金銀花多采用陰干,如李時珍在《本草綱目》中記載"四月采花,陰干"。對于這三種產地加工方法對藥材質量的影響,我國學者從加工后藥材性狀、活性成分含量等方面進行了比較研究,而查閱目前文獻,針對這三種干燥方式下金銀花藥材的抗氧化性差異比較未見相關報道。本文擬采摘同一農家品種金銀花大白期花蕾,分別采用陰干、曬干、烘干的加工方法進行干燥,比較三種不同干燥方式下金銀花藥材總酚酸、總黃酮含量及其抗氧化性的差異,旨在揭示不同產地加工方法對金銀花藥材質量的影響,并試圖從干燥方式差異上揭示三個不同產地間藥材質量差異的原因。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料

于2016年5月金銀花一茬花期間采摘山東中醫藥大學藥用植物園忍冬種質資源圃中同一忍冬農家品種“大毛花”大白期花蕾,分別采用陰干(陰涼通風處干燥)、曬干(陽光下曝曬)和烘干(自制烘干機)的干燥方式進行干燥加工,干燥后的藥材性狀均符合《中國藥典》(2015版一部)之規定。干燥后的藥材經鑒定為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thumb.的干燥花蕾或帶初開的花。

1.2 儀器

UV 5100B型紫外可見分光光度計(上海元析儀器有限公司),KQ-500DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),德國Eppendorf 5810R冷凍型臺式大容量高速離心機(德國Eppendorf公司),HH-1數顯恒溫水浴鍋(常州博遠實驗分析儀器廠),LE204E/02電子天平(梅特勒-多利多儀器(上海)有限公司)。

1.3 試劑

綠原酸標準品(批號:15112301,購自上海源葉生物科技有限責任公司),蘆丁標準品(批號:100080-200707,購自中國食品藥品檢驗研究院),其他試劑均用分析純。

2 實驗方法

2.1 不同干燥方法金銀花總酚酸的含量測定

2.1.1 供試品溶液的制備

取藥材粉末約0.25g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇25mL,稱重,超聲提取30min,放冷,稱定重量,用70%乙醇補足減失的重量,濾過,將濾液定容到25mL容量瓶中,即得供試品溶液,低溫保存備用。

2.1.2 對照品溶液的制備

取綠原酸對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每mL含0.1982mg的溶液,即得。

2.1.3 總酚酸的含量測定

參照文獻[2],精密量取綠原酸對照品溶液0.25,0.5,0.75,1.0,1.25,1.5mL,加無水乙醇至5mL,加0.3%十二烷基硫酸鈉溶液2mL及0.6%三氯化鐵-0.9%鐵氰化鉀(1∶0.9)混合溶液1mL,混勻,在暗處放置5min,用0.1mol·L-1鹽酸溶液定容至25mL,以顯色劑0.6%三氯化鐵-0.9%鐵氰化鉀為空白,在740nm處測定吸光度A。以綠原酸的質量濃度為x,吸光度值為y,繪制標準曲線,得線性回歸方程y=0.2013x-0.2575(R2=0.9976)。結果表明,綠原酸在1.982～11.892μg·mL-1與吸光度A呈良好的線性關系。精密量取2.1.1項下供試品溶液1.5mL按上述步驟進行測定,重復測定3次,根據線性回歸方程得出樣品中總酚酸的含量(mg·g-1)。

2.2 不同干燥方法金銀花總黃酮含量測定

2.2.1 供試品溶液的制備

制備方法同2.1.1。

2.2.2 對照品溶液的制備

取蘆丁對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每mL含0.3012mg的溶液,即得。

2.2.3 總黃酮的含量測定

參照文獻[3],采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色體系法,以蘆丁為對照品測定總黃酮含量。精密量取蘆丁對照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1mL,依次加入蒸餾水2mL,5%亞硝酸鈉0.5mL,振蕩后靜置6min,加入10%硝酸鋁0.5mL,振蕩后靜置6min,然后加入5%氫氧化鈉2.5mL,振蕩后靜置15min,最后用蒸餾水定容至10mL,在510nm處測定吸光度A。以蘆丁濃度為x,吸光度值為y繪制標準曲線,得回歸方程y=0.0087x+0.01(R2=0.9912)。結果表明蘆丁在3.012～30.12μg·mL-1與吸光度呈良好的線性關系。精密量取2.2.1項下供試品溶液0.5mL,以蒸餾水為參比,按上述步驟進行測定,重復測定3次,根據線性回歸方程計算總黃酮含量。

