盆舒顆粒對模型大鼠盆腔粘連形成及病理形態學的影響*

俞慧慧 趙宏利

1 浙江省慈溪市中醫醫院 浙江 慈溪 315300

2 浙江省杭州市中醫院 杭州 310007

盆舒顆粒對模型大鼠盆腔粘連形成及病理形態學的影響*

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1 浙江省慈溪市中醫醫院 浙江 慈溪 315300

2 浙江省杭州市中醫院 杭州 310007

目的：觀察中藥復方盆舒顆粒對模型大鼠盆腔粘連形成及病理形態學的影響，以及經轉化生長因子-β1（TGF-β1）抗體干預下產生的影響。方法：選用成年雌性SD大鼠50只，隨機分為空白對照組、模型對照組、中藥治療組、抗體干預組、抗體干預+中藥治療組。采用機械損傷復制盆腔粘連大鼠模型，灌胃給藥14天。開腹觀察大鼠子宮、輸卵管標本的大體情況，比較各組盆腔粘連Philips評分結果，并進行病理檢測。結果：治療3組與模型組比較，盆腔炎性病變及粘連程度輕，Philips評分顯著降低（P＜0.01）。結論：盆舒顆粒及TGF-β1抗體能有效預防和減少模型大鼠盆腔組織粘連，且聯合應用效果優于單獨應用。

盆腔粘連 盆舒顆粒 大鼠 病理形態學

盆腔粘連為婦科常見病、多發病，其臨床表現以性生活不適、慢性盆腔疼痛為主，常可伴有月經失調、不孕等病癥，嚴重影響患者的生活質量。本研究根據盆腔粘連的臨床表現，研制以通經養血、散結除濕治法的中藥復方盆舒顆粒。在臨床取得確切療效的基礎上進行動物實驗研究，進一步驗證盆舒顆粒防治粘連的療效，為盆舒顆粒的作用機制研究提供實驗室依據。

1 實驗材料

1.1 實驗動物：SD大鼠，雌性，50只，體重230±20g，由浙江省實驗動物中心提供，動物實驗條件合格證號：SYXK(浙)2008-0113。

1.2 主要藥物與試劑：盆舒顆粒（由當歸、炒白芍、炒白術、川芎、澤瀉、茯苓、延胡索、莪術、王不留行、川牛膝、紅藤組成,配伍比例為2：6：2：1.2：2：2：2：2：2：2：2：3），中藥顆粒劑，由杭州市中醫院提供。兔抗鼠轉化生長因子-β1（TGF-β1）抗體購自北京博奧森生物技術有限公司。

2 實驗方法

2.1 模型制備：將50只大鼠隨機分為5組，每組10只，分別為空白對照、模型組、中藥治療組、TGF-β1抗體干預組、TGF-β1抗體干預+中藥治療組。用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠(30mg/kg)，常規消毒后取下腹正中切口約2cm，開腹暴露并固定子宮，用手術刀輕刮漿膜表面，長約2cm，共12次，至漿膜表面明顯充血，雙側子宮用1號手術線輕扎，使并攏，逐層關腹，消毒術區。需TGF-β1抗體干預的兩組實驗大鼠在關腹前將TGF-β1抗體注入盆腔，關腹[1-2]。

2.2 給藥方案：造模后開始灌胃給藥1ml/100g，1次/d，共14天。中藥治療組、TGF-β1抗體干預+中藥治療組：每日按體表面積給予等效計量的盆舒顆粒；空白對照組、模型對照組、抗體干預下對照組給予等容量生理鹽水。

2.3 指標測定：分述如下。

2.3.1 大體觀察：末次用藥24h后如前法麻醉開腹，觀察記錄子宮、輸卵管標本的外觀、顏色、粘連情況。

2.3.2 粘連分級：參照Philips分級標準[3]對粘連程度進行分級。0級：完全無粘連，漿膜面光滑；Ⅰ級：盆腔臟器與周圍組織少量粘連，疏松易分，無滲血；Ⅱ級：盆腔臟器與周圍組織輕到中度粘連，分離時局部有滲血；Ⅲ級：盆腔臟器與周圍組織廣泛粘連，較難分離。

2.3.3 病理檢測：摘取雙側子宮置于4%中性甲醛中固定、常規切片、HE染色、光鏡下觀察子宮病理形態變化。

2.4 統計學分析：所有數據采用SPSS 17.0軟件進行統計學處理。等級變量用秩和檢驗。以α=0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 大體觀察：抗體干預組及中藥治療組各1只大鼠因術后灌胃不當死亡予以剔除。空白對照組大鼠子宮形態大小正常，與周圍組織無粘連；模型組子宮充血明顯，質硬腫脹，部分模型子宮表面水腫，與周圍組織粘連廣泛；中藥治療組大鼠子宮輕度充血，部分模型子宮表面水腫，與周圍組織粘連較疏松；抗體干預組大鼠子宮輕度充血，部分模型子宮表面水腫，個別與周圍組織粘連廣泛；抗體干預+中藥治療組大鼠子宮輕度充血，部分有水腫，與周圍組織粘連較疏松。觀察結果顯示，盆舒顆粒及TGF-β1抗體均能大鼠使模型子宮充血、腫脹、組織粘連程度有不同程度的減輕，粘連評分降低，兩者聯合應用與盆舒顆粒單獨應用無明顯差異。

