不同胎齡新生兒血清N端C型利鈉尿肽前體和成骨標志物表達及意義

皮亞雷，張亞男，張會豐，閻 雪

(河北醫科大學第二醫院兒科，河北 石家莊 050000)

·論著·

不同胎齡新生兒血清N端C型利鈉尿肽前體和成骨標志物表達及意義

皮亞雷，張亞男，張會豐，閻 雪*

(河北醫科大學第二醫院兒科，河北 石家莊 050000)

目的探討血清N端C型利鈉尿肽前體(amino-terminal pro-C-type natriuretic peptide，NT-proCNP)、骨堿性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase，BAP)、骨鈣蛋白(osteocalcin，OC)在不同胎齡新生兒成骨中的作用及意義。方法選擇生后24 h內新生兒80例，按胎齡分為A組(胎齡<32周)、B組(32周≤胎齡<37周)、C組(37周≤胎齡<42周)；按出生身長百分位數分為身長小于胎齡兒組(小于同胎齡兒第10百分位數，L1組)、身長適于胎齡兒組(位于同胎齡兒10～90百分位數，L2組)、身長大于胎齡兒組(大于同胎齡兒第90百分位數，L3組)；按體質量百分位數分為體質量小于胎齡兒組(小于同胎齡兒第10百分位數，W1組)、體質量適于胎齡兒組(位于同胎齡兒10～90百分位數，W2組)、體質量大于胎齡兒組(大于同胎齡兒第90百分位數，W3組)。生后1 h內測量出生身長、體質量，24 h內測定血清NT-proCNP、BAP及OC等指標。結果男性和女性新生兒胎齡、出生身長、體質量、NT-proCNP、BAP及OC差異均無統計學意義(P>0.05)；B、C組出生身長、體質量高于A組，C組出生身長、體質量高于B組，C組BAP低于A、B組(P<0.05)；3組性別、NT-proCNP、OC差異均無統計學意義(P>0.05)；L3組BAP水平低于L1組和L2組(P<0.05)，3組間NT-proCNP及OC水平差異均無統計學意義(P>0.05)；W1、W2、W3組NT-proCNP、BAP及OC水平差異均無統計學意義(P>0.05)。新生兒出生體質量及身長均與胎齡呈正相關(P<0.05)，NT-proCNP及OC與胎齡、出生體質量、身長及BAP無相關性(P>0.05)；BAP與胎齡、體質量、身長呈負相關(P<0.05)。結論未發現血清NT-proCNP水平與妊娠中晚期胎兒骨生長發育的內在聯系。BAP與胎兒骨骼生長發育密切相關，隨著胎齡增加，胎兒成骨逐漸減弱。胎兒期骨礦化作用弱，新生兒骨強度小，可能有利于分娩。

骨發育；利鈉肽，C型；成骨標志物；嬰兒，新生

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.12.013

研究表明，C型鈉尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)在軟骨內成骨中起著重要作用[1]。CNP血清、血漿及全血濃度之間差距大，N端C型利鈉尿肽前體(amino-terminal pro-C-type natriuretic peptide，NT-proCNP)血清、血漿及全血濃度無明顯差別，更穩定可靠[2]，且與CNP等摩爾產生，故常用NT-proCNP間接反映CNP的合成。研究顯示，NT-proCNP與5～18歲兒童身高增長速度呈正相關，是反映生后生長過程中軟骨細胞活性的潛在標志物[3]。NT-proCNP在不同胎齡新生兒血清中的表達及其與成骨細胞標志物的關系值得探討。本研究通過測定不同胎齡新生兒血清中NT-proCNP、 骨堿性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase,BAP)、骨鈣蛋白(osteocalcin,OC)水平，探討新生兒NT-proCNP水平及其與成骨細胞標志物的關系，以期了解NT-proCNP在新生兒軟骨內成骨中的作用。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選擇2016年11 月—2017 年 4月我院兒科生后24 h內的新生兒80例，男性51例，女性29例。按胎齡分為A組19例[胎齡<32周，胎齡范圍26.6～31.9周，中位數30.4(28.3，31.4)周]，B組35例[32周≤胎齡<37周，胎齡范圍32.1～36.9周，中位數34.30(33.60，35.10)周]，C組26例[37周≤胎齡<42周，胎齡范圍37.3～41.7周，中位數39.9(37.98，40.63)周]；按出生身長分為身長小于胎齡兒組17例(L1組，出生身長小于同胎齡兒第10百分位數)、身長適于胎齡兒組47例(L2組，出生身長10～90百分位數)及身長大于胎齡兒組16例(L3組，出生身長大于第90百分位數)；按體質量分為體質量小于胎齡兒組23例(W1組，體質量小于同胎齡兒第10百分位數)、體質量適于胎齡兒組47例(W2組，體質量10～90百分位數)及體質量大于胎齡兒組10例(W3組，體質量大于第90百分位數)。所有新生兒均無嚴重缺氧、感染，無心力衰竭及肝腎功能異常，母親無代謝性骨病、心力衰竭，無營養受限等。

