CIK治療去勢抵抗性前列腺癌的療效觀察

劉秋晨 浦金賢 祁小飛 趙曉俊

CIK治療去勢抵抗性前列腺癌的療效觀察

劉秋晨 浦金賢 祁小飛 趙曉俊

目的研究細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine-induced killer cell，CIK）對去勢抵抗性前列腺癌（castrate-resistant prostate cancer，CRPC）患者通過免疫治療后的短期臨床療效。方法選擇蘇州大學附屬第一醫院泌尿科收治的CRPC患者9例，分離外周血單個核細胞體外培養，取未貼壁細胞，經IL-1、IL-2、IFN-γ、抗CD3單抗誘導培養成CIK，經靜脈回輸給患者。在患者治療前進行血清前列腺癌特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）檢測，治療結束后4周復測血清PSA，并通過對比患者的睡眠、食欲、體力、骨痛等觀察指標，進行短期療效評價。結果CIK治療能降低CRPC患者PSA（P＜0.05），5例患者PSA出現下降，3例PSA保持穩定，1例PSA上升。對9例患者短期臨床療效評價，結果顯示3例患者PR，5例患者SD，1例患者PD；2/5患者骨痛較治療前減輕，4/9患者體力增強，3/9例患者食欲提高，5/9患者睡眠質量改善。9例CRPC患者治療的耐受性良好。1例患者出現低熱，激素治療后好轉，其余患者未有不良反應。結論CIK治療CRPC能激發患者的免疫應答，控制患者PSA水平，副作用少，有良好的短期臨床療效。

細胞因子誘導的殺傷細胞；去勢抵抗性前列腺癌；PSA

前列腺癌發病率在歐美國家所有男性腫瘤中位列第一[1]。近年來我國前列腺癌的檢出率也逐年遞增[2]。臨床分期較早的前列腺癌患者首選前列腺癌根治術，不能耐受手術或者放療的晚期患者，通常選用手術去勢或內分泌治療[3]。有一些患者，治療18～24個月后疾病進展，發展成為CRPC[4]。臨床上目前多采用多西他賽治療CRPC，該藥物可延長CRPC患者的生存期，改善患者的生活質量[5-6]。但對于不能耐受多西他賽化療或化療失敗的CRPC，治療方法有限，臨床上多選用試驗性或姑息性治療[7]。目前很多臨床或實驗中心都致力于研究腫瘤生物免疫療法。CIK是用多種細胞因子和人外周血單個核細胞，在體外進行共同培養之后獲得的一群異質細胞，其既有T淋巴細胞的抗瘤活性，又有自然殺傷細胞（NK細胞）的非MHC（主要組織相容性復合體）限制性殺瘤活性，通過這兩種方式對腫瘤細胞產生殺傷作用[8]。已有很多體外試驗證明CIK有較好的擴增性和殺瘤活性，而對正常人體細胞沒有損傷，多項研究發現CIK對前列腺癌等惡性腫瘤有良好的療效[9-12]。本研究選取了我院收治的9例CRPC患者，對其進行CIK治療，初步評價該方案的短期臨床療效和安全性，為CRPC的治療提供新的思路和依據。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

選取我院泌外尿科2013年12月—2014年12月收治的9例確診為CRPC的患者（表1），患者中位年齡82歲（61～90歲），生命體征良好，無肝腎疾病，無自身免疫性疾病，預期生存時間超過6個月，隨訪期為1個月。所有患者在治療前均簽署知情同意書，該治療方案經本院倫理委員會批準。

1.2 主要材料

內毒素檢測試劑盒（湛江安度斯生物有限公司）；淋巴細胞分離液（上海恒信化學試劑有限公司）；人重組GM-CSF、IL-1、IL-2、IFN-γ、抗CD3單抗（mAb）（R＆D公司）；AB血清（江蘇省蘇州市紅十字血站）；RPMI 1640培養基（Hyclone公司）。

1.3 CIK的體外培養

獲得患者外周血單個核細胞：對入組患者行造血動員，GMCSF75 μg，2次/天，動態監測患者的外周血細胞濃度，當淋巴細胞和單核細胞計數之和達到2×106/ml時，采集患者外周靜脈血100～150 ml，抗凝處理，Ficoll分離外周血單個核細胞并收集。

CIK的制備：用PRMI 1640培養基重懸患者外周血單個核細胞，濃度約2～3×106/ml，置于恒溫培養箱（條件：37℃、5%CO2）孵育90 min，收取未貼壁的單個核細胞，用含10% AB血清的RPMI 1640培養液重懸，細胞濃度調整至2.5×106/ml，鋪入預先包被有anti-CD3 mAb的培養瓶，添加IFN-γ（終質量濃度1 000 U/ml），置于恒溫培養箱（條件：37℃、5%CO2）孵育24 h后添加IL-2（終活性濃度250 U/ml）、IL-1α（終活性濃度10 ng/ml），繼續用含10% AB血清RPMI 1640培養液定期補液培養[11]。

1.4 CIK回輸方案

在收集前24 h對CIK進行細菌培養，并檢測細胞活力、內毒素等，確認檢測合格后，于培養后第10～14天收集CIK細胞，1 500 r/min，離心5 min，生理鹽水洗滌3次，重懸于100 ml含10%人血白蛋白的生理鹽水中，調整細胞濃度至（5.0±0.5）×108/100ml，經靜脈滴注回輸患者，每次2 h內滴注完，每個療程滴注4次。回輸CIK 后密切觀察患者24 h，注意是否出現不良反應，根據情況及時處理并記錄[13]。

