玫瑰樹生物堿化學成分研究

李國明+易平

摘 要 玫瑰樹生物堿是夾竹桃科蘿芙木亞科玫瑰樹屬植物玫瑰樹中特有的一類單萜吲哚生物堿及二聚體。本論文旨在對玫瑰屬植物中具備抗腫瘤和抗炎等多種生理活性的單萜吲哚類生物堿化合物進行分析研究和結構鑒定。玫瑰樹莖枝經甲醇提取的浸膏，依次采用不同極性的有機溶劑通過層析硅膠柱、RP-18反相柱、正相硅膠柱進行分離凈化獲得生物堿類化合物，再經高效液相色譜進行分離純化得到玫瑰樹單組分生物堿化合物，通過核磁共振儀獲得每個組分的1H-NMR和13C-NMR數據，結合其它波譜分析技術，綜合解析化合物的波譜數據，鑒定了其中兩個生物堿成分的化學結構，兩個化合物均為首次從該類玫瑰樹中分離得到，為進一步解析鑒定其它生物堿成分提供了指導依據。

關鍵詞 夾竹桃科 ；蘿芙木亞科 ；玫瑰樹 ；單萜吲哚生物堿 ；波譜分析技術

中圖分類號 R284.1 文獻標識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2017.11.018

Study on Chemical Constituents of Alkaloids of Ochrosia borbonica

LI Guoming YI Ping

（Institute for Tropical Agriculture Scientific Research of De Hong， Yunnan Province， Ruili 678600）

Abstract Alkaloids of the Ochrosia borbonica were a class of special Monoterpenoid indole alkaloids and Dimer，which Included in the plant of Rose that Attributable to the subfamily of the Rauwolfia. This paper aimed to analyze the structure and identification of monoterpene indole alkaloid compounds with many biological activities ， such as anti-tumor and anti-inflammatory， in the rose plants. The extractum extracted from the stem of the rose tree by methanol，organic solvents with different polarities were used successively by chromatography silica gel column、RP-18 reversed phase column and Positive phase silica gel column to isolate and purify the alkaloid compounds， the mono-component alkaloids of rose tree were separated and purified by high performance liquid chromatography， the 1H-NMR and 13C-NMR data of each component were obtained by nuclear magnetic analysis， the Spectral data of compounds to identify the chemical structures of two alkaloids and the two compounds were isolated from this Ochrosia borbonica for the first time，which provided the guidance for further identification of other alkaloids.

Keywords Apocynaceae ； subfamily of the Rauwolfia ； Ochrosia borbonica ； Monoterpenoid indole alkaloids ； Spectrum analysis technique

夾竹桃科（Apocynaceae）蘿芙木亞科玫瑰樹屬植物玫瑰樹（Ochrosia borbonica Gmelin），全世界約有39種，分布于馬達加斯加到大洋洲的波利尼西亞[1]，中國南方引入栽培玫瑰樹（Ochrosia borbonica Gmelin）和古城玫瑰樹（O. eliptica Labill）兩種。樹形、花朵美觀，常作庭園綠化。玫瑰樹屬植物多數為民間藥用植物，其枝葉提取液在抗腫瘤方面療效顯著[2]。

單萜吲哚生物堿是一類結構變化多樣的天然產物，它是由色氨（tryptamine）和裂環馬錢子甙（secologanin）縮合產生的異胡豆甙（strictosidine）經過一系列骨架變化（C-C、C-N、C-O鍵的形成和/或斷裂）衍生而來的[3]。到目前為止，已有40余個骨架、2 000余個單萜吲哚生物堿被研究人員發現， 約占整個生物堿的1/4[4]。骨架的重排、延長、降解、聚合是單萜吲哚生物堿富于變化的基本條件，往往產生許多結構新奇的化合物如奎寧、alstoscholarine、vallesamine及長春堿類[5]。

