P504s在前列腺癌中的表達研究

李龍　朱文堯　陶澤宇　楊小淮

[摘要] 目的 探討P504s和前列腺特異性抗原（PSA）在不同前列腺組織中的表達及其在前列腺癌（PCa）診斷中的價值。 方法 回顧性分析107例前列腺手術或穿刺活檢患者的臨床資料，其中前列腺癌（PCa）患者40例，前列腺上皮內瘤（PIN）患者13例，前列腺增生（BPH）患者54例，對存檔病理蠟塊進行免疫組化染色。 結果 PCa、PIN中P504s的表達的陽性率與BPH中P504s的表達的陽性率比較，差異有統計學意義（P<0.05），而PCa與PIN中P504s的表達陽性率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。P504s、PSA與PCa的Gleason分級無明顯相關性（P>0.05）。 結論 P504s具有良好的前列腺組織特異性和腫瘤特異性，在PCa早期診斷及鑒別診斷方面具有重要價值。

[關鍵詞] P504s；前列腺特異性抗原；前列腺癌；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.25 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）29-0006-03

Study on the expression of P504s in prostate cancer

LI Long1 ZHU Wenyao1 TAO Zeyu1 YANG Xiaohuai2

1.Bengbu Medical College， Bengbu 233030， China； 2.Department of Urinary Surgery， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Bengbu 233004， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of P504s and prostate specific antigen（PSA） in different prostate tissues， and its value in the diagnosis of prostate cancer（PCa）. Methods Clinical data of 107 cases receiving prostate surgery or biopsy were retrospectively analyzed， including 40 patients with prostate cancer（PCa）， 13 patients with prostate intraepithelial neoplasia （PIN） and 54 patients with prostate hyperplasia （BPH）. Immunohistochemical staining was performed on the archived pathology wax. Results The positive rate of P504s expression in PCa and PIN was significantly different from the positive rate of P504s expression in BPH （P<0.05）， and there was no significant difference in the positive rate of P504s expression in PCa and PIN（P>0.05）. There was no significant correlation between P504s， PSA and Gleason grade of PCa（P>0.05）. Conclusion P504s has favorable prostate tissue specificity and tumor specificity. It has an important value in the early diagnosis and differential diagnosis of PCa.

[Key words] P504s； Prostate specific antigen （PSA）； Prostate cancer； Immunohistochemistry

前列腺癌（prostate cancer，PCa）是歐美國家男性常見的惡性腫瘤[1，2]。近年來，在我國PCa發病率呈逐漸上升趨勢。PCa早期診斷具有臨床癥狀不典型、隱匿性的特點[3]。目前，多采用血清PSA的測定方法進行早期篩查，但PSA腫瘤特異性低，且存在灰色區域，在PCa的早期發現中存在一定的缺陷。P504s（α-甲?；o酶A消旋酶）在PCa的診斷中具有高度敏感性和特異性[4]，在病理診斷PCa中具有重要意義。本文通過對不同前列腺組織標本進行免疫組化實驗，探討P504s在PCa中的表達及其在PCa診斷中的價值，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 組織標本

選取蚌埠醫學院第一附屬醫院病理科2013年1月～2017年7月的前列腺手術或穿刺標本。所有患者臨床資料完整，均無合并其他腫瘤疾病，術前未進行放療、全身化療，術前或穿刺前均檢測了PSA值。篩選出符合條件的患者共107例，年齡53～88歲，平均（68.4±6.9）歲。其中前列腺癌（PCa）患者40例，前列腺上皮內瘤（PIN）患者13例，前列腺增生（BPH）患者54例。

1.2 試劑來源

兔抗人多克隆抗體P504s抗體，兔抗人多克隆抗體PSA抗體，均購自proteintech公司。即用型S-P超敏免疫組化試劑盒和DAB酶底物染色試劑盒、檸檬酸組織抗原修復液均購于福州邁新公司。

1.3 實驗方法endprint

采用S-P免疫組化方法，檢測107例前列腺組織存檔蠟塊標本中P504s及PSA的染色結果。操作步驟和方法完全按照試劑盒說明書嚴格實施。實驗陽性對照使用已知病理結果證實的PCa患者的標本切片，陰性對照用PBS代替一抗。

1.4 結果判定

根據染色強度積分：10×20倍顯微鏡下隨機觀察切片5個不同視野無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；染色密度積分：10×4低倍顯微鏡下觀察切片，計算陽性細胞的百分比。以前列腺細胞胞膜及胞漿出現淺黃色、棕黃色、棕褐色顆粒為陽性表達。按照著色細胞百分比積分（切片陽性表達率）計算公式：陽性表達率（%）=陽性（弱陽性+陽性+強陽性）表達例數/總例數×100%；<5%計0分；5%～25%計1分；>25%～50%計2分；>50%計3分；并將染色強度積分和染色密度積分的乘積計為免疫反應積分，且0分為表達（-），1、2分為（+），3、4分為（++），6、9分為（+++）。

1.5 PCa的Gleason評分

根據2010版Gleason評分[5]標準，將PCa的病例資料分為三組，其中Gleason評分≤4分為分化良好組，5～7分為中等分化組，8～10分為差分化組。

1.6 統計學方法

使用SPSS 22.0進行數據分析處理，不同組間率的比較采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多個不同組間數據比較采用秩和檢驗，P504s、PSA的表達與PCa臨床分期及Gleason評分相關性分析之間采用Spearman等級相關檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病理學形態特征

