赤芍藥材中芍藥苷含量測定方法的改進

張 艷 ，申麗莎 ，楊 帆 ，王禎旭 ，鄧開英

（1．重慶市中藥研究院，重慶 400061； 2．重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121；3．重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121）

赤芍藥材中芍藥苷含量測定方法的改進

張 艷1，申麗莎1，楊 帆2，3，王禎旭2，3，鄧開英2，3

（1．重慶市中藥研究院，重慶 400061； 2．重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121；3．重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121）

目的對測定赤芍藥材中芍藥苷含量的高效液相色譜（HPLC）法進行優化。方法色譜柱采用Waters SunFire C18柱(150mm×4．6mm，5 m)，以乙腈－0．1% 磷酸（14 ∶86）為流動相，流速為 2．0mL ／min，檢測波長為 230 nm。結果芍藥苷進樣量在 0．06104 ～1．2208 g范圍內與峰面積積分值線性關系良好（r＝0．9999），平均加樣回收率為97．65%，RSD為1．47%（n＝6）。結論該方法簡便，快速，結果準確，可用于赤芍藥材的質量控制。

赤芍藥材；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定

赤芍為常用中藥，具有清熱涼血、散瘀止痛的功效，主治熱入營血，溫毒發斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁肋痛，經閉痛經，跌撲損傷，癰腫瘡瘍[1]。赤芍收載于2015年版《中國藥典（一部）》，在歷版藥典中均采用甲醇－0．05mol／L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動相測定其中芍藥苷含量，該流動相含緩沖鹽，對儀器系統和色譜柱損傷較大；供試品溶液制備樣品0．5 g需采用甲醇浸泡4 h后再超聲處理30 min。參照2015年版《中國藥典（一部）》白芍藥材含量測定項下芍藥苷含量測定方法，經試驗研究，對赤芍中芍藥苷含量測定方法進行了改進，優化流動相的組成，簡化供試品溶液制備方法，為完善赤芍的質量標準，并與白芍藥材含量測定方法統一提供參考?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent－1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BP211S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；Simplicity－185型超純水機（美國 Millipore公司）。

1．2 試藥

芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110736－201035，含量為 96．5%）；赤芍藥材(3 批，重慶市中藥飲片廠有限公司、鑫斛藥莊、重慶桐君閣大藥房各1批），經重慶市食品藥品檢驗檢測研究院楊帆副主任中藥師鑒定，均為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall．的干燥根；乙腈（色譜純，美國 Fisher公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Waters SunFire C18柱（150 mm × 4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－0．1% 磷酸（14 ∶86）；流速：2．0 m L ／min；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10μL。在此色譜條件下，供試品溶液中芍藥苷色譜峰分離良好。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

稱取芍藥苷對照品0．01265 g，精密稱定，置100m L容量瓶中，加50%乙醇溶解并定容，作為對照品貯備液；精密量取該貯備液5 mL，置 10 m L容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取赤芍藥材，粉碎，研細，取0．1 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加稀乙醇35mL，超聲處理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學考察

線性關系考察：取2．2項下對照品溶液，分別進樣1，5，10，15，20 μL，測定峰面積。以進樣量（C，μg）為橫坐標、峰面積積分值(A)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A＝1141．98C ＋1．921，r＝0．9999(n＝5)。結果表明，芍藥苷進樣量在0．06104～1．2208μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取2．2項下對照品溶液10μL，連續進樣測定 5次，記錄峰面積。結果的 RSD為1．04%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取新制備的同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12 h 時進樣測定，每次 10 μL，記錄峰面積。結果的 RSD為 1．18%(n＝5)，表明供試品溶液在 12 h內穩定。

重復性試驗：取同一批赤芍樣品，分別按2．2項下方法共制備供試品溶液6份，測定芍藥苷含量。結果平均含量為2．0%，RSD為1．46%(n＝6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已含量的同一批赤芍樣品（同重復性試驗樣品）0．05 g，共6份，精密稱定，分置50m L容量瓶中，分別精密加入對照品溶液適量，按2．2項下方法制備供試品溶液，測定，計算回收率。結果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取3批赤芍藥材，分別按本研究中擬訂的改進方法和2015年版《中國藥典（一部）》收載方法測定，結果芍藥苷的含量分別為 2．0% ，2．2% ，2．5% ，以及 2．1% ，2．3% ，2．4% ，兩者結果基本一致。

