回族和漢族男性冠心病患者血脂Hcy水平及E-選擇素基因型分布比較

王麗萍， 孫常銘, 于海明, 朱金伶, 李欣欣, 王鵬飛, 華正祥

(1.承德醫學院附屬醫院， 河北 承德 067000 2.河北省平泉市醫院， 河北 平泉 067500 3.河北省灤平縣醫院， 河北 灤平 0682504.河北省寬城滿族自治縣醫院， 河北 寬城 067605)

回族和漢族男性冠心病患者血脂Hcy水平及E-選擇素基因型分布比較

王麗萍1， 孫常銘1, 于海明2, 朱金伶3, 李欣欣4, 王鵬飛1, 華正祥1

(1.承德醫學院附屬醫院， 河北 承德0670002.河北省平泉市醫院， 河北 平泉0675003.河北省灤平縣醫院， 河北 灤平0682504.河北省寬城滿族自治縣醫院， 河北 寬城067605)

目的比較回族和漢族男性冠心病患者血脂、Hcy水平及E-選擇素基因型分布的差異。方法選取2015年1月至2017年6月于我院診治的男性冠心病患者共190例，其中回族90例，漢族100例為研究對象，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性方法(PCR-RFLP)檢測E-選擇素第2外顯因子G98T和第4外顯因子A561C的基因型分布，同時檢測兩組的血脂及Hcy水平，探討兩民族間的差異。結果回族、漢族男性冠心病患者年齡差異無統計學意義(P>0.05)，而漢族冠心病患者家族史、高血壓病史、吸煙/飲酒史比例高于回族(P<0.05)；漢族男性冠心病患者血清TC、HDL、Glu、Hcy水平明顯高于回族，差異有統計學意義(P<0.05)；漢族AMI組E-selectin水平高于回族，差異有統計學意義(P<0.05)，而SAP組和UAP組E-selectin水平兩民族間差異無統計學意義(P<0.05)；回族AMI組GG與GT、AA與AC基因型分布高于漢族，差異有統計學意義(P<0.05),兩民族SAP與UAP組間基因型分布差異無統計學意義(P>0.05)。結論漢族冠心病患者家族史、高血壓病史、吸煙/飲酒史比例及血清TC、HDL、Glu、Hcy水平明顯高于回族患者；E-選擇素第2外顯子G98T、第4外顯子A561C兩個位點基因型分布在回族、漢族間分布差異有統計學意義，回族AMI組GT及AC基因型發病比例更高。

回 族； 漢 族； 冠心病； E-選擇素； 基因型

冠心病(coronary heart disease，CHD)是嚴重威脅人類生命健康且發病率極高的疾病之一，也是目前最為常見的死亡原因[1]。據統計，我國城市冠心病發病率高于農村，并且男性發病率高于女性，這可能與城市與農村人群、男性與女性人群的飲食習慣、生活方式、職業壓力等密切相關[2]。有研究表明，冠心病危險因素在不同民族不同人群存在著明顯差異，而我國是個多民族國家，各民族間生活環境、飲食結構及遺傳基因、文化信仰使得不同民族間冠心病發病規律及臨床特點也有所不同[3]。2011年美國心臟病相關數據分析顯示，對于男性，任何年齡段心源性死亡都是其主要致死因素，男性冠心病的發病時間較女性平均早10年[4]。而本研究對象選取男性，從不同民族出發，對本地區回族和漢族男性冠心病患者E-選擇素基因型分布情況進行比較，為冠心病研究提供新的依據。

1 資料與方法

1.1研究對象:本研究中的190例男性冠心病患者，均選自2015年1月至2017年6月于我院心血管內科住院患者，其中回族90例，漢族100例，其中急性心肌梗死(AMI)組64例，不穩定性心絞痛(UA)組62例，穩定性心絞痛(SA)組64例。

1.1.1診斷標準：根據中華醫學會心血管病分會制定的《冠狀動脈粥樣硬化性心臟病診斷標準(2010)》[5]：急性心肌梗死劇烈胸痛持續時間>30min以上，心電圖出現明顯的持久的Q波或ST段改變，心肌標志物陽性及血清酶學顯著升高，發病時限在24h以內；不穩定性心絞痛勞累時發作次數增加，時間延長，胸痛時間<30min，發作時心電圖出現ST段暫時性壓低>lmm，癥狀緩解后，迅速恢復或接近正常水平，心肌標志物無改變；穩定性心絞痛有勞累性心絞痛發作，其性質在2個月內無明顯改變，但運動試驗呈現陽性。

