四數九里香不同提取液的急性毒性試驗研究

1.廣西南寧市第八人民醫院，廣西 南寧 530001；2.廣西民族醫藥研究院，廣西 南寧 530001

四數九里香不同提取液的急性毒性試驗研究

黃小秋1楊其波1黃小玉1楊增艷2

1.廣西南寧市第八人民醫院，廣西 南寧 530001；2.廣西民族醫藥研究院，廣西 南寧 530001

目的研究四數九里香不同提取液的急性毒性。方法采用改良寇氏法對四數九里香水和75%乙醇提取液的急性毒性進行研究，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥后，觀察小鼠的活動、飲食、二便、存亡等情況。結果四數九里香水提取液的LD50值為69.18 g/kg，95%的可信限為63.10～75.86 g/kg；75%乙醇提取液LD50值為183.44 g/kg，95%的可信限為169.82～199.53 g/kg。結論四數九里香水提取液和75%乙醇提取液均具有一定的藥理毒性。

四數九里香；不同提取液；急性毒性

四數九里香MurrayatetrameraHuang又稱千里香、滿山香、過山香、千只眼等，為蕓香科九里香屬植物，民間常用于感冒發熱、支氣管炎、哮喘、風濕麻木、筋骨疼痛、 跌打瘀血腫痛、皮膚瘙癢、濕疹、毒蛇咬傷、瘧疾、胃痛、水腫等[1]。龔志強等[2]分別采用水蒸氣蒸餾、超臨界CO2流體萃取及超聲波溶劑萃取3種方法對四數九里香揮發油進行成分鑒定及對比研究，牙啟康等[3]通過硅膠柱層析和重結晶方法對四數九里香非揮發性成分進行研究，從四數九里香乙醇提取物中首次分離得到5個單體化合物，黃蓓等[4]的現代藥理研究表明四數九里香水提取物具有良好的抗炎和鎮痛作用，但有關四數九里香的毒性試驗研究未見有報道。研究采用改良寇氏法[5]對四數九里香水提取液和75%乙醇提取液進行急性毒性試驗研究，為進一步研究開發該藥提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 藥品與試劑 藥材四數九里香采于2015年12月百色市靖西縣，經廣西民族醫藥研究院藍日春副主任中藥師鑒定為蕓香科九里香屬植物四數九里香的莖葉，藥材陰干后備用。

1.2 儀器 CF-1000H系列高精度電子教學計重秤(上海華德衡器有限公司)。

1.3 動物 SPF級昆明種小鼠200只，雌雄各半，體重(20±2) g，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，許可證號為SCXK桂2014-0002。

2 方法

2.1 四數九里香水提取液的制備 稱取四數九里香粗粉800g，加入8倍量的水，浸泡40min后大火煮沸，保持微沸1h，用紗布過濾；剩下藥渣繼續加入8倍量的水，同法第2次煎煮，過濾，將兩次濾液合并后濃縮成335mL濃浸膏，相當于2.38g原藥材/mL。

2.2 四數九里香乙醇提取液的制備 稱取四數九里香粗粉800g，加入8倍量的75%乙醇溶液，浸泡30min后水浴加熱回流提取1h，過濾；剩余藥渣加入8倍量的75%乙醇溶液，按上法回流提取，過濾，將2次濾液合并后濃縮，得到流浸膏175mL，相當于4.57g原藥材/mL。

2.3 急性毒性實驗 參照經典的小鼠急性毒性實驗方法進行測定預試，求最大耐受量 MTD、最大給藥量[5]MLD 和半數致死量LD50。通過對小鼠灌胃給藥，進行急性毒性正式研究，連續觀察14d，記錄小鼠的中毒反應及死亡率。

2.3.1 四數九里香水提取液、醇提取液急性毒性預試驗 取10只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，實驗前禁食12h，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥，給藥后觀察小鼠的中毒情況，給藥24h后10只小鼠全部死亡。根據小鼠死亡的情況適當的調整給藥劑量，分別找出引起小鼠0 %(Dn)死亡和 100%(Dm)死亡的劑量，并找出相應的劑量組間距 r值，然后測定LD50值，并根據預試驗結果進行正式試驗。

2.3.2 四數九里香水提取液急性毒性實驗 取50只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，根據改良寇氏法，將小鼠隨機分為5個劑量組，每組雌雄各5只，根據預實驗結果確定組間劑量比為1∶0.85，各組劑量含生藥材分別為95.20、80.92、68.78 、58.46、49.70 g/kg。實驗前禁食12h，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥，藥后給予自由飲水攝食，觀察小鼠的活動、飲食、二便、存亡等情況。

2.3.3 四數九里香醇提取液急性毒性實驗 取40只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，根據改良寇氏法，將小鼠隨機分為4個劑量組，每組雌雄各5只，根據預實驗結果確定組間劑量比為1∶0.85，各組劑量含生藥材分別為215.06、182.8、155.38、132.07 g/kg。實驗前禁食12h，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥，藥后給予自由飲水攝食，觀察小鼠的活動、飲食、二便、存亡等情況。