P504s主要表達于細胞的胞質中，陽性表達呈黃色至黃棕色（或棕褐色），在周圍的前列腺腺體上皮細胞及基地細胞中表達為陰性。在PCa和PIN中呈彌漫性表達，而在PIN、BPH組織細胞中呈局灶弱性表達。PSA在PCa、PIN、BPH中均有表達，陽性多位于細胞胞漿，部分在胞膜，且在胞漿靠近腔緣位置染色較深。見封三圖1～6。

2.2 P504s、PSA的免疫組化染色結果

P504s在PCa、PIN及BPH組織中均有不同程度的表達，表達陽性率分別為92.5%（37/40）、84.6%（11/13）、5.9%（3/51）。PSA的表達率分別為80.0%（32/40）、69.2%（9/13）、75.9%（41/54）。P504s在BPH與PCa、PIN中表達比較，差異有統計學意義（P<0.05），且在PCa中較高。在PCa與PIN中比較，無顯著性差異（P=0.398）；PSA在PCa、PIN及BPH中的表達比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1、2。

2.3 P504s、PSA在PCa組織中的表達差異

在PCa組織中P504s、PSA表達“+、++、++”為癌檢出陽性，在40例PCa組織中P504s的陽性檢出率為92.5%，PSA的陽性檢出率為80.0%。運用配對四格表的χ2檢驗處理分析，顯示P504s和PSA在PCa的檢出率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.4 P504s與血清總PSA的關系

107例患者根據術前PSA檢測結果按0～4 ng/mL、>4～10 ng/mL、>10～20 ng/mL、>20 ng/mL分為四組，P504s在四組中的PCa檢出率分別為100.0%、75.0%、 88.9%、96.2%。見表3。

2.5 P504s與PCa組織Gleason分級的關系

根據Gleason分級標準將PCa組織標本分為三組，其中Gleason評分≤4分9例，5～7分19例，8～10分12例，使用Spearman等級相關檢驗分析所示，P504s在PCa組織中的表達與Gleason分級未見顯著相關性（rs=-0.133，P=0.415>0.05）。見表4。

3 討論

PCa的臨床診斷大多依靠腫瘤細胞的特異性、組織特異性，而PCa單依靠光鏡下診斷常缺乏足夠依據，特別是對于穿刺活檢患者病理標本的明確診斷，更增加了難度。P504s（α-甲?；o酶A消旋酶）是一種胞質蛋白，主要存在于過氧化物酶和線粒體上，其基因定位于染色體5p13，參與脂肪酸衍生物和脂肪酸的β氧化過程[6，7]，是一種具有高度敏感性和特異性PCa標記物[8]，在PCa的診斷和鑒別診斷中愈加重要。

通過引入免疫組化染色技術，發現P504s在PCa中的陽性表達率雖有所不同，但普遍均較高[9]，本實驗結果中P504s在PCa中的陽性表達率為92.5%，比較符合前人的研究。在病理學診斷方面，聯合應用多種標記蛋白CK5/6、p63、34βE12標記前列腺組織的基底細胞[10]，可以顯著提高PCa的診斷水平。通過相互對比印證可以進一步提高PCa的診斷率，達到理想的診斷目標。

P504s主要表達于細胞質，在PCa和PIN組織細胞中呈彌漫性表達，表達強度較高[11]。本實驗的結果與之相符，且多呈黃色或棕黃色，部分呈細顆粒狀，在BPH組織細胞中不表達或呈局灶性弱表達。P504s在BPH與PCa、PIN中表達比較，差異有統計學意義（P<0.05），且在BPH組織中僅3例弱表達，在PCa中表達陽性率較高。表明P504s可以作為PCa和PIN高度敏感和特異的標記物，為PCa及PIN與良性增生的鑒別診斷提供參考。

PCa的Gleason評分作為重要的PCa評估指標[12]，可以幫助預測評估PCa患者術后的預后情況。通過我們收集的病例發現Gleason評分在6、7分的患者最多見，與國內外的研究相符[13，14]。在Gleason評分≤4分、5～7分、8～10分三組中，P504s的陽性檢出率分別為88.9%、78.9%、75.0%，檢出率均較高。林毅鋒等[15]通過免疫組化實驗發現不同Gleason評分患者之間的P504s的表達比較，差異有統計學意義（P<0.05），有助于PCa的診斷。本實驗通過Spearman等級相關檢驗方法分析顯示Gleason評分與P504s表達強度未見明顯等級相關，說明P504s對于PCa的預后方面作用不大。endprint

目前，在PCa的早期診斷以及普查中主要依靠血清PSA的檢測[16]，PSA具有良好的組織特異性，但是腫瘤特異性不高，特別是在前列腺炎患者、近期尿潴留患者、導尿等操作術均可以使血清PSA不同程度的上升，并且血清PSA還存在灰色區域。本實驗本中的四組（0～4 ng/mL、>4～10 ng/mL、>10～20 ng/mL、>20 ng/mL）血清學標本中，P504s在四組中的PCa檢出率分別為100.0%、75.0%、88.9%、96.2%。說明P504s在不同血清PSA水平中均具有良好的檢出率，特別是在對于血清PSA>4 ng/mL臨床可疑的PCa患者，P504s表達陽性可以進一步明確診斷，彌補單純血清PSA檢測的不足，增加低血清PSA患者中PCa的診斷水平，降低漏診率，盡早發現早期PCa患者。

綜上所述，P504s可以作為新型的PCa標記物，且對于處于PSA灰色區域的PCa患者依然具有良好的檢出率，合理應用前列腺基底細胞標記物，可以明顯增加PCa的檢出率，在PCa的早期診斷方面具有重要的臨床價值。

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（收稿日期：2017-08-01）endprint