本研究經醫院倫理委員會批準，所有新生兒家長均知情同意并簽署知情同意書。

1.2樣本采集及檢測 入選新生兒均于出生即刻測量身長、體質量，24 h內開奶前采集上肢靜脈血2 mL，不抗凝，待血液充分凝固后，3 000 r/min離心5 min，分別留取血清，置-20 ℃冰箱保存待測。采用酶聯免疫吸附測定法檢測血清NT-proCNP(BIOMEDICA，奧地利)、BAP(MetraTM，美國)、OC(DSL，美國)水平。應用全自動酶標儀(Wellscan MK3，芬蘭)、全自動洗板機(DEM-Ⅱ，北京)。

1.3統計學方法 應用SPSS 21.0統計學軟件分析數據。正態分布的計量資料比較分別采用成組設計的t檢驗、F檢驗和LSD檢驗；非正態分布的計量資料以中位數(M)和四分位數(Q1，Q3)表示，比較采用秩和檢驗。計數資料比較采用χ2檢驗。相關性采用Pearson相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同性別新生兒測定指標比較 男性和女性新生兒胎齡、出生身長、體質量、NT-proCNP、BAP及OC差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同性別新生兒測定指標比較Table 1 Comparison of neonatal indexes between different genders

2.2不同胎齡組新生兒測定指標比較 B、C組出生身長、體質量高于A組，C組出生身長、體質量高于B組，C組BAP低于A、B組，差異均有統計學意義(P<0.05)；3組性別、NT-proCNP、OC差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同胎齡新生兒測定指標比較Table 2 Comparison of neonatal indexes in different gestational age

*P<0.05與A組比較 #P<0.05與B組比較(秩和檢驗或LSD檢驗)

2.3身長適于胎齡組測定指標比較 L3組BAP水平低于L1組和L2組，差異均有統計學意義(P<0.05)；3組間NT-proCNP及OC水平差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 身長適于胎齡組測定指標比較Table 3 Comparison of indexes in body length appropriate for gestational age groups

*P<0.05與L1組比較 #P<0.05與L2比較(秩和檢驗或LSD檢驗)

2.4體質量適于胎齡組測定指標比較 3組NT-proCNP、BAP及OC水平差異均無統計學意義(P>0.05)，見表4。

2.5相關性分析 新生兒出生體質量及身長均與胎齡呈正相關(r=0.767、0.747，P<0.05)；NT-proCNP及OC與胎齡、出生體質量、身長及BAP無相關性(r=-0.026、0.151、-0.047、0.148,r=0.026、0.004、0.087、0.199，P>0.05)；BAP與胎齡、體質量、身長呈負相關(r=-0.306、-0.230、-0.309，P<0.05)。

表4 體質量適于胎齡組測定指標比較Table 4 Comparison of indexes in body weight appropriate for gestational age groups