在天然藥物化學的研究歷史上，單萜吲哚生物堿（monoterpenoid indole alkaloids）是植物源天然產物成藥最高的類群之一，如抗癌藥物長春堿類[5-6]和喜樹堿（camptothecin）[7]、治療偏癱的士的寧[8]（strychnine）、抗瘧藥奎寧[9]（quinine）、抗高血壓的利血平[10]（reserpine）、治療陽痿的育亨賓[11]（yohimbine）等，臨床應用的有數十個。另外，單萜吲哚生物堿活性機制多樣，就抗腫瘤而言，如喜樹堿及其衍生物是作用于DNA拓撲異構酶I（DNA topoisomerase I）[7]；而長春堿類是作用于腫瘤細胞微管，還可以選擇性地抑制和調控過度激活表達癌癥基因、抑制腫瘤細胞血管的生長[12]。但是，這兩類抗藥物具有明顯的不足，長春堿類在體內分布廣、終末半衰期長，外周神經毒性，胃腸道副作用、骨髓抑制[13]；喜樹堿主要是對泌尿系統和消化系統產生毒性[14]。然而，并沒有構效關系研究表明這是單萜吲哚生物堿自身不可逾越的問題，因此在單萜吲哚生物堿中尋找抗腫瘤新藥候選分子是天然藥物研究領域的一個重要課題。

通過文獻查詢，發現國產夾竹桃科植物中11個屬植物含有單萜吲哚生物堿，都分布在蘿芙木亞科：山橙屬（Melodinus）[15]、雞骨常山屬（Alstonia）[16]、狗牙花屬（Tabernaemontana）[17]、仔欖樹屬（Hunteria）[18]、甘草屬（Amsonia）[19]、蘿芙木屬（Rauvolfia）[20]、蕊木屬（Kopsita）[21]以及栽培玫瑰樹屬（Ochrosia）、馬鈴果屬（Voacanga）[22]、長春花屬（Catharanthus）、蔓長春花屬（Vinca）[23]。該亞科植物單萜吲哚生物堿類型多，二聚體吲哚生物堿在該亞科尤為特征。蘿芙木亞科中蘿芙木屬、蕊木屬、長春花屬及蔓長春花屬植物化學成分及活性研究較深入，馬鈴果屬植物成分研究很多，我國資源較少。狗牙花屬植物在我國5種，主要分布在西南地區。文獻報道狗牙花屬約有11個類型60余個生物堿聚合體，而該屬報道過的單萜吲哚生物堿單體就有超過23個類型，新的多聚體的存在是可能的，如最近從該屬植物中發現一個四聚體生物堿[17]。而從國產狗牙花屬植物中共報道過單萜吲哚生物堿70個，其中的8個吲哚生物堿二聚體都是同一個類型，這和世界范圍內的全屬結構多樣性研究結果存在差別，因此有再研究的必要[17]。仔欖樹屬和水甘草在我國僅一個種，雖然這2個屬國內有學者報道了一些生物堿研究，但是分離的化合物數量較少，有必要繼續研究。我國引種了3種玫瑰樹屬植物，以玫瑰樹（O.borbonica）資源量較大，該屬特征成分也是吲哚生物堿及二聚體[2]。玫瑰樹的成分研究報道主要是在20世紀60年代，最近法國科學家從同屬的莫氏玫瑰樹（O. moorei）中發現玫瑰樹堿（ellipticine） 能作用于蛋白激酶CK2， 這是吲哚生物堿作用機制研究取得的重要進展[24]。

法國國家科研中心的研究人員日前通過實驗發現，“玫瑰樹堿”的衍生物對多種癌癥具有特別療效，這些衍生物對蛋白激酶CK2具有特別的功效。蛋白激酶在乳腺癌和前列腺癌等多種癌癥的擴散中起著關鍵作用，如能抑制它的活性，治療癌癥事半功倍。研究人員隨后在試管內和實驗鼠身上進行了測試，都取得成功?！懊倒鍢鋲A”的這些衍生物能有效抑制腫瘤擴散，同時它們的目標性很強，產生的副作用比較小。這項研究成果將為癌癥治療開辟新途徑[24]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