2.4 LD50值的計算 根據公式計算得。

四數九里香水提取液半數致死量為：

95%的可信限為log-1=[lg(69.18±1.96)×0.02156]=log-1(1.84±0.0422)

上限為75.86 g/kg，下限為63.10 g/kg

四數九里香醇提取液半數致死量為：

標準誤

上限為199.53 g/kg，下限為169.82 g/kg

3 結果

3.1 一般情況 對小鼠經口攻毒灌胃給藥后24h內密切觀察小鼠的異常反應。給藥后30min內，一些動物出現活動減少、豎毛、目光呆滯、步履蹣跚、呼吸急促、食欲減退等初始中毒現象，最終呼吸麻痹而死亡。給藥48h內部分小鼠相繼出現中毒死亡，剩余小鼠活動量趨于正常，飲水攝食一般，大小便顏色正常。連續觀察14d，其余小鼠再無死亡現象。

3.2 LD50值 四數九里香水提取液急性毒性試驗中，1組動物(給藥劑量95.20g/kg)的死亡率為90%，5組動物(給藥劑量49.70g/kg)死亡率為20%，動物死亡率隨著給藥劑量的減少而降低。四數九里香水提取液LD50值為69.18 g/kg，95%的可信限為63.10～75.86 g/kg。當給予75%乙醇提取液215.06g/kg時，小鼠的死亡率為80%，而給藥劑量降至132.07g/kg時，小鼠100%存活下來，無中毒跡象。四數九里香乙醇提取液LD50值為183.44 g/kg，95%的可信限為169.82～199.53g/kg。見表1、2。

表1 四數九里香水提取液對小鼠的經口攻毒急性毒性試驗結果

表2 四數九里香75%乙醇提取液對小鼠的經口攻毒急性毒性試驗結果

4 討論

4.1 四數九里香水提取液的急性毒性與藥物濃度的量效關系分析 從表1可知，本實驗對四數九里香水提取液進行了5個劑量組(組間劑量比為1∶0.85)的小鼠經口灌胃給藥，當給藥劑量從95.20g/kg下降至49.70g/kg時，動物存活率從10%上升至 80%，由此可推測四數九里香水提取液的急性毒性與藥物濃度之間存在一定的正比關系。

4.2 四數九里香醇提取液的急性毒性與藥物濃度的量效關系分析 根據急性毒性預試驗結果進行分析后，對四數九里香醇提取液進行了4個劑量組(組間劑量比為1∶0.85)的小鼠經口灌胃給藥，當給藥劑量組分別為215.06、182.8、155.38 、132.07 g/kg時，動物死亡率由80%依次下降為50%、20%、0%，藥物毒性大大降低，如表2所示。

4.3 四數九里香兩種不同提取液均具有一定的藥理毒性 通過對四數九里香兩種不同提取液的急性毒性試驗進行比較，結果顯示無論是水提取液還是醇提取液，均具有一定的藥理毒性，且兩者的動物死亡率隨著給藥劑量的增加而升高。

四數九里香水提取液和醇提取液的LD50值分別為69.18、183.44 g/kg，可見其水提取液的動物半數致死量明顯小于醇提取液，即前者急性毒性大于后者。而水提取液多為非揮發性成分，75%乙醇提取液含有較多的揮發性成分，由實驗結果可推理，四數九里香的藥理毒性與其揮發性成分存在一定的量效關系。

本實驗對四數九里香兩種不同提取液的急性毒性進行了的初步探討，實驗結果表明其存在一定程度的藥理毒性。四數九里香雖為民間常用藥，但應避免大劑量使用，以免發生中毒反應。至于四數九里香不同提取液的毒性作用部位和作用機制，有待于進一步深入研究。

[1]全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(上冊)[M].北京:人民衛生出版社,1996:10.

[2]龔志強，談遠鋒，黃敏，等. 不同方法提取四數九里香揮發油氣質聯用分析[J]. 湖南師范大學自然科學學報，2014，37(2)：48-50.

[3]牙啟康，盧文杰，陳家源，等．四數九里香的化學成分研究[J].廣西科學，2010，17(4) : 347-348.

[4]黃蓓，毛長智，庾志斌．四數九里香水提物抗炎及鎮痛作用研究[J].中國民族民間醫藥，2011，20(14)：32-33.

[5]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,2006:819．

2017-09-13 編輯：梁志慶)

對來稿內容的要求

1.政治上必須符合黨和政府的各項方針政策；

2.應具有科學性、實用性，論點明確，資料可靠，文字精煉，層次清楚，數據準確，必要時應作統計學處理；

3.本刊誠征民族醫藥、中醫藥、中西醫結合相關研究文章。

廣西壯族自治區衛生和計劃生育委員會自籌經費科研課題(Z2015646)。

黃小秋(1983-),女，碩士研究生，主管藥師，研究方向為藥物分析。E-mail:mailhxq@163.com

R285.5

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1007-8517(2017)21-0033-03