不同提取方法的兩色金雞菊提取液對訓練大鼠運動生化指標的影響

趙小平，張文英，張 穎

1.安徽商貿(mào)職業(yè)技術(shù)學院體育教學部，蕪湖，241000;2.安徽中醫(yī)藥高等專科學校藥學系，蕪湖，241000

不同提取方法的兩色金雞菊提取液對訓練大鼠運動生化指標的影響

趙小平1，張文英1，張 穎2

1.安徽商貿(mào)職業(yè)技術(shù)學院體育教學部，蕪湖，241000;2.安徽中醫(yī)藥高等專科學校藥學系，蕪湖，241000

研究了兩色金雞菊不同提取方法提取液對訓練大鼠運動生化指標的影響。通過每日灌胃給藥不同兩色金雞菊提取液35 d，同時每日進行游泳力竭訓練，結(jié)束后測定訓練大鼠生化指標和綜合運動能力。結(jié)果表明：兩色金雞菊水提液提高肌糖原和肝糖原水平、血清睪酮含量和血睪皮比以及綜合運動機能的作用優(yōu)于醇提液，而兩色金雞菊醇提液提升大鼠體重、血紅蛋白含量以及降低尿素氮含量的作用優(yōu)于水提液，整體數(shù)據(jù)綜合顯示兩色金雞菊水提液的促進運動機能和抵抗疲勞作用更為顯著。

兩色金雞菊；水提液；醇提液；生化指標；運動功能

兩色金雞菊(CoreopsistinctoriaNutt.)又名血菊，維吾爾語稱“古麗恰爾”。現(xiàn)代研究表明，昆侖兩色金雞菊含有黃酮、皂苷、多糖、揮發(fā)油、氨基酸等成分，具有降血脂、降血壓、抗衰老、降糖等藥理作用[1]。在維吾爾族人民的生活中被作為保健茶飲服用的系菊科金雞屬一年生草本植物兩色金雞菊的干燥花蕾[2]。睪酮(testosterone，T)又稱睪丸素，具有維持和影響人體系統(tǒng)生理過程的功能，可以顯著增加運動員肌肉蛋白質(zhì)的合成和肌肉力量，提高肌肉對葡萄糖的吸收和肌糖原的合成與貯備[3]。以睪酮為代表的生理激素是機體維持運動狀態(tài)，提高運動成績的重要參數(shù)。當機體進行大運動量的體能訓練時，內(nèi)分泌和情緒的變化會引起體內(nèi)多種生化指標的波動和改變，從而導致機體疲勞、體能下降等多種生理現(xiàn)象。在前期的實驗中，已經(jīng)有證據(jù)支持兩色金雞菊的水提液可改善機體在疲勞狀態(tài)下的性腺機能減退情況，在此基礎(chǔ)上，本文對比研究不同提取方法獲得的兩色金雞菊提取液對大鼠訓練疲勞時的能量代謝指標的影響，以進一步闡明兩色金雞菊對抗運動疲勞、改善機體運動機能的藥物有效部位和物質(zhì)基礎(chǔ)，為兩色金雞菊生物作用領(lǐng)域的拓展和中醫(yī)藥對機體運動能力的綜合改善提供有益的探討。

1 材料、試劑與儀器

Wistar大鼠40只(約6周齡)，體重(210.01±19.24)g，實驗過程中自然飽腹，供給普通飼料和清潔純化水；兩色金雞菊藥材購自新疆采薇飄香電子商務有限公司，由安徽中醫(yī)藥高等專科學校中藥教研室劉學醫(yī)老師鑒定，系菊科金雞屬一年生草本植物兩色金雞菊的干燥花蕾。

肝糖原、肌糖原測試盒購自南京建成生物工程研究所，實驗用水均為哇哈哈純化水，尿素氮、血清睪酮、血清皮質(zhì)酮、黃體生成素和卵泡刺激素試劑盒購自四川麥克科技有限公司。

紫外可見分光光度計(UV-5100型)由上海元析儀器有限責任公司生產(chǎn)，超聲波清洗機(ATM40-1B型)由蘇州愛拓瑪機械公司生產(chǎn)，高速冷凍離心機(D3024R型)由北京大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司生產(chǎn)，分析天平(FA21048型)由上海越平儀器廠生產(chǎn)。

2 方 法

2.1 實驗動物的準備

實驗大鼠40只通過預選選擇游泳訓練力竭時間相近的個體，按體重隨機分為4組，設(shè)定S組為靜止對照組、C組為運動對照組、W組為藥物水提液運動組、E組為藥物醇提液運動組，于每日相同時間灌胃給藥35 d。

2.2 兩色金雞菊提取液的制備

水提液的制備：稱取15 g兩色金雞菊藥材，粉碎后置于適量錐形瓶與100 mL純凈水混合，25℃超聲提取15 min，過濾后取濾液，同法再加入純化水提取，合并3次提取液，濃縮至100 mL待用。

