推拿手法聯合跑臺訓練對坐骨神經延期縫合大鼠神經再生的效果

陸永嘉，嚴雋陶，馬書杰，陶然，馬穎，史智君，孔亞敏，王春紅

推拿手法聯合跑臺訓練對坐骨神經延期縫合大鼠神經再生的效果

陸永嘉1，嚴雋陶1，馬書杰2，陶然2，馬穎1，史智君1，孔亞敏1，王春紅1

目的 探討推拿手法聯合跑臺訓練對坐骨神經橫斷傷延期外膜修復后促進神經再生的效果。方法 60只Sprague-Dawley大鼠隨機等分為對照組、模型組和治療組。后兩組建立坐骨神經橫斷傷延期外膜縫合模型，治療組給予捏法推拿及跑臺訓練，每天1次。分別于干預后1個月、2個月各取10只大鼠檢測坐骨神經運動神經傳導速度(MCV)、再生神經軸突數及施萬細胞數，電鏡觀察超微結構。結果 與模型組比較，治療組MCV在干預后2個月加快(p＜0.05)，軸突數無顯著性差異(P＞0.05)，施萬細胞數增加(p＜0.05)，電鏡下損傷較輕。結論 推拿手法聯合跑臺訓練可促進損傷的周圍神經再生。

坐骨神經；神經再生；推拿；跑臺訓練；大鼠

周圍神經損傷是臨床常見病，臨床表現為運動障礙和不同程度感覺障礙。周圍神經損傷的治療主要是促進神經再生，延緩骨骼肌萎縮。臨床由于受諸多因素影響，部分周圍神經損傷患者很難得到Ⅰ期神經修復，常需等到條件允許或神經損傷程度及范圍確定后，才能進行Ⅱ期神經修復[1]。傳統中醫推拿手法及主動運動都是重要的神經康復方法，廣泛應用于臨床。推拿手法對神經損傷后恢復早期有一定療效，有助于延緩骨骼肌萎縮，促進神經功能恢復；通過刺激神經，可以提高受損神經興奮性，延緩退變速度[2-5]；推拿手法具有疏通經絡、活血化瘀之效，能促進血液循環，提高新陳代謝，進而改善神經肌肉的營養供應[6-9]，促進骨骼肌與神經恢復。本研究探討推拿手法聯合跑臺訓練對失神經后延期縫合坐骨神經再生的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級雄性Sprague-Dawley大鼠60只，體質量180～220 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，合格證號11400700150167。飼養于上海中醫藥大學動物實驗中心，許可證號SYXK(滬)2014-0008，5只/籠，自由進食飲水，室溫18℃，濕度40%～50%。

采用SPSS 19.0統計軟件隨機分為對照組(n=20)、模型組(n=20)和治療組(n=20)，每組再分為造模后1個月、2個月2個亞組，每個亞組10只。

1.2 主要試劑及儀器

10%水合氯醛：上海西唐生物科技有限公司。石蠟、甲醛、戊二醛、鋨酸、氨水、二甲苯、無水乙醇、30%H2O2：上海國藥集團。光譜二抗、DBA濃縮試劑盒、中性樹脂、蘇木精：上海長島生物科技有限公司。CX41正置顯微鏡：OLYMPUS公司。透射電子顯微鏡及圖像分析系統：PHILIPS公司。SQ2125石蠟切片機：MEDITE公司。IMS圖像分析系統：基爾頓生物科技(上海)有限公司。D5100數碼相機：NIKON公司。自制手法模擬儀：本校與復旦大學共同研制。RM-6240BD多道生理信號處理系統、YLS-15A大鼠轉輪式跑步機：成都儀器廠。

1.3 造模方法

采用坐骨神經橫斷傷立即縫合模型。模型組和治療組采用10%水合氯醛3 ml/kg腹腔注射麻醉，大鼠俯臥位固定于手術臺。右下肢局部剃毛，常規消毒；無菌條件下距坐骨結節下方約0.5 cm處行臀部切口，從股二頭肌與半腱肌間顯露坐骨神經干，10倍顯微鏡下鈍性分離，于距梨狀肌下緣1 cm處切斷坐骨神經干，兩斷端返折180°，但不縫入附近肌組織；縫合肌間筋膜與皮膚。4 d后打開原切口，將斷端神經游離并修剪后，外科顯微鏡下11/0縫合線行外模縫合，對端縫合神經。縫合肌間筋膜與皮膚。術后碘伏消毒，青霉素鈉25萬U肌肉注射。每天1次，共3 d。

1.4 干預方法

術后3周，模型組和對照組不作任何干預，治療組進行以下干預。①手法模擬儀模擬捏法行推拿干預，壓強6 kPa，捏2 min，間隔1 min。②采用YLS-15A大鼠轉輪式跑步機進行訓練，5 r/min共5 min。