1.5 療效判定

每個療程結束后隨訪1個月。于治療后1個月檢測患者PSA水平，并與治療前的PSA水平比較。并評估患者骨痛、體力、食欲睡眠等指標，綜合評價CIK治療的臨床療效及其安全性。

1.6 統計學處理

采用SPSS20.0統計學軟件處理數據，兩配對樣本的非參數wilcoxon秩和檢驗進行統計分析，結果用Z值表示，P＜0.05，差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者CIK 治療的短期臨床療效評估

通過比較患者治療前后的血清PSA水平（表2），發現該結果差異有統計學意義（P＜0.05），說明CIK治療CRPC有一定療效通過該治療治療能降低患者的PSA。9例患者中有5例患者PSA下降，3例保持穩定，1例上升。直接對比患者治療前后PSA變化程度發現，3例患者PSA下降超過30%（PR），5例患者PSA變化范圍±30%（SD），1例患者PSA上升超過30%（PD）。比較患者治療前后的一般情況（表3）評估CIK臨床療效，其中骨痛患者5例，2例較前好轉，9例患者中，4/9例患者體力改善，3/9例患者食欲改善，5/9例患者睡眠改善。

表1 CRPC患者基本信息

表2 CIK治療CRPC前后PSA指標及臨床療效評估

2.2 CIK治療的不良反應

CIK回輸后觀察24小時，其中8例患者未出現不良癥狀，1例患者輸注后2小時出現低熱，予對癥治療后緩解，隨訪1個月期間患者均未出現其他不良反應。9例患者均能耐受該治療，未出現休克、惡心嘔吐等嚴重不良反應，均未出現皮疹、紫癜等過敏反應，可見CIK治療的安全性良好，無明顯毒副作用。

3 討論

CRPC的治療目前依然是世界性難題，患者的預后通常極差[14]。Provenge于2010年在美國上市，在臨床上得以應用，為廣大前列腺癌患者帶來福音[15]。但在國內，仍缺乏有效的治療手段，很多免疫治療方法還局限于體外試驗過程中。

本研究將CIK治療從體外試驗轉向臨床應用，探究CIK對CRPC患者的短期臨床療效。通過對比治療前后患者前列腺特異性抗原PSA水平，發現CIK治療能降低CRPC患者的血清PSA（P＜0.05），5/9例患者出現PSA下降，3/9患者PSA保持穩定，1/9例患者PSA上升。對其臨床療效評估，3例達到PR，5例SD，1例PD。多數患者的一般情況在治療后獲得了不同程度的改善。本研究證明了CIK在體內能激發免疫應答，對癌細胞有殺傷作用，對緩解患者的臨床癥狀，控制PSA水平有短期的臨床療效。通過觀察患者接受CIK治療后的反應，發現患者對該治療耐受性良好，CIK安全性較好。

總之，本研究證實CIK治療去勢抵抗性前列腺癌有良好的短期臨床療效，是一種安全性好，毒副反應少的免疫治療方法。但本研究病例數量少，治療方式和觀察指標單一，隨訪時間較短，因此，還需要擴大樣本量，增加觀察治療，延長隨訪期，進一步研究CIK的長期臨床療效。

表3 CIK治療CRPC前后一般情況比較及臨床療效評估

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Efficacy of CIK in the Treatment of Castration Resistant Prostate Cancer

LIU Qiuchen PU Jinxian QI Xiaofei ZHAO Xiaojun Department of Urology,The First Hospital Affiliated to Suzhou University, Suzhou Jiangsu 215006,China

ObjectiveTo investigate the short-term clinical efficacy of cytokine-induced killer cell (CIK) on patients with castrated resistant prostate cancer (castrate-resistant prostate cancer CRPC) after immunotherapy.Methods9 cases of CRPC patients admitted to the urology department of fi rst Hospital Affiliated to Suzhou University were selected.Isolated peripheral blood mononuclear cells gamma were cultured in vitro to extract non adherent cells. IL-1, IL-2, IFN-γ, and anti CD3 monoclonal antibody were induced to be cultured into CIK and returned to the patients via vein. Before the treatment, serum prostate cancer specific antigen(prostate speci fi c antigen, PSA) was detected. After 4 weeks of treatment,the serum PSA was remeasured. By comparing the patients' sleep, appetite,physical strength, bone pain and other observation indexes, the short-term curative effect was evaluated.ResultsCIK treatment could reduce PSA (P＜ 0.05) of CRPC patients, 5 patients with PSA decreased, 3 cases of PSA remained stable, 1 case of PSA increased. The short-term clinical efficacy of 9 patients was evaluated. The results showed that 3 patients were PR,5 patients were SD, and 1 patient were PD. 2/5 patients were relieved of bone pain before treatment, increased physical strength in 4/9 patients,increased appetite in 3/9 cases, and improved sleep quality in 5/9 patients.9 patients with CRPC were well tolerated. 1 case of patients had low fever,after hormone treatment improved; the rest of the patients had no adverse reactions.ConclusionThe treatment of CRPC by CIK can stimulate the patient's immune response, control the patient's PSA level, have less side effects and have good short-term clinical efficacy.

cytokine induced killer cells; castration resistance to prostate cancer; PSA

R73

A

1674-9308（2017）30-0060-04

10.3969/j.issn.1674-9308.2017.30.035

蘇州大學附屬第一醫院泌尿外科，江蘇 蘇州 215006