醇提液的制備：稱取15 g兩色金雞菊，粉碎后用濾紙包裹置于索氏提取器中，用90%的乙醇溶液連續(xù)加熱回流提取1 h，提取液回收乙醇后用純化水100 mL分散待用，在大鼠灌胃前應振搖均勻。

2.3 訓練大鼠的準備

靜止對照組(S組)不進行任何運動訓練。其他各組進行以下游泳訓練：在大鼠尾部綁負約為體重5%的銅絲，放入水深約40 cm、水溫25℃的玻璃水槽中，人工驅(qū)趕大鼠進行游泳訓練，當大鼠完全沉入水中8 s不浮出水面時，判斷為力竭，持續(xù)訓練35 d。最后一日將大鼠去除負重放入水槽中人工驅(qū)趕游泳至力竭，記錄時間。

2.4 樣品的處理和測定

嚴格按照試劑盒說明書進行生化指標的測定操作和計算。最后一次訓練后24 h將所有大鼠處死，收集血液用于生化指標含量測定，迅速采集肝臟組織100 mg和深層肱四頭肌肌肉500 mg用于肝糖原和肌糖原的測定。

2.5 數(shù)理統(tǒng)計

采用Excel和SPSS 19.0對實驗數(shù)據(jù)分析處理，組間采用t檢驗，Plt;0.05為具有顯著差異，Plt;0.01為差異非常顯著。實驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差(x±s)記錄。

3 結(jié) 果

3.1 不同兩色金雞菊提取液對運動訓練大鼠體重、肝糖原、肌糖原和尿素氮的影響

實驗結(jié)果顯示，大幅體能訓練的運動組大鼠體重有不同程度下降，其中運動對照組和藥物水提液運動組大鼠體重值非常顯著地低于靜止對照組，藥物醇提液運動組大鼠體重值略低于靜止對照組，但差異不顯著；藥物運動組的大鼠體重均重于非藥物運動組，其中水提液組與運動對照組差別不顯著，而醇提液組顯著高于運動對照組。運動對照組的大鼠肝糖原和肌糖原含量均顯著低于靜止對照組，藥物運動組的大鼠的該兩個指標均有所回升。其中，藥物水提液組的大鼠肝糖原含量顯著高于運動對照組，而與藥物醇提液組的差異不顯著；大鼠肌糖原的變化情況與肝糖原類似，所有運動組的大鼠肌糖原含量均顯著低于靜止對照組，藥物水提液對照組的大鼠肌糖原含量非常顯著地高于運動對照組，藥物醇提液組的大鼠肌糖原含量略低于水提液組，但顯著高于運動對照組。所有運動組的血液尿素氮含量均顯著高于靜止對照組，藥物水提液組和藥物醇提液組的尿素氮含量均非常顯著低于運動對照組(表1)。

表1 各組別大鼠體重、肝糖原、肌糖原和尿素氮的變化情況(n=10，x±s)

注：*表示與S組存在顯著差異(Plt;0.05)，**代表與S組存在非常顯著差異(Plt;0.01),#代表

與C組存在顯著差異(Plt;0.05)，##代表與C組存在非常顯著差異(Plt;0.01)。

3.2 兩色金雞菊水提液對運動訓練大鼠肝糖原、肌糖原、尿素氮和血紅蛋白水平的影響

實驗結(jié)果表明，所有運動組的大鼠血清睪酮含量均顯著低于靜止對照組，藥物水提液運動組的大鼠血清睪酮含量顯著高于運動對照組，而醇提液組的大鼠血清睪酮含量略高于運動對照組，顯著低于藥物水提液組，血清睪皮比的變化情況和程度與血清睪酮完全一致；各個運動組的大鼠血紅蛋白含量均顯著低于靜止組，而藥物組的大鼠血紅蛋白含量均非常顯著高于運動對照組；所有藥物組的大鼠游泳運動力竭時間均非常顯著高于靜止組和未用藥的藥物對照組，見表2。

4 討 論

4.1 兩色金雞菊水提液對訓練大鼠體重的影響

體重通常代表運動員的體質(zhì)和持續(xù)運動潛力，由實驗數(shù)據(jù)可以看出大幅運動可降低大鼠的體重，而兩色金雞菊的提取液無論是水提液亦或醇提液均具有提升大鼠體重的作用，對比可知兩色金雞菊醇提液的提升體重作用更為顯著，該結(jié)論與文獻報道一致[4]。因大鼠處于體重增長階段，根據(jù)文獻推測，相比于醇提液，兩色金雞菊的水提液中可能有顯著抑制機體對葡萄糖吸收的成分，影響了大鼠體重的增加，進而表現(xiàn)出增重遜于兩色金雞菊醇溶液的結(jié)果。而體重的差異并未引起運動力竭時間的相應變化，推測體重的降低雖然降低了機體素質(zhì)和運動耐力，但亦減輕了身體負擔和運動的消耗，故而并未對運動能力起決定性作用。

表2 各組別大鼠血清睪酮、血紅蛋白和運動能力的變化情況(n=10，x±s)