以上干預均每天1次，于上海中醫藥大學動物實驗中心完成。

1.5 檢測指標

各組于干預后1個月、2個月行以下指標檢測。

1.5.1 大體觀察

觀察術后切口情況、肌肉萎縮程度、右下肢活動能力、步態變化及足趾潰瘍等。

1.5.2 坐骨神經的運動傳導速度(motor conduction velocity,MCV)

采用RM-6240BD四通道生理記錄儀，采集頻率100 kHz，掃描速度0.8 ms/格，靈敏度4 mV，時間常數0.2 s；頻波頻率100 Hz，刺激電壓1 V，波寬0.1 ms。將刺激電極正負極平行插入坐骨結節下方坐骨神經走行兩側，相距約1 cm；記錄電極分別置于腘窩處和跟腱處神經走行兩側；地線位于刺激電極和腘窩處記錄電極之間。兩對記錄電極的距離/動作電位出現的時間差即為坐骨神經MCV。每只大鼠測3次，取平均值。

1.5.3 坐骨神經軸突計數

坐骨神經MCV測定結束后，斷頸處死各組大鼠，取出右側坐骨神經斷端下神經組織1 cm，石蠟包埋，切片，HE染色。高倍鏡下每標本取5個視野，HPIAS-1000病理圖像分析系統記錄視野內坐骨神經軸突數。

1.5.4 施萬細胞計數

石蠟切片用SP-9003試劑盒(美國ZYMED公司)行S-100免疫組織化學染色。用HPIAS-1000病理圖像分析系統400倍鏡下每標本取5個視野，計數視野內陽性細胞數。

1.5.5 電鏡觀察

坐骨神經組織經常規固定、脫水、滲透、包埋，超薄切片，染色，透射電鏡觀察。

1.6 統計學分析

采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析與處理。計量資料以(xˉ±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，組內比較采用配對t檢驗。顯著性水平α=0.05。

2 結果

2.1 大體觀察

手術過程中有2只大鼠因麻醉意外死亡，由備用大鼠補齊；神經修復術后全部動物存活。大鼠手術側早期出現失神經支配表現，部分足部皮膚發紅，少數足趾腫脹；1周左右傷口愈合，傷口無感染。術后1～3周，各組均有大鼠出現不同程度足底潰瘍、噬趾，踝關節不同程度僵硬、跖屈受限，坐骨神經支配區出現肌肉萎縮，右下肢跛行。足部潰瘍經百多邦外用后明顯好轉。近1個月時，各組大鼠潰瘍基本愈合，術側肌萎縮明顯減輕，跛行步態減輕，踝關節功能活動不同程度恢復。

2.2 坐骨神經MCV

模型組和治療組MCV均較對照組下降(p＜0.05)，治療組1個月時MCV與模型組無顯著性差異(P＞0.05)，2個月時MCV大于模型組(p＜0.05)。見表1。

表1 兩組各時間點坐骨神經MCV比較(m/s)

2.3 坐骨神經軸突計數

模型組和治療組坐骨神經軸突數均高于對照組(p＜0.05)。坐骨神經軸突數治療組呈上升趨勢，對照組呈下降趨勢，但兩組間無顯著性差異(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組各時間點坐骨神經軸突數比較(/視野)

2.4 施萬細胞計數

模型組和治療組坐骨神經施萬細胞數1個月時均高于對照組(p＜0.05)，2個月時模型組與對照組無顯著性差異(P＞0.05)。治療組1個月時坐骨神經施萬細胞數與模型組無顯著性差異(P＞0.05)，2個月時多于模型組(p＜0.05)。見表3。

表3 兩組各時間點坐骨神經施萬細胞數比較(/視野)

2.5 電鏡觀察

1個月時，對照組可見有髓神經纖維排列，髓鞘形狀正常，間隙適當；模型組見脫髓鞘現象發生，有髓神經纖髓鞘外觀不規整；治療組神經纖維松散，以小型神經纖維多見，髓鞘形態不佳。2個月時，對照組見有髓神經纖維正常排列；模型組有髓神經纖維髓鞘外形呈扁平狀，不規整，部分髓鞘出現空泡，有脫髓鞘趨勢；治療組有髓神經纖維總體結構明確，神經纖維結構仍略松散，可見施萬細胞。見圖1。

3 討論

本研究顯示，推拿手法聯合跑臺訓練能加快坐骨神經損傷失神經后延期縫合大鼠坐骨神經MCV。神經傳導速度可反映周圍神經功能狀態，臨床上常用于評價神經損傷程度及功能恢復情況[10-13]。神經損傷后神經傳導性受損，表現為神經傳導速度減慢或消失。本研究顯示，神經損傷修復后，坐骨神經MCV明顯減弱；手法及運動訓練后，坐骨神經MCV明顯恢復。

