尿液巨細胞病毒核酸檢測結合全血細胞計數在小兒巨細胞病毒感染診斷中的應用

黃崢 姜新華 吳小明

尿液巨細胞病毒核酸檢測結合全血細胞計數在小兒巨細胞病毒感染診斷中的應用

黃崢 姜新華 吳小明

目的 調查兒童人巨細胞病毒（HCMV）感染狀況，探討HCMV DNA、白細胞計數與分類的聯合檢測在小兒HCMV感染診斷與治療中的應用價值。方法 采用FQ-PCR方法檢測518例不明原因支氣管炎、上呼吸道疾病、發熱等患兒尿液中的HCMV DNA含量，同時采集EDTA抗凝全血，進行全血細胞計數，統計分析患兒具體信息、診斷和檢測結果。結果 HCMV DNA陽性率49.2%，男患兒在1～≤3歲年齡段的檢出率最高，女患兒陽性檢出率則隨年齡增長逐年下降；淋巴細胞計數與比例、單核細胞計數在治療前后與正常對照比較，差異有統計學意義（P＜0.01），而中性粒細胞比例則較正常對照顯著下降（P＜0.01）；兒童HCMV感染主要累及肺臟，引起疾病復雜多樣并以呼吸道疾病為主；經1周治療后，HCMV DNA病毒載量與發病初期比較，差異有統計學意義（P＜0.01）。結論 不同年齡組兒童間HCMV感染率不同，HCMV感染與性別有關，HCMV感染可導致WBC數量異常增高，尿HCMV DNA定量測定與WBC計數和分類的聯合檢測在不明原因呼吸道感染患兒的早期病因診斷與抗病毒治療動態監測及療效判斷中有參考價值。

HCMV DNA 白細胞 支氣管炎 呼吸道感染 兒童

巨細胞病毒 （Human cytomegalovirus，HCMV）是世界范圍內常見的導致新生兒產后感染和兒童病毒性感染的病原微生物［1］。活動性HCMV感染，其臨床表現復雜多樣，病情輕重不一，易漏診、誤診；在免疫功能低下的人群中，可被激活而發生顯性感染和再次感染，累及多臟器、多系統，或可造成嚴重傷害［2］。本文探討HCMV DNA、白細胞計數與分類的聯合檢測在小兒HCMV感染診斷與治療中的應用價值。現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2011年6月至2016年3月衢化醫院兒科收治的疑似呼吸道病毒感染患兒518例，男326例，女192例；年齡2個月～14歲。以同期體檢的健康兒童94例為正常對照。

1.2 方法 采用FQ-PCR方法檢測患兒晨尿中的HCMV DNA含量，試劑盒由杭州艾康生物技術有限公司提供，儀器采用羅氏cobas z 480熒光定量PCR儀；白細胞（WBC）計數與分類應用Sysmex XE-2100五分類血液分析儀，sysmex原裝配套試劑。治療1周后復查。以HCMV-DNA＞500IU/ml為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件。計量資料用t檢驗，計數資料用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 518例疑似呼吸道病毒感染患兒中，HCMV DNA陽性255例，陽性率接近50%。見表1。

表1 不同性別與各年齡段患兒HCMV-DNA陽性檢出情況［n（%）］

2.2 合并HCMV-DNA陽性的相關疾病分析，見表2。

表2 HCMV-DNA陽性的相關疾病所占比例（n）

2.3 治療前后HCMV DNA定量、WBC計數與分類結果的變化 見表3。

表3 治療前后HCMV DNA定量、WBC計數與分類結果的變化（x±s）

3 討論

HCMV侵入人體后，可產生持續性感染，引起嚴重疾病，對優生優育及兒童的健康影響較大［3］。本資料結果表明，＜7歲兒童是活動性HCMV感染的高發人群，在各年齡段男患兒的檢出率均高于女患兒，表明其感染與性別有一定關系，這一結果與武漢地區［1］的報道存在區別，這可能是地域差異導致，也可能是檢測方法靈敏度不同引起。在不明原因的支氣管炎、上呼吸道疾病、發熱等癥狀的＜3歲患兒中，56.8%的男患兒和49.1%的女患兒是因HCMV感染而發病，陽性檢出率54.0%，顯著高于其他年齡組（P＜0.01）。總體陽性檢出率49.2%，與湖南（46.3%）［4］、遼寧（45.0%）［5］等地報道結果相近。HCMV具有潛伏-活化的生物學特性，僅在個體免疫系統出現問題、免疫力低下時，才易致病［6］。在本資料中，隨著年齡增長，不論男女患兒的HCMV DNA陽性檢出率均逐漸下降，＞7歲降為0，這與兒童的機體免疫力隨年齡增長不斷增強有關。