注：*表示與S組存在顯著差異(Plt;0.05)，**代表與S組存在非常顯著差異(Plt;0.01)，#代表

與C組存在顯著差異(Plt;0.05)，##代表與C組存在非常顯著差異(Plt;0.01)。

4.2 兩色金雞菊水提液對訓練大鼠肝糖原、肌糖原和尿素氮水平的影響

實驗結(jié)果顯示，經(jīng)過數(shù)日大幅度的運動訓練，作為運動能力和耐力儲備的大鼠肝糖原和肌糖原水平均顯著下降，而兩色金雞菊藥物提取液可提升肝糖原和肌糖原水平，其中兩色金雞菊水提液的提升效果更為明顯。推測可能的原因是兩色金雞菊水提液中含有較多的糖類，而這類外源糖的補充減少了肝糖原和肌糖原等內(nèi)源糖原的消耗，亦或兩色金雞菊水提液中存在促進糖原儲備的功能成分——黃酮苷類或花色素類黃酮[5]。尿素氮為機體運動后分解蛋白質(zhì)的代謝廢物，其濃度高低指示機體疲勞和耐力下降的程度。實驗數(shù)據(jù)顯示，藥物組無論是水提液或者醇提液都非常顯著地降低了尿素氮含量，其中藥物醇提液作用更為明顯，提示在兩色金雞菊醇提取液中可能存在促進機體對糖或脂肪利用的成分，減少了對蛋白質(zhì)的分解利用，進而表現(xiàn)為血尿素氮的含量下降。

4.3 兩色金雞菊水提液對訓練大鼠睪酮和血紅蛋白水平的影響

睪酮是重要的運動激素，影響著機體內(nèi)運動基質(zhì)的形成和增強。大量的運動訓練可導致運動性睪酮含量下降，繼而影響運動功能[3]。實驗數(shù)據(jù)顯示，兩色金雞菊水提液能促進血清睪酮含量和血睪皮比水平的提高，與運動對照組對比，差異顯著；而兩色金雞菊醇提液組與運動對照組即未用藥組的差異不顯著，血清睪酮和血睪皮比水平的提高也不明顯，顯著低于兩色金雞菊水提液組。這一結(jié)果具有非常明確的指向性，提示兩色金雞菊中與提升睪酮作用密切相關(guān)的成分水提液中含量較高，而在醇提取液中非常有限。

血紅蛋白是機體機能正常維持的重要基礎(chǔ)物質(zhì)，兩色金雞菊水、醇提取液均能非常顯著增加運動后大鼠血液中血紅蛋白的含量，特別是醇提液更為明顯，但與水提液相比，差異不顯著。說明兩種提取液中均含有刺激血液循環(huán)，提高血紅蛋白含量成分[6]。

綜上所述，由于兩色金雞菊的水提液與醇提取液含有不同的生理活性成分，且這些成分的含量也存在差異，因此，它們對常用的數(shù)項運動生理指標的影響不同，但它們都能非常顯著地延長大鼠游泳力竭的時間，也就是說它們都能提高大鼠機體的抗疲勞能力，即增強了大鼠的體質(zhì)。其中，水提液的作用明顯優(yōu)于較醇提液，提示有關(guān)兩色金雞菊提取液對大鼠運動機能的影響研究應重點關(guān)注極性較大的水溶性部位。

[1]李東明．昆侖雪菊的藥學研究進展[J].浙江中藥雜志，2012,47(10):776-777

[2]曹燕，龐市賓，徐磊，等．金雞菊提取物體外抗氧化活性[J].中國試驗方劑學雜志，2011，12(6)：144-147

[3]陳永存，曹建民，郭嫻,等.東革阿里對運動訓練大鼠睪酮含量、物質(zhì)代謝及抗運動疲勞能力的影響[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2015，27(4)：598-603

[4]龔雪，鐘代疆，陳琦君，等.昆侖雪菊提取物對大鼠體重及血常規(guī)指標的影響[J].動物醫(yī)學進展，2014,35(11)：70-74

[5]徐天姿，單雪峰，孫煒，等.黃秋葵黃酮抗小鼠運動性疲勞的作用及其機理研究[J].中華中醫(yī)藥學刊，2014，32(4)：880-882

[6]明婷，龐市賓，劉曉燕，等.金雞菊提取物對微循環(huán)及抗凝血作用的實驗研究[J].農(nóng)墾醫(yī)學,2012,34(1)：17-19

(責任編輯：汪材印)

10.3969/j.issn.1673-2006.2017.11.028

G804.2

A

1673-2006(2017)11-0115-03

2017-05-21

安徽省高校優(yōu)秀青年人才支持計劃重點項目“運動療法協(xié)同兩色金雞菊降低Ⅱ型糖尿病人血糖效果研究”(gxyqZD2016493)；安徽省高校優(yōu)秀青年人才支持計劃重點項目“兩色金雞菊化學成分及其降“三高”物質(zhì)基礎(chǔ)研究”(gxyqZD2016505)。

趙小平(1976-)，安徽無為人，碩士，副教授，研究方向：體育科學、運動醫(yī)學、體育訓練學。