2.3 不同干燥方法對抗氧化性的影響

2.3.1 總還原力的測定

參照文獻[4],采用鐵氰化鉀還原法。取2.1.1項下供試品溶液1mL,用70%乙醇補足至5mL,分別加入0.2mol·L-1磷酸緩沖液(pH值6.6)0.75mL及質量分數1%的鐵氰化鉀溶液0.75mL,于50℃保溫10min,快速冷卻,再加入10%三氯乙酸溶液0.75mL,以4000r·min-1離心10min,取上清液1mL,依次加入蒸餾水4mL、0.1%三氯化鐵溶液0.5mL,搖勻,靜置10min后在700nm下測其吸光度值。

2.3.2 DPPH清除率的測定

參照文獻[4],在試管中加入DPPH·溶液(0.04mg·mL-1)2mL,供試品溶液0.5mL,搖勻,避光靜置30min,以70%乙醇為參比在517nm處測量吸光度A樣品。用70%乙醇代替供試品溶液,測定對照吸光度A對照。樣品對DPPH的清除率E(%)=(1-A樣品/ A對照)×100。

2.3.3 ·OH自由基清除率的測定

參照文獻[4],采用鄰二氮菲-Fe2+法測定。精密移取0.2mol·mL-1磷酸緩沖溶液(pH值7.4)2mL, 5mmol·L-1鄰二氮菲溶液0.75mL,7.5mmol·L-1FeSO4溶液和0.5mL蒸餾水1mL于試管中,混勻作未損傷管,置于37℃水浴反應60min,在536nm處測其吸光度值A未損;損傷管用1% H2O20.5mL代替0.5mL蒸餾水,其余同未損傷管,測定吸光度值A損;樣品管用0.5mL供試品溶液和1% H2O20.5mL代替1mL蒸餾水,其余同未損傷管測定吸光度值A供。·OH清除率(%)=(A供-A損)/(A未損-A損)×100。

2.4 數據處理與分析

數據統計分析采用SPSS 17.0進行處理,采用方差分析進行Duncan's多重比較分析,顯著水平為Plt;0.05;相關性分析采用Pearson's法。

3 結果與分析

3.1 不同干燥方法對總酚酸與總黃酮含量的影響 結果見圖1。

圖1 不同干燥方式金銀花總酚酸與總黃酮的含量

由圖1可見,三種不同干燥方式金銀花藥材中總酚酸與總黃酮含量均以烘干方式為最高,曬干方式為最低。烘干方式中總酚酸含量為6.23mg·g-1,烘干與陰干間無顯著性差異,曬干方式總酚酸含量僅為5.69mg·g-1;烘干方式中總黃酮含量為6.90mg·g-1,曬干方式總黃酮含量為5.70 mg·g-1。

3.2 不同干燥方法對抗氧化性的影響

圖2 不同干燥方法金銀花總還原力比較

抗氧化劑是通過自身的還原作用給出電子而清除自由基[4],還原力越強,抗氧化性越強。如圖2所示,不同干燥方法金銀花藥材總還原力存在顯著性差異,其大小順序為：烘干gt;陰干gt;曬干,即烘干的抗氧化性最強,曬干的抗氧化性最弱。

圖3 不同干燥方法金銀花DPPH清除率(A)與OH清除率(B)的比較

DPPH自由基在有機溶劑中是一種穩定的自由基,在517nm附近有強吸收峰,當DPPH自由基清除劑與DPPH自由基的孤對電子結合時,吸收會減弱,以此可以判斷清除劑的清除活性[4]。如圖3A所示,不同干燥方法金銀花藥材間DPPH清除率的大小順序為:陰干gt;烘干gt;曬干,陰干處理DPPH清除率最高為87.52%,陰干與烘干干間無顯著性差異。如圖3B所示,不同干燥方法金銀花藥材間·OH自由基清除率存在顯著性差異,其大小順序為:陰干gt;烘干gt;曬干,陰干清除率最高為25.10%,曬干清除率僅為13.57%。

3.3 抗氧化性與總酚酸、總黃酮含量的相關性

表1 不同干燥方法金銀花總酚酸、總黃酮含量與抗氧化性活性的相關性分析

注:*Plt;0.05顯著相關,**Plt;0.01顯著相關。

不同干燥方法金銀花的三種抗氧化性指標與總黃酮、總酚酸含量之間的相關性見表1。由表1可見,總還原力與總酚酸、總黃酮含量之間呈極顯著正相關(Plt;0.01),DPPH清除率與總酚酸及總黃酮含量之間相關性不顯著,·OH清除率與總酚酸含量呈顯著相關,與總黃酮含量之間相關性不顯著。