1.1.2納入標準：①患者在勞累后出現持續性1～5min的胸后方疼痛，并放射在左上肢和肩部；②發病心電圖可見暫時的T波倒置或ST段下移；③經冠狀動脈造影可見動脈狹窄或阻塞程度>50%；④心肌標志物結果陽性。

1.1.3排除標準：①患者之間有親緣關系；②糖尿病患者；③患者合并嚴重腎功能不全；④患有免疫系統疾病；⑤患者近期服用激素類藥物；⑥腫瘤患者；⑦甲狀腺患者。

1.2研究方法

1.2.1心血管病相關指標檢測受試者入院后晨起空腹，用肝素抗凝管采集外周靜脈血5mL，檢測總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血糖(Glu)及同型半胱氨酸(Hcy)水平。

1.2.2E-選擇素血清學水平測定:采用雙抗體夾心法對E-selectin水平進行檢測，按照ELISA試劑盒(北京信科儀器有限公司)的操作標準進行。

1.2.3基因組DNA提取:受試者空腹，用EDTA抗凝管采集外周靜脈血5mL，用鹽析法提取基因組DNA，置于-20℃冰箱凍存。

1.2.4PCR引物設計與合成:用Primer5運行設計引物，由大連寶生物公司合成。

引物序列如下：用于擴增E-selectin第2外顯子G98T的引物：

上游引物5'-TGCCCAAAATCTTAGGATAC-3'；下游引物5'-AAGCCCAGGGAAGAACACAT-3'，

用于擴增E-selectin第4外顯子A561C的引物：

上游引物5'-AGTAATAGTCCTCCTCATCATG-3'；下游引物5'-ACCATCTCAAGTGAAGAAAGAG-3'。

1.2.5PCR擴增:PCR擴增反應體系為25ul，其中正、反向引物各2μl，10×PCRbuffer 2ul，基因組DNA 3μl，dNTPs 2μl，Mgcl21μl，TaqDNA聚合酶 0.5μl，雙蒸水12.5μl。置熱循環儀上：預變性：95℃ 5min；變性：95℃ 30s；復性：58℃ 1min；延伸：72℃ 1min。共30個循環，最后72℃延伸10min冷卻到4℃。

1.2.6限制性酶切:取PCR擴增15ul，G98T基因擴增產物用HphⅠ限制性內切酶進行酶切，A561C基因擴增產物用Pstl限制性內切酶進行酶切。37℃孵育3.0h反應終止，用3%瓊脂糖凝膠電泳、染色，成像后系統判斷結果。

2 結 果

2.1回族、漢族男性冠心病患者基礎資料回族、漢族男性冠心病患者年齡差異無統計學意義(P>0.05)，漢族冠心病患者家族史、高血壓病史、吸煙/飲酒史比例顯著高于回族，差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 回族、漢族男性冠心病患者基礎資料比較

2.2回族、漢族男性冠心病患者血脂及Hcy水平比較漢族男性冠心病患者血脂TC、HDL、Glu、Hcy高于回族患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 回族、漢族男性冠心病患者血脂及Hcy水平比較(mmoL/L)

2.3不同冠心病亞組患者回族、漢族E-selectin水平比較:漢族AMI組E-selectin水平高于回族，差異有統計學意義(P>0.05)，而SAP組和UAP組兩民族間差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同冠心病亞組回族、漢族患者E-selectin水平比較(mmoL/L)

2.4回族、漢族男性冠心病患者E-選擇素第2、4外顯子基因型分布的比較:E-選擇素第2外顯子G98T、第4外顯子A561C兩個位點的基因型分布在回族、漢族男性冠心病患者間的比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 回族、漢族男性冠心病患者基因型的分布n(%)

2.5回族、漢族男性不同冠心病組E-選擇素第2、4外顯子基因型分布的比較:對回族、漢族的不同類型的冠心病患者各位點基因型分布進行了進一步比較分析：漢族AMI組與UAP、SAP組間GG與GT、AA與AC基因型的分布差異有統計學意義(P<0.05),回族AMI組GT基因型及AC基因型發病比例更高,兩民族SAP與UAP組分布差異無統計學意義(P>0.05)，見表5、表6。

