GC外標法測定麝香壯骨膏中揮發性成分的含量

韓瑋琳 張淼 李興

麝香壯骨膏質量標準收載于《衛生部藥品標準》成方制劑第十一冊，用于風濕，關節痛，腰痛。神經痛，肌肉酸痛，扭傷，挫傷。其主要成分為樟腦、冰片、薄荷腦、水楊酸甲酯等，其質量標準中無對上述藥味的質量控制方法。本試驗采用GC法測定了麝香壯骨膏中揮發性成分樟腦、冰片、薄荷腦、水楊酸甲酯的含量，該方法操作簡便、準確、重現性好，適用于該品種的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent6890N氣相色譜儀，FID氫火焰離子化檢測器，載氣為高純氮氣(99.999%)，電子分析天平 Mettler AE-240

1.2 試藥 對照品均由中檢所提供樟腦對照品(批號110747-201008)、薄荷腦對照品(批號110728.200506)、冰片對照品(批號110743-200504)、水楊酸甲酯對照品(批號110707-201112)。

試劑:乙酸乙酯為GC專用試劑;

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:DB-WAX柱(柱長30米，內徑0.53mm，膜厚1μm)，柱溫120℃;分流進樣。

2.2 對照品溶液制備與供試品溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取樟腦22.5mg、薄荷腦17.5mg、冰片對照品30mg、水楊酸甲酯30mg，置25ml量瓶中，加乙酸乙酯使溶解，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品4片，除去襯被，剪碎，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，照揮發油測定法(附錄 XD)試驗，自測定器上端加水使充滿刻度部分并溢流入燒瓶時為止，加乙酸乙酯2ml，連接回流冷凝管，加熱至沸騰并保持微沸3h，放冷，乙酸乙酯液用鋪有0.1g無水硫酸鈉的漏斗濾過，濾液轉移至25ml量瓶中，冷凝管及揮發油測定器內壁用乙酸乙酯少量洗滌，通過上述漏斗，并入量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，精密量取10ml至25ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。

2.3 提取時間考察 取同一批樣品(批號:100501)，分別保持微沸2h、3h、4h，測定含量，結果2h測定結果較低，3h與4h結果基本一致，因此提取時間定為3h。

2.4 專屬性考察 按照處方比例稱取除樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯外的其余藥味，按制備工藝制成缺樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。將混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，分別注入氣相色譜儀進行測定。結果顯示其他藥味不干擾樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的檢出。

2.5 線性關系考察 精密稱取上述三種對照品，加乙酸乙酯制成濃度為樟腦9.132mg/ml、薄荷腦7.125mg/ml、冰片12.117mg/ml、水楊酸甲酯12.559mg/ml的溶液作為混合對照品溶液I，精密量取混合對照品溶液I0.1、0.5、1、5ml分別置10ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。精密吸取上述5種混合對照品溶液1 μl，注入氣相色譜儀測定，由對照品濃度(X)與對照品峰面積(Y)進行回歸，得回歸方程:樟腦 Y=1086.5x-8.6822，r=0.9999、薄荷腦 y=2845.7x-4.5111，r=0.9999、冰片 y=1795.3x-0.5533 r=0.9999、水楊酸甲酯 y=657.95x-8.6611，r=0.9999結果表明樟腦在9.132～0.0913 mg/ml、薄荷腦在7.125～0.0712 mg/ml、冰片在 12.117～0.1212 mg/ml、水楊酸甲酯12.559～0.1256濃度范圍內線性關系良好，注:冰片峰面積以龍腦和異龍腦面積之和計算。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一批供試品溶液1μl，連續進樣6次，記錄峰面積，結果精密度樟腦RSD為1.11%、薄荷腦RSD為1.19%、冰片RSD為1.07%、水楊酸甲酯RSD為0.79%。

2.7 穩定性試驗 將同一份供試品溶液于室溫下放置，分別于0、0.5、1、2、5、8、12h各精密進樣1μl，按上述色譜條件檢測，記錄各組分色譜峰面積值，其樟腦為1.59%、薄荷腦為1.17%、冰片為0.92%、水楊酸甲酯1.33，表明供試品溶液在室溫下放置12h內穩定。

2.8 重復性試驗 取同一批號的樣品，按上述供試品溶液制備方法及其色譜條件測定方法進行6次平行提取測定，含量分別為:樟腦RSD為1.2%;薄荷腦RSD為0.9%;冰片RSD為1.5%、水楊酸甲酯1.1%。

2.9 加樣回收率試驗 取供試品2片為一份，共6份，平行提取測定，精密加入濃度為樟腦20.35mg/ml、薄荷腦55.01mg/ml、冰片33.56mg/ml、水楊酸甲酯18.62mg/ml的混合對照品溶液1ml按擬定方法測定。結果見表1、2、3、4。

2.10 樣品測定 按擬定的方法對3批樣品進行含量測定，結果見表4。

表1 樟腦回收率試驗結果

表2 薄荷腦回收率試驗結果

表3 冰片回收率試驗結果

表4 水楊酸甲酯回收率試驗結果

表5 3批樣品含量測定結果

3 討論

本品采用揮發油提取方法，有效的排除了橡膠膏劑基質的影響，進一步純化樣品。

因其測定成分均為純品，不存在交叉干擾現象，所以未單獨進行專屬性實驗。

橡膠膏劑因工藝原因，造成揮發性成分損失較大，本方法通過氣相色譜方法制定了麝香壯骨膏中已知的多個指標成分含量測定方法，可有效控制其質量，有助于其質量數據的積累，為工藝控制與革新提供有效的依據，促進質量的提高。

通過本次實驗，為建立相同提取方法，相同檢測方法，控制橡膠膏劑揮發性成分研究工作，提供數據支持。