4 討論與結論

《千金翼方》曾述:"夫藥采取,不以陰曝干,雖有藥名,終無藥實",這里的"終無藥實"即是指由于缺少干燥過程,或不依藥材性質選擇適當干燥方法而導致藥材品質欠佳,表明了干燥方式對藥材品質形成的重要性。本文研究結果表明,陰干、曬干、烘干三種干燥方式相比,就總黃酮和總酚酸來說,以烘干的藥材含量最高,陰干次之,曬干藥材含量最低。所測定的三種抗氧化性指標中,總還原力也以烘干藥材最強;DPPH自由基清除試驗結果表明,陰干藥材清除率最強,而烘干與陰干藥材間的清除率無顯著性差異;·OH清除率同樣以陰干藥材最高,烘干次之。就干燥所用時間來講,陰干所需時間相對較長,即便是天氣比較晴朗的情況下,將新采摘的金銀花置于陰涼、通風干燥處仍需要5～7天時間,若遇上陰雨天氣,由于空氣濕度較大,藥材陰干所需時間會更長;曬干亦受天氣情況影響,若遇上陰雨天干燥不及時,藥材會霉爛、變質,降低商品等級,甚至導致失去藥效;而烘干,是目前金銀花河南、河北產區應用最多的一種干燥方式,干燥效率較高,如本次實驗過程中采用自制干燥機械,整個的干燥程序僅為24小時。綜上所述,綜合考慮藥材質量、抗氧化性指標的測定結果及干燥效率來講,我們認為烘干干燥應在金銀花產區進行大力推廣。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:中國醫藥科技出版社,2015: 221．

[2] 張百霞,郭慶梅,王真真,等.響應曲面法優化金銀花總酚酸提取工藝[J].中成藥,2013,35(10):2144-2148.

[3] 李 光,于 霜,鄧 銀,等.甘薯葉總黃酮含量的測定[J].食品與發酵工業,2011,37(12):152-154.

[4] 李鳳英,劉素穩,郭朔.紫玉蘭花干燥方法對其活性成分和抗氧化性的影響[J].園藝學報,2015,42(6):1150-1156.

[5] 羅序燕,方浩斌,黃瑞宇,等.分光光度法測定甜葉菊廢渣中總黃酮的含量[J].光譜學與光譜分析,2015,35(10):2820-2824.

[6] 孫 潔,王 曉,周 潔,等.變溫干燥對良種金銀花活性成分含量的影響[J].中華中醫藥雜志,2014,29(10):3302-3305.

[7] 王 梅,劉 峰,林昌虎,等.化學發光法檢測不同干燥方法對金銀花抗氧化性和化學成分的影響[J].山東科學,2013,26(2):56-61.

[8] 鄒 容,游玉明,陳澤雄,等.干燥方式對金銀花多酚組分及其抗氧化活性的影響[J].食品科學,2016,37(5):78-83.

[9] Liang C H,Syu J L,Mau J L. Antioxidant properties of solid state fermented ad lay and rice by Phellinus linteus. Food Chemistry,2009,116 (4)：841-845.

(本文文獻格式：宋夢璐,藍孝浩,陳瀟瀟.三種不同干燥方式對金銀花活性成分與抗氧化性的影響[J].山東化工，2017，46(20)：89-91.)

EffectsofThreeDifferentDryingMethodsonActiveConstituentsandAntioxidantActivityofLonicerajaponica

SongMenglu,LanXiaohao,ChenXiaoxiao

(ShandongUniversity of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China)

Objective:To study different drying methods on the content of active consituent and antioxidant activity of the Lonicerae japonicaFlos.Methods: The Lonicerae japonicaFlos was dried by three method including shading drying,sun drying and baking drying; the total phenolic acid and total flavonoid was determined by the method of UV spectrophotometry; the antioxidant activity was measured by the index including total reduction,DPPH scavening rate and·OH scavening rate.Results: The results showed that the total phenolic acid and total flavonoids of the samples dried by baking drying are highest up to 6.23±0.28mg/gand 6.90±0.28mg/g respectively;However,treatments of sundryingexhibited the lowest.Determination of three kinds of antioxidation indexes ,the reducing power is the strongest by baking drying,the DPPH scavening rate is the highest by shading drying and there was no significant difference in clearance between baking drying and shading drying.Similarly,the·OH scavening rate is the highest by shading drying followed by baking drying.The total reduction was positively correlated with the content of the total phenolic acid and flavonoids.Conclusions:The baking drying should be popularized in Lonicerae japonicaFlos region considering the drying efficiency , the content of active component and the antioxidant properties.

Lonicerae japonica Flos; drying methods; total phenolic acid; total flavonoids; antioxidant activity

2017-08-17

宋夢璐(1996—)，女，中藥學專業，大學本科在讀。

R284;TQ461

A

1008-021X(2017)20-0089-03