在顯微鏡下觀察豬腎臟的結(jié)構(gòu)

腎臟是人體的重要器官，其基本功能是形成尿液。腎臟的結(jié)構(gòu)和功能單位稱為腎單位，是形成尿液的最小功能單位。腎單位將體內(nèi)的無(wú)機(jī)鹽、尿素、尿酸等代謝廢物從血液中分離出來(lái)，保留水分、葡萄糖、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽等有用物質(zhì)，調(diào)節(jié)人體水分及酸堿平衡。如果腎臟的功能出現(xiàn)障礙，就會(huì)引起人體穩(wěn)態(tài)失調(diào)。因此，腎臟對(duì)人體發(fā)揮著極其重要的作用。

學(xué)完相關(guān)內(nèi)容后，筆者對(duì)腎臟的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了濃厚的興趣，并通過(guò)查閱書籍和網(wǎng)絡(luò)資料，對(duì)腎臟的結(jié)構(gòu)和功能有了進(jìn)一步的了解，從而萌生了親手制作腎臟玻片標(biāo)本的想法。在咨詢了教師、相關(guān)行業(yè)人員之后，筆者購(gòu)買了新鮮的豬腎，聯(lián)系當(dāng)?shù)蒯t(yī)院病理科室，借助其先進(jìn)的儀器進(jìn)行了豬腎臟切片標(biāo)本的制作。標(biāo)本制作包括取材、脫水、包埋、切片、染色、封片、觀察這七個(gè)步驟。制作過(guò)程與制作結(jié)果如下。

一、取材

材料：新鮮的豬腎臟一個(gè)、解剖刀一把、脫水盒若干、解剖盤一個(gè)、鑷子一個(gè)、剪刀一把、塑膠手套一雙。

步驟：第一，雙手套上塑膠手套，將豬腎臟擺放在解剖盤上，找到腎盂與輸尿管相連處，用剪刀將腎盂口外端的輸尿管、動(dòng)脈、靜脈分別橫斷各取材一份，放置于脫水盒中；第二，用解剖刀從腎盂與輸尿管的連接處沿矢狀面剖開(kāi)，豬腎臟的皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂清晰可見(jiàn)，且界限分明；第三，用解剖刀從皮質(zhì)、髓質(zhì)處進(jìn)行一體取材兩份，放置于脫水盒中，并從腎盂處取材兩份，也放置于脫水盒中。

二、脫水

將七份材料分別置于脫水盒中，分別標(biāo)記為斷端1、斷端2、斷端3、腎組織1、腎組織2、腎盂1、腎盂2，并一起放入脫水機(jī)中脫水15個(gè)小時(shí)。

三、包埋

先從脫水機(jī)中取出材料，用清水沖洗兩遍；再用包埋機(jī)將材料進(jìn)行石蠟包埋；最后置于冰箱冷凍1小時(shí)。

四、切片

首先，將冷凍好的材料放置于切片機(jī)上，將其切成厚度為0.004毫米的標(biāo)本。其次，每一個(gè)石蠟材料都要連續(xù)切割多次，從中挑選最完整、伸展度最好的兩片，并分別做好標(biāo)記。最后，將切好的材料放置于載玻片上，在溫暖處將石蠟融化。

五、染色

材料：切片標(biāo)本九份。采用HE（蘇木素—伊紅）染色方法，染色劑包括二甲苯六瓶，無(wú)水乙醇四瓶，95%的乙醇四瓶，85%的酒精一瓶，40℃的溫水一份，一份鹽酸和五份無(wú)水乙醇的混合試劑一瓶，已調(diào)配的伊紅染液一瓶，已調(diào)配的蘇木素染液一瓶。

步驟：（1）將玻片浸入第一瓶二甲苯中，并迅速取出；（2）浸入第二瓶二甲苯中，5分鐘后取出；（3）浸入第三瓶二甲苯中，5分鐘后取出；（4）浸入第一瓶無(wú)水乙醇中，涮洗材料，涮洗后立刻取出；（5）浸入第二瓶無(wú)水乙醇中，3分鐘后取出；（6）浸入95%的乙醇中，1分鐘后取出；（7）浸入85%乙醇中，2分鐘后取出；（8）用清水沖洗三遍；（9）浸入的蘇木素染液中，染色10分鐘；（10）取出后用清水沖洗兩遍；（11）放入鹽酸酒精混合液中，約3秒鐘后快速取出；（12）用清水涮洗一遍；（13）浸入40℃的溫水中，返藍(lán)5分鐘；（14）浸入伊紅染液中30秒；（15）取出后用清水沖洗兩遍；（16）依次放入95%的乙醇、85%的乙醇中，涮洗后馬上取出；（17）浸入無(wú)水乙醇中8分鐘；（18）取出后放入第四瓶二甲苯中涮洗一下；（19）浸入第五瓶二甲苯中5分鐘；（20）浸入第六瓶二甲苯中5分鐘。

六、封片

將染好色的切片標(biāo)本取出后晾20分鐘，蓋上蓋玻片，在蓋玻片上滴一滴中性樹脂進(jìn)行封片，封片后的材料可以永久保存。

七、觀察

將切片標(biāo)本置于OLYMPUS.BX51型號(hào)的顯微鏡下觀察，先用低倍鏡（10倍物鏡）找到目標(biāo)物象，再轉(zhuǎn)用高倍鏡（20倍物鏡、40倍物鏡）觀察，可見(jiàn)被染成深藍(lán)色的細(xì)胞核和腎單位的各組成結(jié)構(gòu)。右圖是組成腎單位的腎小體、腎小管，以及腎小囊外壁和腎小管的單層上皮細(xì)胞。

參考文獻(xiàn)：

[1]石玉秀主編.組織學(xué)與胚胎學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2008.

[2]王伯沄.病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.

（責(zé)任編輯：魏新影 章 蒙）