Bruker 600 MHz核磁共振，API Qstar Pulsar I 質譜儀，Waters 600 高壓液相色譜儀，Waters 2996 檢測器和Waters 部分收集器，sunfineC18分析和制備柱（150×柱層析用硅膠）（60～80目，100～200目，200～300目，300～400目）， 硅膠H（10～40 μm）（青島海洋化工品廠產品），薄層層析硅膠（青島海洋化工品廠產品），Sephadex LH-20（40～70 μm）（Pharmacia公司產品）， RP-18反相柱（Pharmacia公司產品），氨基硅膠（20～45 μm），青島海洋化工廠硅膠G（200～300 目），薄層層析板，Buchi反相柱，三用紫外分析儀（uv-iii），EYELAN-1100旋轉蒸發儀。

1.1.2 試劑

甲醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯（均為為工業級）、氯仿、洗液、DMSO、三乙胺、濃Hcl等。

薄層層析通過碘化鉍鉀顯色觀察其斑點。生物堿顯色劑為碘化鉍鉀（Dragendorff）試劑，其配制方法如下：

溶液Ⅰ：次硝酸鉍0.85g溶于冰醋酸10mL和水40 mL中；

溶液Ⅱ：碘化鉀8 g溶于20 mL水中；

儲備液：溶液Ⅰ和溶液Ⅱ等量混合（置于棕色瓶中可長期保存）；

顯色劑：儲備液1 mL與冰醋酸2 mL和水10 mL混合，用前配制。

1.2 方法

1.2.1 生物堿提取分離與結構鑒定

1.2.1.1 生物總堿的富集

9 kg干燥的玫瑰樹樣品枝葉（采集于廣州華南植物園，由葉華谷教授采集鑒定）粉碎，以工業CH3OH冷浸浸提3次，每次48 h，合并提取液經旋轉蒸發儀減壓濃縮回收CH3OH得初提濃縮浸膏。將濃縮浸膏加水稀釋（3 L），用稀鹽酸水溶液調節pH=2～3，于分液漏斗中用EtOAc萃取3次，經旋轉蒸發儀減壓濃縮回收EtOAc得非堿部分；酸水層加稀氨水調節pH=8～9，加入EtOAc萃取3次，經旋轉蒸發儀減壓濃縮回收EtOAc至無溶劑時得到總堿98 g。

1.2.1.2 生物總堿的粗分

按質量分數總堿∶硅膠=1∶1，稱取100 g硅膠（200～300目）稀釋總堿浸膏，將其充分拌樣均勻。量取2.5 L氯仿及稱好的1 kg柱層析硅膠均勻加入到分離柱中，再量取2.5 L氯仿采用多次加入的方式依次注入柱中至柱層析硅膠分散均勻靜止沉降充分完成裝柱。將拌好的樣品均勻加入到分離柱中，并用柱中濾出的氯仿將柱壁上的樣粉洗凈，使其沉降均勻，完成上樣。采用系列不同極性配比的氯仿—丙酮混合溶劑按極性由小至大的先后順序[洗脫劑極性變化為純氯仿→氯仿∶（氯仿+丙酮）=9∶1，6∶1，4∶1，2∶1→氯仿∶（氯仿+丙酮）=1∶1]依次沖洗上好樣的分離柱，洗脫至TLC檢測無試樣為止即完成分離柱洗脫，從而完成總堿部分用正相硅膠的劃段粗分。并將按極性順序洗脫下的含樣溶液每瓶1 000 mL作為一個樣，將其溶劑濃縮盡后采用少量丙酮等適當溶劑依次溶解，并按順序編號（1-97）轉移至試樣瓶中。用TLC及合適的展開劑（氯仿∶氯仿-丙酮為8∶1、5∶1、3∶1）檢測發現1-5號可以合并，6-10、11-20、21-23、24-29、30-36、37-40、41-44、45-48、49-59、60-92、93-97可以合并，從而得到總堿的粗分樣品。