3 討 論

胎兒期及新生兒期為人一生中生長速度最快的時期，骨骼生長發育是胎兒及新生兒縱向生長的基礎，骨骺軟骨內成骨為長骨縱向生長的中心環節。軟骨內成骨過程受一系列內分泌、自分泌和旁分泌因子的調控，是一個復雜、精細及完整、嚴密的網絡系統。CNP通過促進軟骨細胞增殖、肥大、基質分泌調節生長板生長[4]，是小鼠生長板生長重要的正向旁分泌調節因子[5]。CNP通過與靶細胞表面受體NPR-B結合發揮作用。在人類，CNP基因NPPC突變可引起常染色體顯性遺傳性矮小[6]，NPR-B基因Npr2功能失活性突變是發生Maroteaux型肢端肢中發育不良的病因[7]，此類患者家族中Npr2功能失活性突變攜帶者身高標準差得分均較非攜帶者及正常人群顯著降低[8]，而Npr2功能獲得性突變引起過度生長[9-11]。表明CNP-NPR-B通路在人類軟骨內成骨中亦起著重要作用。

目前國內外學者多數研究主要關注生后及年長兒CNP表達情況[12-14]，有關胎兒及新生兒CNP表達的研究甚少。因此，本研究選擇不同胎齡新生兒(胎齡26.2～41.7周)為研究對象，探討CNP在新生兒及妊娠中晚期軟骨內成骨中的作用。由于CNP很快被清除性受體NPR-C及中性肽鏈內切酶清除，血清、血漿及全血濃度波動大，而NT-proCNP更穩定可靠，易于檢測[2]，且與CNP等摩爾產生，故本研究通過測定NT-proCNP間接反映CNP的合成。

本研究結果顯示，不同性別間新生兒胎齡、出生身長、體質量、NT-proCNP、BAP及OC差異均無統計學意義；不同胎齡組間NT-proCNP差異無統計學意義；身長小于、適于、大于胎齡兒3組間及體質量小于、適于、大于胎齡兒3組間NT-proCNP差異亦無統計學意義；NT-proCNP與胎齡、出生身長、BAP、OC均無明顯相關性。與國外學者研究結果不同[15]。推測可能原因為：與國外研究比較，雖然均將肝腎功能異常、骨代謝疾病、心力衰竭等已知影響CNP因素剔除，但國外學者納入新生兒疾病譜更廣泛，包括外科性疾病、嚴重感染、部分受試新生兒胃腸道喂養受限等，眾多混雜因素可能影響血清NT-proCNP結果[16-18]。通過選擇無營養受限孕母及新生兒生后24 h內盡早采血，可避免營養等因素的干擾。另外，CNP主要參與長骨生長，胎兒及新生兒頭部扁骨所占比例大，可能影響NT-proCNP與身長的相關性。動物實驗中小鼠CNP基因靶向斷裂模型研究及人類Npr2基因功能失活/獲得性突變[19]均顯示，受累個體出生身長與正常個體無差別，生后隨時間推移，生長受限或過度生長逐漸顯著。因此，結合本研究的發現，推測CNP-NPR-B信號通路可能并非宮內骨生長的關鍵因子，只在生后骨縱向生長中發揮重要作用。盡管本研究中NT-proCNP未顯示性別差異，且與胎齡無明顯相關性，與Prickett等[15]研究不一致，但Prickett等還進行了縱向研究及NT-proCNP與下肢生長速度的相關性研究，顯示NT-proCNP與生后下肢生長速度呈正相關。一方面提示NT-proCNP在生后長骨生長中起著重要作用，另一方面提示應增加縱向研究，以進一步探討NT-proCNP在長骨生長中的作用。

