血清放置時間對大鼠血生化檢測的影響

康愛君,李雨薇，王學文，劉君芳，胡建國，鄭振輝

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京 100191)

血清放置時間對大鼠血生化檢測的影響

康愛君,李雨薇，王學文，劉君芳，胡建國，鄭振輝

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京 100191)

研究報告

目的探討大鼠血清放置時間對14項血生化檢測結果的影響。方法隨機選取40只成年SD大鼠，空腹采集靜脈血液標本，靜置1 h，分離血清并密封分裝，存放于4℃和-20℃冰箱內，應用全自動生化分析儀于分離血清后0 h、4 h、24 h、96 h、7 d檢測谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA-J)、尿酸(UA)、尿素氮(UREA)、血糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)等14項血生化指標，并進行比較。結果雌雄大鼠血生化數據變化趨勢一致。4℃保存時，與0 h相比，ALP在4 h、24 h、96 h、7d均顯著降低(P< 0.05)，ALB在96 h和7 d均極顯著升高(P< 0.01)，CREA-J在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.05)，UA在24 h、96 h、7 d均極顯著升高(P< 0.01)，其他指標差異無顯著性(P> 0.05)。-20℃保存時，與0 h相比，ALT在7 d顯著升高(P< 0.01)，AST在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，TP在4 h和24 h顯著降低(P< 0.05)，ALB在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，CREA-J在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，UA在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，TC在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.05)，TG在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，CK在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，LDH在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，其他指標差異無顯著性(P> 0.05)。結論大鼠血生化測定盡可能在采集血清后即刻完成，尤其是ALP的測定，4℃冷藏時，測定UA不宜超過4 h，測定ALB和CREA-J不宜超過24 h，測定ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等指標不宜超過7 d。

大鼠；血清；放置時間；血生化檢測

血生化指標是動物實驗過程中判定實驗結果最常用的指標之一，因而血生化檢測結果的準確性直接影響動物實驗結果的正確性和可靠性。血清的處理方式是血生化指標檢測過程中的重要環節，如果血清處理不當，可直接影響血生化檢測結果的準確性[1，2]。大鼠是醫學研究過程中使用頻率較高的實驗動物種類，本文選擇了大鼠的14項常規血生化指標進行了檢測，觀察4℃和-20℃兩種不同保存溫度下血清分別放置0 h、4 h、24 h、96 h、7 d血生化指標的變化，為科研人員在血生化檢測方面提供技術指導。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級SD大鼠，共40只，雌雄各半，8周齡，體重200～220 g，由北京大學醫學部實驗動物部提供[SCXK(京)2016-0010]。飼養于屏障環境[SYXK(京)2016-0041]，溫度為(24±2)℃，相對濕度為(55±15)%。并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關懷。

1.2 主要試劑與儀器

14項血生化檢測試劑盒(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)；BS-350E 全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 血生化測定

大鼠禁食12 h，采集靜脈血液標本，靜置1 h，分離血清并密封分裝后，分別存放于4℃和-20℃，應用全自動生化分析儀分別于分離血清后0 h、4 h、24 h、96 h、7 d檢測谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA-J)、尿酸(UA)、尿素氮(UREA)、血糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)等14項血生化指標。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 雌性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同時間血生化指標的變化

與0 h相比，ALP在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著降低(P< 0.05)，ALB在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.01)，CREA-J在96 h顯著升高(P< 0.05)，UA在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，其他指標差異無顯著性(P> 0.05)。詳見表1。

2.2 雄性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同時間血生化指標的變化

與0 h相比，ALP在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著降低(P< 0.05)，ALB在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.05)，CREA-J在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.05)，UA在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，其他指標差異無顯著性(P> 0.05)。詳見表2。

2.3 雌性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同時間血生化指標的變化

與0 h相比，AST在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，TP在4 h和24 h顯著降低(P< 0.05)，ALB在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，CREA-J在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，UA在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，TC在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.05)，TG在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，CK在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，LDH在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，其他指標差異無顯著性(P> 0.05)。詳見表3。

2.4 雄性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同時間血生化指標的變化

與0 h相比，ALT在7 d顯著升高(P< 0.01)，AST在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，TP在4 h和24 h顯著降低(P< 0.01)，ALB在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，CREA-J在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.01)，UA在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，TC在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01)，TG在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，CK在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，LDH在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05)，其他指標差異無顯著性(P> 0.05)。詳見表4。

表1 雌性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化℃)Tab.1 Changes of blood biochemical indexes in sera of female SD rats stored at different times

注：與0 h組比較，*P< 0.05,**P< 0.01。

Note.Compare with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.