1.2.1.3 生物總堿的細分

Buchi中壓反相硅膠分離柱細分：

（1）將序號為1-5號的10 g濃縮樣品用15 g反相（RP-18）（日本富士公司）硅膠拌樣，待樣品干燥后裝柱。配制70%及90%的甲醇水點反相板展樣后，確定用70%的甲醇水平衡反相柱，再分別用70%、77%、85%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中3至17為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。TLC檢測發現：洗脫液3-5均有三個共同點可以合并；6-7有一個共同點；11-14可以合并；15-17為洗出液檢測沒有明顯的生物堿存在。

（2）將序號為5-10號的22 g濃縮樣品用30 g反相硅膠（RP-18）拌樣，待樣品干燥后裝柱。以70%及90%的甲醇水點反相板展樣后，確定用70%的甲醇水平衡反相柱，再分別用70%、75%、85%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中3至17為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。TLC檢測發現：洗脫液8-11均有一個共同點可以合并；11-14可以合并；15-17為洗出液檢測沒有明顯的生物堿存在。

（3）將序號為11-20號的10 g濃縮樣品用20 g反相硅膠（RP-18）拌樣，待樣品干燥后裝柱。以70%及90%的甲醇水點反相板后，確定用70%的甲醇水平衡反相柱，再分別用70%、80%、90%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中2至13為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。TLC檢測發現：洗脫液7-9可以合并；11-13沒有明顯的生物堿存在，卻有熊果酸存在。

（4）將序號為21-24號的5g濃縮樣品用10g反相硅膠（RP-18）拌樣，待樣品干燥后裝柱。以70%及90%的甲醇水點反相板后，確定用70%的甲醇水平衡反相柱，再分別用70%、75%、85%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中3至17為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。TLC檢測發現：洗脫液5-10可以合并，濃縮液為Ⅳ-1；1-4、11-16可以合并，沒有明顯的生物堿存在。

（5）將序號為25-40號的15 g濃縮樣品用35 g反相硅膠（RP-18）拌樣，待樣品干燥后裝柱。分別用55%、65%、80%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中1至15為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。TLC檢測發現：洗脫液1-2、8可以合并，沒有明顯的生物堿存在； 10-15可以合并。

（6）將序號為40-59號的15 g濃縮樣品用35 g反相硅膠（RP-18）拌樣，待樣品干燥后裝柱。分別用55%、65%、80%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中1至15為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。TLC檢測發現幾乎不可以合并，依次采用高效液相色譜進行分析分離。

（7）將序號為Ⅳ-9號的濃縮樣品用反相硅膠（RP-18）拌樣，待樣品干燥后裝柱。分別用35%、45%、50%的甲醇水以及甲醇、沖洗液依次沖洗樣品，保留出峰后的流出液（其中1至20為出峰后的流出液），按順序濃縮樣品并回收甲醇水。

TLC檢測發現可以合并，濃縮液編號為Ⅳ-9-1，Ⅳ-9-2。

1.2.2 正相硅膠分離柱細分

①對編號為I-3號樣品，根據樣品量稱取1 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚：丙酮（3∶1、9∶1、12∶1）以及石油醚：丙酮為12∶1的流動相沖洗樣品（1-24）。TLC檢測發現：洗脫液1-4未發現生物堿，進行合并；5-19 可以合并，其濃縮液編號為Ⅰ-3-1；19-24檢測沒有明顯的生物堿存在。

② 對編號為Ⅰ-4號樣品，根據樣品量稱取1g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（3∶1、9∶1、12∶1）以及石油醚∶丙酮為10∶1的流動相沖洗樣品（1-24）。TLC檢測發現：洗脫液3-5可以合并，其濃縮液編號為Ⅰ-4-1；6-11 可以合并，其濃縮液編號為Ⅰ-4-2；12-16檢測沒有明顯的生物堿存在；17-23可以合并，其濃縮液編號為Ⅰ-4-3；23-30檢測沒有明顯的生物堿存在。

③ 對編號為Ⅲ-6號樣品，根據樣品量稱取2 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（3∶1、9∶1、12∶1）以及石油醚∶丙酮為10∶1的流動相沖洗樣品（1-40），其余為丙酮沖洗液。TLC檢測發現：洗脫液1-7可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-6-1；8-40可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-6-2；丙酮沖洗液，濃縮液編號為Ⅲ-6-3。