成骨細胞在骨形成階段生成大量BAP，BAP是反映機體成骨細胞功能的特異性分子標志物，也是成骨細胞外基質成熟的標志物，細胞外基質開始礦化后，BAP活性即減低。本研究結果顯示，C組BAP低于A、B組(P<0.05)，且BAP與胎齡、出生身長、體質量呈負相關。提示BAP與宮內胎兒骨生長有關，胎齡越小，成骨細胞活性越強，隨著胎齡增加，成骨細胞活性減弱，這與妊娠中晚期胎兒脛骨生長速度逐漸減慢趨勢是一致的。OC在成骨細胞外基質礦化階段表達，促進鈣磷鹽向羥磷灰石轉變，最終增加骨鹽含量，提高骨強度。OC在生后3個月內顯著升高。本研究結果顯示，A、B、C 3組OC水平差異無統計學意義，與胎齡、出生體質量、身長、BAP、NT-proCNP均無相關性。可能與胎兒各期骨礦化作用均弱、新生兒骨強度小、有利于分娩有關。

綜上所述，本研究未發現血清NT-proCNP水平與妊娠中晚期胎兒骨生長發育的內在聯系，CNP-NPR-B信號通路可能并非胎兒宮內骨生長關鍵因子，只在生后骨縱向生長中發揮重要作用，今后需要更多縱向研究以進一步闡釋NT-proCNP在長骨生長中的作用；BAP與妊娠中晚期胎兒骨骼生長發育密切相關；胎兒期骨礦化作用弱，新生兒骨強度小，可能利于分娩。

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Theexpressionandsignificanceofamino-terminalpropeptideofC-typenatriureticpeptideandboneformationmarkersforneonatesofdifferentgestationalage

PI Ya-lei, ZHANG Ya-nan, ZHANG Hui-feng, YAN Xue*

(DepartmentofPediatrics,theSecondHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050000,China)

ObjectiveTo investigate the role and significance of amino-terminal pro-C-type natriuretic peptide(NT-proCNP), bone specific alkaline(BAP) and osteocalcin(OC) in bone-formation of neonates with different gestational age.MethodsEighty cases of neonates born within 24 hours were selected and were divided into group A(gestational age<32 weeks), group B(32 weeks ≤gestational age<37 weeks), and group C(37 weeks ≤ gestational age<42 weeks) according to gestational age. According to the body length participants were divided into three groups: length less than that of gestational age group(L1 group), length appropriate for gestational age group(L2 group), and length greater than the gestational age group(L3 group). According to body weight percentile, they were divided into three groups: body weight less than that of gestational age group(W1 group), body weight appropriate for gestational age group(W2 group), and body weight greater than gestational age group(W3 group). Birth length and body mass were measured within 1 hour after birth. Serum NT-proCNP, BAP and OC were measured within 24 hours after birth.ResultsThere were no significant differences in gestational age, birth length, body mass, NT-proCNP, BAP and OC between male and female neonates(P>0.05). Participants from group B and C had higher birth length and body weight than A group. Participants from group C had higher birth length and body weight than group B. BAP of group C was lower than that of group A and B(P<0.05). There was no significant difference in gender, NT-proCNP and OC among 3 groups(P>0.05). BAP of group L3 was lower than that of group L1 and L2(P<0.05). There was no significant difference in the levels of NT-proCNP and OC among 3 groups(P>0.05); NT-proCNP, BAP and OC level had no significant difference among group W1, W2 and W3(P>0.05). Neonatal birth weight and body length were positively correlated with gestational age(P<0.05). There were no correlation between NT-proCNP and OC and gestational age, birth weight and BAP(P>0.05). BAP and gestational age, body weight, and body length were negatively correlated(P<0.05).ConclusionNo relationship between serum NT-proCNP levels and fetal bone development during the second and third trimester of pregnancy was found. BAP is closely correlated with fetal bone growth and development. With the increase of gestational age, fetal ossification gradually weakened. The mineralization of fetal bone is weak and the bone strength of newborn is samll, which may be beneficial to delivery.

bone development; natriuretic peptide, C-type; osteogenic markers; infant, newborn

2017-09-05；

2017-09-26

皮亞雷(1982-)，女，河北行唐人，河北醫科大學第二醫院主治醫師，醫學碩士，從事兒童內分泌遺傳代謝疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail:ywcyx752@163.com

R336

A

1007-3205(2017)12-1413-05

趙麗潔)