表2 雄性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化℃)Tab.2 Changes of blood biochemical indexes in the sera of male SD rats stored at different times

注：與0 h組比較，*P< 0.05,**P< 0.01。

Note.Compared with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.

表3 雌性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化℃)Tab.3 Changes of blood biochemical indexes in the sera of female SD rats stored at different times

注：與0 h組比較，*P< 0.05,**P< 0.01。

Note.Compared with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.

表4 雄性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化℃)Tab.4 Changes of blood biochemical indexes in the sera of male SD rats stored at different times

注：與0 h組比較，*P< 0.05,**P< 0.01。

Note.Compared with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.

3 討論

為避免由于纖維蛋白未完全收縮造成血清中各成分濃度偏高[3]，影響即刻值的準確性，此次試驗是在采集大鼠靜脈血后，先靜置1 h，待血標本收縮充分后，再離心、檢測，測定的數值做為0 h檢測數據。由于血生化檢測值受待檢動物來源、年齡、性別、血標本采集途徑、分離血清前標本靜置時間、檢測儀器以及檢測試劑等多重因素的影響，因此收集了與本研究動物來源、鼠齡、性別相同的SD大鼠內部檢測數據作為正常值參考范圍。檢測結果顯示，0 h樣本檢測值均在正常值參考范圍內。

本實驗研究結果表明，血生化檢測數據會因血清放置溫度和放置時間的不同而發生改變。變化的原因是血清放置過程中標本中水分的蒸發作用、細胞酸堿度變化以及紅細胞內容物逸出等多方面的作用[3]。

由實驗結果分析，分離血清后，4℃保存時，放置4 h后ALP指標較0 h顯著降低；-20℃保存時，放置7 d ALP指標較0 h仍無變化；由此，當需要測定ALP時，離心后的血清最好即刻檢測或者-20℃保存一周內檢測。當需要測定UA時，由于采集的血清無論4℃還是-20℃保存，放置24 h后UA值均顯著或極顯著升高，且放置7 d時UA檢測值已經超出正常參考值范圍，而4℃放置4 h 則無顯著變化，所以，離心后的血清最好即刻檢測UA或者4℃保存4 h內必須檢測UA。當需要測定ALB和CREA-J時，離心后的血清需4℃保存且需24 h內檢測。-20℃保存時，血清放置7 d ALT和AST指標較0 h均顯著升高，而4℃保存時，放置7 d 均無顯著變化；由此，當需要測定ALT和AST時，血清4℃保存一周內檢測即可。-20℃保存時，TP值出現波動，在4 h和24 h較0 h顯著降低，96 h和7 d較0 h無差異，在4℃保存時，放置7 d TP值均無顯著變化，測定TP宜4℃保存7 d內進行。當測定TC、TG、LDL-C等血脂指標時，由于-20℃保存4 h后較0 h TC和TG均顯著或極顯著升高，而4℃保存時，放置7 d 均無顯著變化，故宜4℃保存血清并一周內檢測。當測定心肌酶指標CK和LDH時，由于-20℃保存96 h后較0 h均顯著升高，而4℃保存時，放置7 d 均無顯著變化，故4℃保存血清并一周內檢測即可。實驗結果顯示，無論4℃還是-20℃保存標本，放置7 d內UREA和GLU檢測值較0 h均無顯著變化，故7 d內檢測即可。

