HPLC法測定糞箕篤中肉桂酸的含量

廣西中醫藥大學藥學院，廣西 南寧 530200

藥物研究

HPLC法測定糞箕篤中肉桂酸的含量

龐丹清魏中璇陳勇*闕祖亮魏江存張昕

廣西中醫藥大學藥學院，廣西 南寧 530200

目的建立高效液相色譜法定量測定糞箕篤中肉桂酸的含量。方法采用色譜柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)，流動相：乙腈-0.1%磷酸(24∶76)；流速：1mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：285nm。結果肉桂酸在0.0217～0.0760μg范圍內呈良好線性關系，加樣回收率為100.46%，RSD為2.20%，含量在0.004%～0.022%之間。結論該方法簡便準確，重復性好，可用于糞箕篤的質量控制。

糞箕篤；肉桂酸；HPLC

糞萁篤(StephanialongaLour.)為防己科千金藤屬植物，味苦，性寒，中醫認為其具有清熱解毒、利濕消腫、祛風活絡等功效，壯醫認為該藥材具有清熱毒，祛風毒，調龍路、火路，通谷道等功效，主要用于痢疾、水腫、黃疸等[1]。研究表明，糞箕篤藥材具有利尿、鎮痛、治療前列腺增生等作用[2-3]。糞箕篤的化學成分主要含有蓮花烷類生物堿成分和肉桂酸等非堿性物質[4-6]。肉桂酸具有抗炎、抗真菌作用，作為植物生長促進劑、長效殺菌劑、果品蔬菜的防腐劑和作為測定鈾、釩及分離釷的試劑，是合成藥品治療冠心冠“可心安”的重要中間體[7-8]；肉桂酸將是一種有前途的防治心肌缺血再灌注損傷的藥物[9]。綜合各因素考慮，實驗選擇肉桂酸成分為糞箕篤藥材中的指標物質進行含量測定，為糞箕篤的質量控制提供實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀(G1311B四元梯度泵，G1314F紫外檢測器，美國Agilent公司)；SQP電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；TGL-16G離心機(上海安亭科學儀器廠)；KQ5200B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 乙腈、甲醇(色譜純，賽默飛世爾科技有限公司)；甲醇、乙醇(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；超純水(法國默克密里博純水儀)；磷酸(天津市科密歐化學試劑有限公司)；肉桂酸對照品(批號：20160610，寶雞市辰光生物科技有限公司)。

糞箕篤藥材來源于廣西壯族自治區，經廣西中醫藥大學藥學院郭敏副教授和梁子寧副教授鑒定為防己科千金藤屬植物糞箕篤(StephanialongaLour.)的地上部分。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸(24∶76)；檢測波長：285nm；流速：1mL/min；柱溫30℃；進樣量：10μL。色譜圖如圖1、2所示。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取肉桂酸對照品適量，加甲醇溶液制成濃度為0.53mg/mL的肉桂酸對照品儲備液，取上述溶液800μL，置于5mL的容量瓶中，加甲醇定容，配置成每1mL含有8.48μg 的肉桂酸對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 稱取糞箕篤藥材粉末1g，精密稱定，置50mL錐形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10mL，搖勻，超聲提取60min，放置室溫后，補足減失的重量，濾過，取續濾液，13000r離心10min，即得供試品溶液[10-11]。

2.4 線性關系的考察 取肉桂酸對照品溶液適量，置于2mL容量瓶，用甲醇定容，置成每1mL含有5.43μg的肉桂酸對照品溶液，分別進樣4、6、8、10、12、14μL。用肉桂酸含量為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，進行線性回歸：Y=8200.1429X-0.3582，相關系數r2=0.9995，結果(如圖2所示)表明肉桂酸在0.0217～0.0760μg范圍內具有良好的線性關系。

2.5 精密度實驗 取上述對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，測定肉桂酸的峰面積。結果肉桂酸峰面積RSD為0.63%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性實驗 取6份同一批次糞箕篤藥材粉末1g，精密稱定，按照“2.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣，記錄色譜峰面積，計算肉桂酸的含量及RSD，平均含量為0.0556mg/g，RSD=0.60%，表明此方法具有良好的重復性。

2.7 穩定性實驗 取1份糞箕篤藥材粉末1g，精密稱定，按照“2.3”項方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h按“2.1”項色譜條件進樣記錄色譜峰面積，計算RSD為0.50%， 表明供試品溶液在24h內具有良好的穩定性。

2.8 加樣回收實驗 取6份已知含量的糞箕篤藥材粉末，置于錐形瓶，每份約0.5g，精密稱定。各加入0.0265mg肉桂酸對照品，按照“2.3”項制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣，記錄色譜峰面積，計算肉桂酸含量及RSD，計算加樣回收率，平均回收率為100.46%，RSD為2.20%，結果見表1。由以上結果表明，該方法準確性良好。