④ 對編號為Ⅲ-4號樣品，根據樣品量稱取1 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（3∶1、9∶1、12∶1）以及石油醚∶丙酮為10∶1的流動相沖洗樣品（1-27），其余為丙酮沖洗液。TLC檢測發現：洗脫液1-5可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-4-1；6-8可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-4-2；9-10可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-4-3；11-27可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-4-4；丙酮沖洗液濃縮液沒有明顯的生物堿存在。

⑤ 對編號為Ⅱ-3號樣品，根據樣品量稱取1g正相硅膠拌樣，配制極性配比為石油醚∶乙酸乙酯為4∶1的流動相沖洗樣品第一個點（1-28）。TLC檢測發現：洗脫液10-14可以合并，濃縮液編號為Ⅱ-3-1；1-9、14-28檢測沒有明顯的生物堿存在。配制極性配比為母液（石油醚∶丙酮=10∶1）∶乙酸乙酯為9∶1的流動相沖洗樣品第二個點（1-30）。TLC檢測發現：洗脫液1-17、27-28合并，沒有明顯的生物堿存在；18-26可以合并，濃縮液編號為Ⅱ-3-2。

⑥ 對編號為Ⅲ-4號樣品，根據樣品量稱取1 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（9∶1、12∶1）為流動相沖洗樣品（1-40），之后用氯仿-丙酮沖洗。TLC檢測發現：洗脫液1-15可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-4-1；15-34可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-4-2；氯仿-丙酮沖洗液，濃縮液編號為Ⅲ-4-3。

⑦ 對編號為Ⅳ-8號樣品，根據樣品量稱取1 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（6∶1、8∶1、10∶1）為流動相沖洗樣品（1-30）。TLC檢測發現：洗脫液1-15可以合并，濃縮液編號為Ⅳ-8-1；15-34可以合并，濃縮液編號為Ⅳ-8-2。

⑧ 對編號為Ⅳ-11號樣品，根據樣品量稱取3 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（2∶1、5∶1、8∶1、9∶1）為流動相沖洗樣品（1-18）。TLC檢測發現：洗脫液1-3可以合并，濃縮液編號為Ⅳ-11-1；4-18可以合并，濃縮液編號為Ⅳ-11-2。

⑨ 對編號為Ⅲ-1號樣品，根據樣品量稱取2 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（3∶1、6∶1、9∶1）為流動相沖洗樣品（1-22）。TLC檢測發現：洗脫液1-13可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-1-1；其余不含樣品。

⑩ 對編號為Ⅲ-6號樣品，根據樣品量稱取2 g正相硅膠拌樣，配制不同極性配比的石油醚∶丙酮（2∶1、3∶1、5∶1、8∶1）為流動相沖洗樣品（1-22）。TLC檢測發現：洗脫液1-13可以合并，濃縮液編號為Ⅲ-6-1；其余不分別合并的為Ⅲ-6-2，Ⅲ-6-3，Ⅲ-6-4，Ⅲ-6-4，Ⅲ-6-5。

1.2.3 生物堿單體的波譜測定及結構鑒定

選取編號為Ⅲ-6-3的樣品，將其用反相硅膠拌樣后，采用濕法裝柱法上樣到Rp-18中壓反相硅膠分離柱中，以70%甲醇水平衡后，依次用70%，75%，85%的甲醇水洗脫，洗脫液經TLC檢測合并后，濃縮液再分別拌樣上樣到正相分離柱中，采用極性配比為石油醚∶丙酮（2∶1、3∶1）的洗脫劑沖洗樣品，得兩份樣品Ⅲ-6-3-1和Ⅲ-6-3-2。用高效液相色譜對此兩份樣品進行快速精細分離，得到兩個純的化合物，在此過程中，和已有的分離數據庫對照（包括保留時間，紫外吸收），有效的實現去重復性，提高分離效率。對這兩個純化合物進行1D NMR（1H， 13C）、2D NMR（HSQC、HMBC、1H-1H COSY、ROESY、TOCSY）、MS、IR、UV、CD及X-ray等波譜數據測定，結合文獻綜合解析確定這兩個化合物的結構。