綜上所述，為了使研究人員更加便于參考，ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等生化指標的檢測，建議4℃保存血清并7 d內檢測即可；ALB和CREA-J指標的檢測，建議4℃保存血清并24 h內檢測；由于放置時間和方式對UA指標影響較大，離心后的血清最好即刻檢測或者4℃保存4 h內檢測；對于ALP的檢測，離心后的血清最好即刻檢測，如做不到，可-20℃保存一周內檢測。

總之，血生化測定指標不同，血清可放置的時間、放置的方式則不同，為保證血生化檢測結果的準確性和可靠性，實驗人員可根據所測指標選擇適宜的血清保存方式并及時送檢，同時，檢測人員也應該對血清及時進行檢測。此外，標本的采集時間、采集部位、標本是否溶血[4-6]等也都是影響血生化檢測結果的重要因素，這些影響因素對大鼠血生化檢測結果的影響情況有待進一步探討。

[1] 包玉龍，杜佳林，李顯華，等. 不同存放時間對實驗動物血清生化值影響 [J]. 實用中醫內科雜志，2011，25(10): 10-12.

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[3] 陳中平.血標本放置時間與方式對10項血生化檢測的影響[J]. 檢驗醫學與臨床，2006，3(9): 443-444.

[4] 李詠梅. 正確的血液標本采集是檢驗結果質量保證的重要環節[J]. 中國現代藥物應用，2014，8(18): 258-259.

[5] 陳志杭.標本采集誤差對血生化檢驗的影響 [J]. 中外醫學研究，2016, 14(7): 57-58.

[6] 劉金華，簡慶佳，符傳東，等. 標本溶血對生化檢驗結果影響的研究與探討 [J]. 檢驗醫學，2017, 24(9): 138-140.

Effectofstoragetimeonserumbiochemicaltestofrats

KANG Ai-jun， LI Yu-wei， WANG Xue-wen， LIU Jun-fang， HU Jian-guo， ZHENG Zhen-hui

(Department of Laboratory Animal Science，Health Science Center，Peking University, Beijing 100191，China)

ObjectiveTo observe the effect of different storage time on 14 blood biochemical indexes in rats.MethodsRandomly selected 40 adult SD rats were included in this study. Fasting venous blood samples were collected, serum was separated, sealed, and stored in the refrigerator (4℃ and -20℃). The serum parameters were detected at 0 h，4 h，24 h，96 h and 7 d, respectively, using an automatic biochemical analyzer．A total of 14 blood biochemical indexes were detected, including alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), total protein (TP), albumin (ALB), creatinine (CREA-J), uric acid (UA), urea nitrogen (UREA), blood glucose (GLU), total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH). The effects of serum storage time on blood biochemical results were compared.ResultsThe trends of blood biochemical data in male and female rats were consistent. Compared with the indexes of serum preserved at 4℃ for 0 h, the ALP was significantly reduced after storage for 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.05), ALB were significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.01), CREA-J was significantly increased after 96 h, 7 d (P< 0.05), UA was significantly increased after 24 h, 9 h, and 7 d (P< 0.01), and no significant changes in other indicators (P> 0.05). Compared with the values of 0 h serum, the serum preserved at -20℃ showed that ALT was significantly increased after 7 d (P< 0.01), AST significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), TP significantly decreased after 4 h and 24 h (P< 0.05), ALB significantly increased after 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), CREA-J significantly increased after 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), UA significantly increased after 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), TC significantly increased after 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), TG significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), CK significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), LDH significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), and no significant changes in other indicators (P> 0.05).ConclusionsThe biochemical tests of rat serum should be immediately performed as they were collected, especially for ALP test. For the sera stored at 4℃, the test should be finished in different times: UA test in 4 hours, ALB and CREA-J test in 24 hours, and ALT, AST, TP, UREA, GLU, TC, TG, LDL-C, CK, and LDH test in 7 days.

Rat; Serum; Storage time; Blood biochemical test

2017-05-24

國家自然科學基金(81401341)。

康愛君(1971-)，女，副主任技師，研究方向：實驗動物和動物實驗。E-mail： kangaijun1028@163.com

R-33

A

1671-7856(2017) 12-0016-05

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.12.003

〔收稿日期〕2017-06-05