推拿和運動的作用機制可能通過促進施萬細胞增殖，幫助再生神經沿正確的方向生長延伸，進而調節坐骨神經軸突的再生。但手法聯合跑臺訓練促進延期縫合大鼠神經再生的效應需要時間，在1個月時，手法聯合跑臺訓練的優勢并不明顯，占主導地位的是神經縫合后的自我修復；2個月時，手法聯合跑臺訓練促進坐骨神經再生的優勢才得以體現。盡管坐骨神經軸突計數沒有顯著性差異，但通過電鏡觀察，可見有髓神經纖維改善情況；結合施萬細胞增殖，推測對于有軸突功能的改善仍需進一步時間積累。

本研究MCV恢復，提示神經修復后軸突再生，并有部分到達終末，對靶器官進行再支配。

圖1 各組坐骨神經各時間點超微結構(透射電鏡,bar=10 μm)

施萬細胞是周圍神經特有的膠質細胞，最初來源于胚胎時期的神經脊細胞[14]，廣泛存在于周圍神經系統中，與軸突關系密切，可以包繞軸突，形成髓鞘，進行所謂的有髓神經纖維；也可包繞軸突不形成髓鞘，即無髓神經纖維[15]。周圍神經損傷后，施萬細胞即刻發生形態行為學改變，最為明顯的是沃勒變性。在周圍神經損傷再生過程中，施萬細胞的功能尤為突出。首先，施萬細胞進行自身細胞增殖，為軸突的再生提供通過的管道；其次，施萬細胞表達、分泌多種神經再生所需的神經營養因子，促進軸突生長；其三，施萬細胞與新生軸突進行包繞，形成有髓、無髓神經纖維，促進軸突成熟；最后，施萬細胞能夠神經肌肉接頭處促進神經再支配。

本研究顯示，神經顯微修復后，施萬細胞數一直穩定保持在較高水平；在此期間，治療組施萬細胞數持續高于對照組，手法及運動訓練能促進施萬細胞增殖。施萬細胞增殖可為新生神經軸漿轉運提供良好環境，促進再生軸突沿著正確的方向生長，加速神經軸突直徑增大、髓鞘厚度增加，提高坐骨神經MCV。

本研究觀察時間最長3個月，而坐骨神經損傷后肢體功能恢復尚需較長時間，目前的結果尚不能全面顯示推拿聯合跑臺訓練促進周圍神經損傷再生中的作用。周圍神經損傷后再生機制復雜，尤其是延期進行神經修復，情況更加復雜。推拿及運動訓練促進神經損傷后神經再生及肢體功能恢復的機制仍需進一步研究。

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Effect of Tuina Combined with Treadmill Training on Nerve Regeneration after Sciatic Nerve Delayed Suture in Rats

LU Yong-jia1,YAN Jun-tao1,MA Shu-jie2,TAO Ran2,MA Ying1,SHI Zhi-jun1,KONG Ya-min1,WANG Chun-hong1
1.Department of Tuina,Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Shanghai Univesity of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200437,China;2.College of Rehabilitation,Shanghai Univesity of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China

YAN Jun-tao.E-mail:doctoryjt@sohu.com

Objective To explore the effect of the combination of Tuina and treadmill training on nerve regeneration after sciatic nerve transection.Methods A total of 60 Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group,model group and treatment group equally.The sciatic nerve was transected in the latter two groups and the epineurium suture was delayed four days.Then the treatment group accepted Tuina and treadmill training once a day.The motor conduction velocity(MCV)of sciatic nerve was measured one and two months after intervention in ten rats respectively,while the number of regenerated axons and Schwann cells was counted,and structures of sciatic never were observed under electron microscopy.Results Compared with the model group,the MCV accelerated in the treatment group(p＜0.05),the number of axons was not significantly different(P＞0.05),and the number of Schwann cells increased two months after modeling(p＜0.05),with less injury under electron microscopy.Conclusion Tuina combined with treadmill training can promote the regeneration of the injured peripheral nerve.

sciatic nerve;nerve regeneration;Tuina;treadmill training;rats

10.3969/j.issn.1006-9771.2017.11.007

R745

A

1006-9771(2017)11-1273-05

[本文著錄格式] 陸永嘉，嚴雋陶，馬書杰，等.推拿手法聯合跑臺訓練對坐骨神經延期縫合大鼠神經再生的效果[J].中國康復理論與實踐,2017,23(11):1273-1277.

CITED AS:Lu YJ,Yan JT,Ma SJ,et al.Effect of Tuina combined with treadmill training on nerve regeneration after sciatic nerve delayed suture in rats[J].Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian,2017,23(11):1273-1277.

1.國家自然科學基金面上項目(No.30973806;No.81373764)；2.國家自然科學基金青年基金項目(No.81603713)。

1.上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院推拿科，上海市200437；2.上海中醫藥大學康復醫學院，上海市201203。作者簡介：陸永嘉(1988-)，男，漢族，上海市人，博士研究生，主要研究方向：推拿防治骨骼肌萎縮。通訊作者：嚴雋陶。E-mail:doctoryjt@sohu.com。

2017-04-17

2017-06-22)