表5 回族、漢族冠心病患者G98T位點基因型分布的比較n(%)

表6 回族、漢族冠心病患者A561C位點基因型分布的比較n(%)

3 討 論

冠狀動脈因管腔狹窄、阻塞或其功能異常變化，導致心肌細胞缺血、缺氧甚至壞死而引起的心臟病被統稱為冠狀動脈性心臟病(Coronary heart disease，CHD)[6]。據衛生部統計，我國心血管疾病的患病率和病死率逐年增高，不同民族，冠心病的發病率及病死率也存在差異[7]。黑種人與白種人相比，冠心病發病率、病死率均居于高水平，其發展為心腦血管卒中的危險率是白種人的2～4倍[8]。在加拿大，土著血統的加拿大人較歐洲血統的加拿大人心血管患病率高2.5倍。美國多種族動脈粥樣硬化研究發現白種人、黑種人、西班牙裔和華裔美國人中動脈鈣化率為44%、36%、35%和42%，該數據體現了不同種族冠脈硬化率的差異[9]。回、漢民族男性冠心病人群因種族及風俗習慣不同，其發病特點、危險因素、遺傳基因等方面都有一定的差異性。有研究表明男性冠心病的患病率高于女性，說明這與男性好吸煙、酗酒、高膽固醇飲食，不愛運動等習慣有關。

E-選擇素(E-selectin)是選擇素家族中的一員，是近幾年來發現的一種炎癥細胞因子，炎性因子反應既可促進冠心病的發生，也可以用于識別不穩定斑塊的變化。在動脈粥樣硬化發生、發展過程中，需要許多細胞因子參與，表現為大動脈、中動脈壁出現一個或多個特征性斑塊，在鏡下可見斑塊中含有大量基質和病理性泡沫細胞。E-selectin可以參與多種白細胞的黏附和聚集，同時還參與脂類代謝，影響膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的水平。它在動脈粥樣硬化及血栓形成、腦卒中等病理過程中起著重要的作用。

流行病學調查顯示：血脂異常、高血壓、吸煙、基因突變等許多因素與動脈粥樣硬化的發生、發展呈現相關性，這些因素被視為動脈粥樣硬化的危險因子。國外學者Gupta A[10]、Iversen B等[11]分別研究了可溶性E-selectin血清學水平與血脂代謝的相關性，認為LDL-C誘導、刺激血管內皮細胞表達E-selectin，與E-selectin血清學水平顯著相關。我們發現回族、漢族人群基本資料有所不同，這是由于回族和漢族之間宗教信仰、飲食習慣、遺傳基因不同，所以導致冠心病的危險因素也不同。眾多因素中，吸煙作為冠心病的高危因素，增加了冠心病的發病率和死亡率，漢族人群吸煙比例高于回族。長期吸煙患者血液中的C反應蛋白、白介素6等炎性因子水平增高，這是加速動脈粥樣硬化的原因之一。另外回族人群飲食習慣與漢族人群大不相同，漢族人群以食豬肉為主增加了患高血脂的風險，而回族人群以牛羊肉高蛋白飲食為主，但是回族人群喜糖茶，所以血糖水平高于漢族人群，高血糖狀態刺激冠狀動脈平滑肌過度增生，促進炎性反應，加速冠狀動脈粥樣硬化的發展。

許多研究已證明，冠心病患者體內都會有多種臨床指標改變，包括：尿酸、同型半胱氨酸(Hcy)、高敏C反應蛋白(hs-CRP)、纖維蛋白原(Fib)、D-二聚體(D-D)等，這些指標的變化影響著冠心病的發生發展，也成為近幾年來的研究熱點。Hcy可通過自身氧化產生大量自由基、從而介導血管內皮破壞，從而促進動脈粥樣硬化斑塊的形成和管腔狹窄變形，而纖維蛋白原水平升高可加速機體高凝狀態，引發血栓形成。Park[12]等研究了6371例參與者，測定的指標包括CRP、Fib、D-D、Hcy、白細胞、血小板，并對其進行了為期十年的隨訪，結果表明炎癥反應程度和以上指標變化密切相關，同時增加了疾病的發病風險，這與我們的研究結果一致。

