重組蛋白多肽藥物生物等效性研究與探討

高紅梅

摘 要： 目的：重組蛋白多肽藥物生物等效性研究的必要性、可行性和方法學的發(fā)展概況和實例探討；方法：利用生物等效性評價的方法以研究ELISA測定為例，生物等效性對于生物藥物和化學藥物同等重要，也可采用生物檢測法測定活性濃度；結(jié)果與結(jié)論：對市場較為常見的rhIL-11生物等效性比較和不同免疫分析法測定ELISA靈敏度與測定范圍比較，結(jié)果仿制藥的生物等效性靈敏度、測定范圍均符合相關(guān)標準。

關(guān)鍵詞： 生物等效性；重組蛋白或多肽；ELISA

隨著我國經(jīng)濟建設的不斷深入，醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)出現(xiàn)了新的格局態(tài)勢，新品種、新生產(chǎn)物不斷產(chǎn)生，仿制藥作為其中重要的一個產(chǎn)物，不得不引起有關(guān)部門的高度重視，因此，我國出臺了關(guān)于仿制藥品的法律規(guī)定，即《仿制藥品管理條例》其中對方只要的生物等效性、評價方法等做出了嚴格的規(guī)定。本文以研究的目的是重組蛋白多肽藥物生物等效性研究的必要性、可行性和方法學的發(fā)展概況和實例探討，利用生物等效性評價的方法以研究ELISA測定為例，生物等效性對于生物藥物和化學藥物同等重要，也可采用生物檢測法測定活性濃度，并對市場較為常見的rhIL-11生物等效性比較和不同免疫分析法測定ELISA靈敏度與測定范圍比較。

1、重組蛋白多肽藥物生物等效性發(fā)展現(xiàn)狀

FDA將重組蛋白多肽藥物生物等效性定義為：相對生物等效性、生物利用度的評價涉及到的比較一個參比品（R）與受試品（T）是否一致，決定因素在于比較仿制藥品和參比藥品、臨床實驗藥品和上市藥品、生產(chǎn)工藝或標準改變前后的各項指標。生物等效性、生物利用度密不可分但是生物等效性也會依附于某個標準（預先設定生物等效性），所以需要計算、評估、判斷生物藥物可信區(qū)間。Fathiroudsari M 等[1]研究表明：大腸桿菌生產(chǎn)的rerelease通常是由大長歌桿菌產(chǎn)生的，沒有寡糖側(cè)鏈、清除率較低，當除去糖基化和指狀結(jié)構(gòu)區(qū)后，Krigle 2和纖維蛋白的結(jié)合增強了，并且很好地加強了纖維蛋白選擇性。現(xiàn)將GI公司、深圳百泰生物藥業(yè)有限公司、上海永日藥品貿(mào)易公司、北京醫(yī)進生物技術(shù)（有限）公司的rhIL-11（血小板生成素）的生物等效性對比結(jié)果如下表1。

2、重組蛋白多肽藥物生物等效性研究方法

重組蛋白多肽類生物藥的生物等效性研究必須建立專屬性、高靈敏的測定方法，常用方法有三種：生物測定與免疫學分析法、同位素標記法和物理化學分離法。在常規(guī)研究中選用一種或幾種方法并用的分析手段，以期得到完整精確的數(shù)據(jù)。Hill D E等[2]學者研究表明，同位素標記法可以取得良好的臨床效果，但是在實際應用中多選擇生物測定與免疫學分析法。

2.1 建立專屬性高靈敏的方法學 建立可行可靠的QC（檢測質(zhì)控樣品），目的是檢測方法的有效性，主要考察指標是最低定限量、特異性試驗、線性范圍、精密度、標準曲線、樣品穩(wěn)定性試驗和準確度檢查等。

2.2 生物測定與免疫分析方法 ①酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），是最常見的測定抗原的方法，通常采用“夾心餅干”免疫技術(shù)，最終可以測得未知樣品的抗原濃度和生成標準曲線。②高靈敏度（HS）-ELISA法，靈敏度很高，容易將還原型NADP脫磷酸（底物存在）產(chǎn)生還原型NADH，而NADH可以成為輔助因子，進而組成新的酶系統(tǒng)。③化學發(fā)光ELISA法，應用“夾心餅干”技術(shù)將被測抗原特異的單抗預包被在微孔板上，含被測抗原的標準品和樣品加入孔內(nèi)，促進抗原與固化抗體結(jié)合。現(xiàn)將不同免疫分析方法測定ELISA靈敏度和測定范圍比較如表1。

3 結(jié)果與結(jié)論

目前，建立對仿制重組蛋白多肽藥物的生物等效性評價是科學研究的主要方向，仿制藥與化學藥品有很多相同之處，對于某些仿制藥除了濃度要求外還有生物等效性的要求。通過本文對市場較為常見的rhIL-11生物等效性比較和不同免疫分析法測定ELISA靈敏度與測定范圍比較，結(jié)果仿制藥的生物等效性靈敏度、測定范圍均符合相關(guān)標準。生物制品與化學藥品的的差別在于生物活性、免疫學測定方法精密度較低，化學藥品在測定時高效液相色譜法測定誤差較大，所以要達到生物等效性需要采集樣本數(shù)量更多。

參考文獻

[1] Fathiroudsari M， Akhaviantehrani A， Maghsoudi N. Comparison of Three Escherichia coli Strains in Recombinant Production of Reteplase[J]. Avicenna Journal of Medical Biotechnology， 2016， 8（10）：166-168.

[2] Hill D E， Vasdev N， Holland J P. Evaluating the accuracy of density functional theory for calculating 1 H and 13 C NMR chemical shifts in drug molecules[J]. Computational & Theoretical Chemistry， 2015， 1051：161-172.endprint