主要實驗流程如圖1所示。

2 結果與分析

本論文對采集所得的玫瑰樹莖桿部位進行了生物堿化學成分研究，通過提取分離得到了5個純的生物堿化合物。通過波譜數據解析確定了其中2個生物堿的化學結構，并且所得2個化合物的骨架結構（圖2）類型均為單萜吲哚類生物堿。

2.1 生物堿波譜數據解析

化合物（1）：該化合物為白色粉末，對碘化鉍鉀顯色試劑呈陽性反應，表明其為生物堿。由其13C NMR譜數據表明該化合物有18個C原子信號，具體歸屬（表1）為：其中含有一個CH3（δ=15.4，q）；5個CH2，其中4個為-CH2-（δ=30.5，δ=46.2，δ=54.1，δ=55.1），1個為=CH2（δ=115.0）；6個叔C原子，其中4個為含=CH-（δ=111.5，δ=119.2，δ=119.6，δ=123.3）的叔C原子；5個含雙鍵的季C原子和1個與電負性較大的雜原子相連的季C原子，結合質譜數據分析確定其分子式為C18H20N2O，不飽和度U=10。由1H NMR譜數據可初步得知：δ=7.39（1H， d， J=8.0 Hz），δ=7.32（1H， d， J = 8.0 Hz），δ=7.11 （1H， t， J = 8.0 Hz）和δ=6.97 （1H， t， J = 8.0 Hz）為苯環上相互偶合的4個= CH- 吸收峰；δ=5.54（1H each， s）和δ=5.24 （1H each， s）可能為含有環外雙鍵= CH2中的2個H吸收峰；δ=4.35（1H， d， J= 16.5 Hz）和δ=4.26（1H， d， J=16.5 Hz） 可能為與雜原子N相連且無其它偶合的-CH2-中的2個H的相互偶合吸收峰；δ=3.38 （2H， m）和δ=2.31（1H each， m）及δ=1.95（1H each， m）可能為具有偶合關系的-CH2--CH2-結構中4個H吸收峰；δ=3.20 （1H each， d， J= 15.0Hz）和δ=2.65（1H each， d， J= 15.0 Hz）可能為處于孤立體系的- CH2-中2個H吸收峰；δ=2.98 （1H， m）可能為與其它C有偶合的叔C原子中1個H吸收峰；δ=2.61（1H， q，J=5.5 Hz）和δ=1.02（3H， d， J=5.5 Hz）可能為叔C原子中的CH與1個-CH3的相互偶合吸收峰；δ=9.93（1H，s）可能為與N原子相連的1個H吸收峰。綜合以上分析并與文獻對比，1H-NMR和13C-NMR數據與文獻[6][16-17]報道數據結構對比，確定該化合物結構式如圖2所示。

化合物（2）：該化合物為白色粉末，對碘化鉍鉀顯色試劑呈陽性反應，表明其為生物堿。由其13C NMR譜數據結合質譜數據分析確定其分子式為C18H22N2O，不飽和度U=9，至此可確知該化合物與化合物1具有相似的骨架結構。對于其1H NMR數據（表2）：δ=10.65（1H， s） 可能為與N原子相連的1個H吸收峰；δ=7.31 （1H， d， J=8.0 Hz），δ=7.24 （1H， d， J=8.0 Hz），δ=7.06 （1H， t， J=8.0 Hz）和δ=6.90 （1H， t， J=8.0 Hz） 為苯環上相互偶合4個= CH-吸收峰；δ=5.58（1H each， s）和δ=5.28（1H each， s） 可能為含有環外雙鍵=CH2中的2個H吸收峰；δ=5.19（1H， q， J=6.4Hz）和δ=1.43 （3H， t， J=6.4 Hz） 可能為叔C原子中的CH與1個-CH3的相互偶合吸收峰；δ=4.35 （1H， d， J=16.5 Hz）和δ=4.07（1H， d， J=16.5 Hz）可能為與雜原子N相連且無其它偶合的-CH2-中2個H的相互偶合吸收峰。綜合以上分析并與文獻對比，1H-NMR和13C-NMR數據與文獻[6][16-17]報道數據結構對比，確定該化合物結構式如2圖所示。