表1 肉桂酸加樣回收結果 (n=6)

2.9 樣品含量測定 11批糞箕篤藥材均來源于廣西壯族自治區,取不同產地和采集時間的糞箕篤藥材粉末各1g，精密稱定，按照“2.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣，記錄色譜峰面積，計算含量。結果見表2。

表2 糞箕篤藥材中肉桂酸含量

由上表實驗結果可知，在11批糞箕篤藥材中，2014年7月在廣西橫縣采集的藥材中肉桂酸的含量最高，為0.2225mg/g；而在對廣西欽州與上林兩地的藥材進行肉桂酸的含量測定時，由于峰面積太小無法積分難以計算出肉桂酸的含量。

3 討論

通過測定11批不同批次的糞箕篤藥材中的肉桂酸成分發現，各產地藥材中肉桂酸的含量差異較大，實驗研究初步判斷肉桂酸在藥材中含量的差異是由于各地區土壤的差異及不同采集時間對植物的影響造成的，仍待進一步研究觀察。但本實驗建立的實驗方法簡便、易操作、穩定性好，且重現性強，可為糞箕篤的質量標準提供參考。

[1]熊文超,張宏偉,馬驥. 嶺南草藥糞箕篤的性狀和顯微鑒定[J]. 中國實驗方劑學雜志,2011,17(22):102-104.

[2]林啟云,謝金鮮. 糞箕篤利尿、鎮靜及鎮痛作用研究[J]. 廣西中醫藥,2001(03):43-45.

[3]岳赟,莊錫偉,曾旺煥,等. 糞箕篤治療前列腺增生有效部位的篩選[J]. 江西醫藥,2016(7):633-634.

[4]勞愛娜,高耀良,唐宗儉,等. 防己科植物糞箕篤化學成分研究[J]. 藥學學報,1980(11):696-698.

[5]勞愛娜,唐宗儉,徐任生. 防己科植物糞箕篤化學成分研究(Ⅱ)[J]. 藥學學報,1981(12):940-942.

[6]鄧京振,趙守訓. 糞箕篤地上部分非堿性成分的分離和鑒定[J]. 中國藥科大學學報,1993(02):73-75.

[7]朱衛豐, 張亞紅, 劉紅寧,等. 肉桂酸透皮吸收的實驗研究[J]. 中成藥, 2003, 25(6):443-445.

[8]徐兆瑜. 肉桂酸的合成方法和應用[J]. 精細化工原料及中間體,2005(12):28-30.

[9] 郝霽萍,高宇勤,賀少輝,等. 肉桂酸預處理通過激活Akt信號通路對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 中國循證心血管醫學雜志,2016(8):932-934.

[10]曹莉,黃多臨. HPLC法測定不同產地辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的含量[J]. 中國民族民間醫藥,2016(12):8-10.

[11]馮華,石尚友,羅秀瓊,等. 黔產大菟絲子中綠原酸的定性與定量分析[J]. 中國民族民間醫藥,2017(5):14-16.

DeterminationofCinnamicAcidinPlantsofStephanialongaLour.byHPLC

PANG Danqing WEI Zhongxuan CHEN Yong*QUE Zuliang WEI Jiangcun ZHANG Xin

Guangxi University of Chinese Traditional Medicine, Nanning 530200, China

ObjectiveTo establish a method for determining catechin ofStephanialongaLour. by HPLC.MethodsStephanialongaLour. was determined by HPLC on a Inertsil Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm) column，acetonitrile -0.1% phosphoricacid solution(24∶76)as mobile phase，flow rate wsa 1mL/min，column temperature was main-tained at 30℃,and detection wavelength was set at 285nm.ResultsCinnamic acid showed good linear relationship within 0.0217～0.0760μg, the recovery was 100.46%,RSDwas 2.20%, The content was within the 0.004%～0.022%.ConclusionThe method is simple and accurate, It can be used for the quality control ofStephanialongaLour.

StephanialongaLour.;Cinnamic acid;HPLC

國家自然科學基金(NO:81260673，81660701)；廣西中醫藥大學科。研創新項目(NO:JS201625)；廣西高校中藥提取純化與質量分析重點實驗室(桂教科研〔2014〕6號)。

龐丹清(1993-)，女，漢族，碩士研究生，研究方向為藥物質量控制。E-mail: 1450358251@qq.com

陳勇(1961-)，男，漢族，本科，教授，碩士研究生導師，研究方向為中藥及其制劑質量分析。E-mail: cy6381@163.com

R284.1

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1007-8517(2017)21-0010-03

2017-09-15 編輯：鄧佳麗)