冠心病患者外周血中血清E-se1ectin的水平升高,其升高水平與冠狀動脈病變程度密切相關。曲凌光[13]等學者研究多民族間冠心病患者E-se1ectin水平發現升高程度可作為胸痛患者可疑冠心病的早期輔助鑒別手段。國外學者Blann[14]等研究發現局部缺血性心臟病發生動脈粥樣硬化時可溶性E-se1ectin水平增高是其標志之一,兩者的研究指向一致。本研究結果顯示：漢族AMI組血清E-selectin水平顯著高于回族，而SAP組和UAP組兩民族間無差異，這說明盡管AMI和UA的病情嚴重程度不同,但兩者冠狀動脈內皮細胞的激活程度是相當的。國內學者裴曉黎[15]在研究喀什地區民族冠心病血脂時發現名族間血脂水平存在差異，羅仁[16]研究了多民族間不同年齡不同性別冠狀動脈粥樣硬化程度發現男性發病率高，且少數民族發病率更早,這與我們的研究與相似之處。

CHD患者E-selectin水平的升高標志著缺血心肌發生了急性炎癥反應，E-selectin水平對于評價冠狀動脈粥樣硬化斑塊的穩定性是一個較好的指標。不同人群的E-selectin基因型分布呈現不同的生物學效應，也會影響著該人群不同個體對相關疾病的易感性。為了進一步研究E-selectin基因型與回族、漢族CHD嚴重程度的差異，我們對CHD組進行了分組研究，結果顯示：漢族冠心病患者AMI組與UAP、SAP組間GG與GT、AA與AC基因型的分布差異有統計學意義，兩民族間SAP與UAP組分布差異無統計學意義，這說明回族男性冠心病患者AMI組的遺傳易感性更強，可做為臨床診斷的參考，同時也表明冠心病的嚴重程度與E-selectin基因型的分布密切相關，在不同民族不同人群遺傳基因不同。總之，漢族冠心病患者較回族發生冠心病的危險因素較多，但是回族冠心病患者病變程度更重，這與我國其他民族與漢族冠心病危險因素的比較報道基本一致。由于本研究樣本比較局限，可進一步擴大樣本進行多民族的比較研究，為我國冠心病的發病特點尋找更充足的依據。

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ComparisonofBloodLipid,HcylevelsandE-selectinGenotypeDistributioninmalepatientswithCoronaryHeartDisease

WANGLiping,SUNChangming,YUHaiming,etal

(TheAffiliatedHospitalofChengdeMedicalUniversity,HebeiChengde067000,China)

Objective: To compare the blood lipid and Hcy levels and E-selectin genotype distribution in male patients with coronary heart disease.MethodsA total of 190 patients with coronary heart disease were selected from our hospital from Jan. 2015 to Jun. 2017, including Hui 90cases, 100 cases of Han nationality as the research object, using restriction fragment length polymorphism analysis of polymerase chain reaction (PCR-RFLP) gene polymorphism detection of E selectin in the second exon of G89T and the fourth exon of A561C, and serological detection levels in the two groups,to explore the differences between the two peoples.ResultsThere was no significant difference between Hui and Han population in age, while the Han family history, hypertension, smoking/drinking history was significantly higher than the proportion of Hui population (P<0.05);Group of coronary heart disease in Han population of HDL, Glu, serum TC, Hcy levels were significantly higher than that of Hui population, the difference was statistically significant (P<0.05);Han AMI group serum E-selectin level was significantly higher than that of the Hui, the difference was statistically significant (P<0.05),SAP group and UAP group had no significant difference between the two ethnic groups (P>0.05);Group GG and GT, the distribution of AMI AA and AC genotype was significantly higher than that of Han and Hui, there was a significant difference (P<0.05),the national SAP and UAP distribution between groups were not significantly different (P>0.05).ConclusionsHan nationality patients with coronary heart disease in the family history, history of hypertension, smoking/drinking history and the ratio of serum TC, HDL, Glu, Hcy levels Was higher than that of Hui population; E-selectin Exon 2 G98T and Exon 4 A561C two gene polymorphism in Hui and Han nationality coronary heart disease have significant difference, Hui AMI group GT and AC genotype were higher incidence.

Hui nationality; Han nationality; Coronary heart disease; E-selectin; Genotype

1006-6233(2017)12-2000-06

承德市科技計劃項目，(編號201701A048)

華正祥

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.12.019