2.2 生物堿結構解析

在對玫瑰樹（O. borbonica）生物堿成分進行提取分離的實驗研究中，可以發現選擇合適處理方法來富集總堿以去除非堿成分對目標化合物分離提純的影響往往能起到事半功倍的效果，實驗中主要采用酸堿處理法。單萜吲哚生物堿不同于其它類型生物堿，常用的無機酸、堿處理可能導致這類生物堿的結構性質變化，因此要避免使用強酸、強堿。而且分離過程中，應避免少用硅膠等正相分離材料，多用反相硅膠分離，以減少樣品因分離材料的不可逆吸附而造成的損失。單萜吲哚生物堿都具有共軛體系（紫外吸收），紫外吸收為快速分離提供了方便。另外，紫外圖譜上，二聚體和單體也是有區別的，除對稱的聚合體，多聚體通常出現多個吸收峰或寬的吸收峰，這有助于初期識別。吲哚生物堿的還原、重排等化學變化會引起不同的紫外吸收，總結紫外圖譜的特征吸收峰對化合物早期結構類型的歸屬很有幫助，如298和330 nm 往往是白堅木類及其它和N1共軛的不飽和酮（酯）化合物[24]。

分析鑒定每個結構類型化合物的核磁共振NMR圖譜特點和層析特征，并將質譜及生源關系結合起來綜合進行結構鑒定。單萜吲哚生物堿的結構類型繁多，因此結構解析有一定的難度，分析每個結構類型的核磁NMR特點有助于對未知化合物的快速鑒定。如13C NMR圖譜高場中的季碳數量可以初步區分白堅木堿型（2或3個）、士的寧類（1或2個）、依博加類（1個）、柯南因和育亨賓類（0個）。甲酯基和亞甲基（C-17）常降解，但在白堅木堿類和依博加類，C-17作為骨架碳往往存在；N氧化的生物堿極性會顯著的增加，同時相鄰的碳化學位移向低場位移。骨架重排是這類化合物富于變化的重要原因，因此結合生源關系對骨架推理非常重要，同時對絕對構型的鑒定也很有幫助。部分化合物的13C NMR圖譜上個別碳信號缺失，但是單萜吲哚生物堿在FAB和ESI等電離方式下分子離子峰很容易識別，可以由此確定分子式；對多聚體（如四聚體）MS上會出現m/2z離子峰是值得關注的?？傊枰C合各種光譜、分離等信息進行結構鑒定，并從實踐中積累結構鑒定的豐富經驗[4]。

3 討論

單萜吲哚生物堿是成藥系數比較高的一類天然產物，目前已有數十個化合物應用于臨床，特別是長春堿、喜樹堿兩個系列抗癌藥物具有明確的作用機制及靶點，為從新穎吲哚生物堿中發現抗腫瘤先導化合物提供了思路[24]。玫瑰屬植物中具備抗腫瘤和抗炎等多種生理活性的生物堿類化合物較之夾竹桃科其它屬植物中的生物堿研究相對較少，可待研究的潛力較大，從中提取分離得到具有更多生理活性化合物的可能性很大。因此，相信隨著對該屬植物中不同種及亞種植物的深入研究，必定會得到許多具有特殊生理活性且兼具藥用價值的生物堿類化合物。本實驗在階段性結束后，已經從該類植物中分離提取的了許多生物堿類化合物，雖然部分化合物的結構有待進一步的解析鑒定，但相信所得結果必定會如我們實驗伊始所預期的那樣結果頗豐，從從玫瑰樹的果實中的提取分離實驗亦必會得到許多生物堿，發現新的骨架結構的生物堿的概率也是很大的，對此我們滿懷期待。

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