3.2 大鼠盆腔粘連Philips評分結果：見表1。實驗結果經秩和檢驗表明，模型組及3個治療組盆腔粘連Philips評分結果與空白對照組比較均有極顯著性差異（P＜0.01）；中藥治療組、抗體干預組與模型組比較，均具有顯著性差異（P＜0.05）；抗體干預+中藥治療組與模型組比較有極顯著性差異（P＜0.01）；抗體干預+中藥治療組與抗體干預組比較差異具有顯著性（P＜0.05）；3個治療組之間比較均無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各實驗組大鼠盆腔粘連Philips評分結果

3.3 光鏡下病理形態觀察：空白對照組子宮表面單層上皮組織層完整，無炎細胞浸潤。與空白對照組比較，模型組子宮表面漿膜層厚度增加，伴大量炎癥細胞浸潤，部分上皮細胞水腫變性、壞死脫落。周圍結締組織增生、毛細血管擴張，有肉芽腫形成，伴有較多纖維組織增生及纖維粘連帶形成。與模型組對比，3個治療組子宮漿膜層厚度薄，伴中等量炎癥細胞浸潤，周圍結締組織中可見散在肉芽腫，伴有多少不等的纖維組織增生及纖維粘連帶形成。中藥治療組與抗體干預組比較，漿膜層炎性改變及纖維組織增生無明顯差異，抗體干預+中藥治療組較單獨治療組炎癥細胞浸潤及肉芽腫減少，伴少量纖維組織增生及纖維粘連帶。見圖1。

圖1 各組大鼠子宮病理形態學表現（HE，×2）

病理形態觀察結果顯示，盆舒顆粒及TGF-β1抗體均能減輕模型大鼠子宮漿膜層上皮細胞水腫變性、壞死脫落，炎性細胞浸潤，毛細血管擴張，纖維組織增生及粘連帶形成等病變程度，但尚不能恢復至正常形態。兩者聯合應用效果優于單獨應用。

4 討論

現代醫學認為，盆腔粘連多由手術創傷、感染、子宮內膜異位癥、異物反應等引起，其發病機制尚不完全清楚，目前認為有多種細胞因子參與調控，其中多功能細胞因子TGF-β1起著較關鍵的作用[4-5]。

筆者認為，本病發病或為正氣本虛，易感邪毒，傷及沖任胞宮，氣血運行失暢；或為經行產后攝生不潔或手術創傷，風寒濕熱、蟲毒之邪乘虛內侵，傷及沖任督帶，累及胞宮胞絡。臨床上以濕瘀互結為多見，病勢纏綿難解，久之耗傷氣血，終致虛實錯雜。本病屬本虛標實之證，病機要點不離虛、濕、瘀三端。因此，課題組確立通經養血，散結除濕的治療原則，創立了盆舒顆粒。本方為當歸芍藥散加味，其中白芍、當歸、川芎為血分藥，有養血和血，宣滯止痛之效；茯苓、白術、澤瀉為氣分藥，具有健脾運濕，利水散結的功用；延胡索、莪術活血散結，行氣止痛；王不留行、川牛膝活血通絡，下瘀通經；紅藤清熱利濕，敗毒散瘀。諸藥合用，氣血同治，攻補兼施，扶正不斂邪，祛邪不傷正。

本研究結果提示，盆舒顆粒及TGF-β1抗體對模型大鼠盆腔組織形態均具有保護作用，能有效預防和減少粘連形成，且聯合應用效果優于單獨應用，具體的分子作用機制還有待進一步研究。

[1]Leach RE,Burns JW,Dawe EJ,et al.Reduction of Postsurgical adhesion formation in the rabbit uterine horn model with use of hyaluronate/carboxymethylcellulose gel[J].Fetil Steril,1998,69（3）：415-417.

[2]Yaron Y,Diamond MP,Leach RE,et al.Lysyl oxidase Transcripts in peritoneal adhesions and incisional scars[J].J Reprod Med,1999,44（3）：253-256.

[3]曾莉，陳衛平，趙鳳鳴，等.活血通腑方對實驗性腹腔粘連TGF-β mRNA表達的影響[J].中醫藥學刊,2004,22(12)：2236-2238.

[4]Chegini N.The role of growth factors in peritoneal healing：transforming growth factor β(TGF-β)[J].Eur J Surg,1997,164（577）：17.

[5]Rhett JM,Ghatnekar GS,Palatinus JA,et al.Novel therapies for scar reduction and regenerative healing of skin wounds[J].Trends Biotechnol,2008,26(4)：173-180.

杭州市科技發展計劃項目盆舒顆粒對TGF-β1多克隆抗體干預下大鼠盆腔粘連的影響，編號：2011KJJ19；杭州市科技發展計劃項目盆舒顆粒對子宮粘連模型大鼠子宮內膜TGF-β1/SMAD3的影響，編號：20130733Q19

# 通訊作者：趙宏利，E-mail：z6hl@163.com

2017-08-07