3 討論

流動相選擇：文獻[2－14]報道，高效液相色譜（HPLC）法測定中藥芍藥苷含量的流動相系統有乙腈－0．1%磷酸溶液、乙腈－水、甲醇－水、甲醇－0．1%磷酸溶液、甲醇－0．05mol／L磷酸二氫鉀溶液等。本研究中主要比較了《中國藥典》赤芍藥材含量測定用流動相（甲醇－0．05 mol／L磷酸二氫鉀溶液）和《中國藥典》白芍藥材含量測定用流動相（乙腈－0．1%磷酸溶液），結果赤芍藥材中芍藥苷色譜峰均達到基線分離，峰形良好，但乙腈－0．1% 磷酸溶液（14 ∶86）組成簡單，不含緩沖鹽，利于色譜柱和儀器系統的保護，故選定為流動相。

供試品溶液制備方法的考察：減少赤芍藥材的取樣量，制備溶劑由甲醇改為稀乙醇（降低毒性），經過對提取時間進行考察發現，樣品經超聲提取30min，已將樣品中芍藥苷提取完全。

采用改進后的方法測定3批赤芍藥材中芍藥苷的含量，結果與《中國藥典》方法測定結果一致，色譜峰經二級管陣列檢測器（DAD）檢測，樣品中芍藥苷色譜峰與芍藥苷對照品色譜峰紫外光（UV）光譜一致。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：158．

[2]黃衛娟，何秀云，劉 杰，等．HPLC法測定八珍丸（濃縮丸）中芍藥苷的含量[J]．中國藥房，2016，27（15）：2126．

[3]于紅艷，張 賓．反相高效液相色譜法測定降酶丸中芍藥苷的含量[J]．中醫學報，2014，29（4）：546－547．

[4]楊慈海，范常龍．高效液相色譜法測定斑禿丸中芍藥苷的含量[J]．海峽藥學，2014，26 （3）：45．

[5]趙 劍，陳玉蘭，蒲清榮，等．茵陳四苓顆粒質量標準研究[J]．中成藥，2014，36（4）：763．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：419．

[7]畢映燕，李秀文，劉效栓，等．HPLC法測定復方赤芍顆粒中芍藥苷含量[J]．中國中醫藥信息雜志，2014，21（4）：78．

[8]白雪媛，常桂娟，楊吉平，等．HPLC法測定血復生片中芍藥苷的含量[J]．中藥新藥與臨床藥理，2014，25 （2）：216．

[9]李 靜，錢 江．高效液相色譜法同時測定復方黃連素片中芍藥苷和鹽酸小檗堿含量[J]．中國藥業，2016，25（7）：61．

[10]高鴻彬，傅 ，王曉君，等．HPLC法測定養陰清肺口服液中芍藥苷的含量[J]．西北藥學雜志，2016，31（3）：254．

[11]趙 劍，李 靜，蒲清榮，等．高效液相色譜法同時測定利膽寬腸顆粒中梔子苷和芍藥苷含量[J]．中國藥業，2016，25（7）：54．

[12]李喜香，劉效栓，畢映燕，等．補腦軟膠囊質量標準的研究[J]．中成藥，2016，38（2）：321．

[13]程艷芹，紀松崗，馬 燕，等．內消顆粒的質量標準研究[J]．解放軍藥學學報，2016，32（1）：35．

[14]楊仕林，王 雨．反相高效液相色譜法同時測定正柴胡飲合劑中橙皮苷和芍藥苷含量[J]．中國藥業，2015，24（21）：121．

Improvement of the Determination Method of Paeoniflorin in Radix Paeoniae Rubra

Zhang Yan1， Shen Lisha1， Yang Fan2，3， Wang Zhenxu2，3， Deng Kaiying2，3
（1．Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing， China 400061； 2．Chongqing Institute for Food and Drug Control， Chongqing，China 401121； 3．Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical Process and Quality Control，Chongqing，China 401121）

Objective To improve the HPLC method for the content determination of paeoniflorin in Radix Paeoniae rubra．Methods The Waters SunFire C18column（150 mm ×4．6 mm，5 μm） was adopted with the mobile phase of acetonitrile－0．1% phosphoric acid（14 ∶86），the flow rate was 2．0 m L ／min，and the detection wavelength was 230 nm．Results The linear range of paeoniflorin was 0．06104－1．2208 μg（r＝0．9999），the average recovery was 97．65% ，the RSD was 1．47% （n ＝ 6）．Conclusion The method is simple，rapid and accurate，which can be used for the quality control of Radix Paeoniae rubra．

Radix Paeoniae rubra；paeoniflorin；HPLC；content determination

R284．1;R282．6

A

1006－4931(2017)24－0028－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．009

張艷，女，副研究員，研究方向為中藥材規范化種植、組織培養、基地建設規劃、中藥質量控制等，（電子信箱）cqzy01＠163．com。

鄧開英，女，主任藥師，研究方向為藥品質量控制，（電子信箱）dengkaiying6811＠sina．com。

2017－08－11)