HCMV感染于胎兒和新生兒可表現為中樞神經系統損害和先天畸形，而在嬰幼兒則多表現為器官疾病，可影響多個臟器，缺乏特異性［7］。本資料顯示，衢化地區＜14歲兒童感染HCMV后主要以呼吸道疾病為主，與國內其他文獻［8］報道結果相似，其中支氣管炎所占比例最大（39.9%），其次為上呼吸道疾病（12.0%）、肺炎（9.3%）；感染主要累及的器官是肺臟，與陳平［8］等報道一致。此外，HCMV感染還可導致兒童胃腸炎、肝功能異常、驚厥等，有資料顯示，HCMV感染與難治性潰瘍性結腸炎存在關系［9］，而HCMV肝炎則可引起嬰幼兒膽汁性肝硬化，加重肝臟損害［10］，提示如臨床癥狀不典型伴有上述癥狀表現又無明確原因，應考慮HCMV感染存在的可能。

WBC計數作為細菌和病毒感染最常用的指標，通常認為細菌感染時增高而病毒感染時降低，但本資料結果顯示，255例HCMV感染患兒中有75%在發病初期WBC異常增高，即使治療1周后，仍有65%異常增高，其余則在正常范圍，未發現異常降低的患兒，且發病初期與治療1周后WBC計數值均顯著高于正常對照（P＜0.01）。分析WBC分類結果，則符合病毒感染的臨床表現，淋巴細胞數量與比例、單核細胞比例在發病初期與治療1周后均較正常對照顯著增高（P＜0.01），而中性粒細胞比例則顯著低于正常對照（P＜0.01）。FQ-PCR檢測HCMV-DNA，在兒童HCMV感染早期診斷中的應用已獲得廣泛認可［11］，檢測所需的尿液標本取材方便、無創，易被家長和小兒接受。檢測原理是HCMV最易侵犯嬰幼兒管道上皮細胞，尿液中可檢測出HCMV是由于HCMV侵襲腎小球及腎小管上皮所致，其排毒的多少與尿液中受感染的上皮細胞含量有關。有文獻報道［12］，該法靈敏性和特異性均高于pp65抗原檢測法和CMV-IgG法。但其在療效判斷中的應用價值報道甚少。本資料結果顯示，HCMV感染患兒經1周治療后，HCMV DNA病毒載量較發病初期下降顯著（P＜0.01），表明治療的有效性；與正常對照比較，無論發病初期還是1周治療后，HCMVDNA病毒載量的差異均有統計學意義（P＜0.01），提示病毒受到抑制但并未徹底清除，HCMV感染的治療周期至少＞1周。

綜上所述，FQ-PCR對HCMV-DNA定量測定可作為病毒活動性感染的一種敏感、特異、快速的檢測方法，臨床診斷WBC增高時不能排除HCMV感染的可能，結合WBC分類與HCMV DNA量化結果有助于評價感染狀態，是判斷藥物治療效果的有效手段。

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Objective To investigate the status of HCMV infection in children，combined detection of DNA and white blood cell count and classif i cation in the application value in the diagnosis and treatment of HCMV infection in children. Methods HCMV DNA content in urine of 518 patients with unexplained bronchitis，upper respiratory tract disease and fever were detected by FQ-PCR. EDTA anticoagulant blood was collected for CBC，analysis of children with specif i c information，diagnostic and statistical results. Results The positive rate of HCMV DNA was 49.2%，the male patients in the highest detection rate of 1～ is less than or equal to 3 years of age，the positive rate of female children decreased year by year；compared with the control group，there was significant difference in the percentage of lymphocyte count and the proportion of mononuclear cells（P＜0.01），while the proportion of neutrophils decreased signif i cantly（P＜0.01）. HCMV infection in children was mainly involved in the lung，resulted in a variety of diseases，including respiratory diseases；after a week of treatment，HCMV DNA viral load compared with the initial stage，the difference was statistically signif i cant （P＜0.01）. Conclusion HCMV infection rates are different among children of different age groups，HCMV infection is related to sex. HCMV infection can lead to abnormal increase in the number of WBC，the quantitative detection of urinary HCMV DNA combine the detection of WBC count and classif i cation in the early diagnosis of children with respiratory infection of unknown origin have reference value，also take effect for the dynamic monitoring and evaluation of therapeutic eff i cacy of antiviral therapy.

Human cytomegalovirus DNA Leucocyte Bronchitis Respiratory tract infection Children

310013 杭州迪安醫學檢驗中心（黃崢）

324004 浙江衢化醫院（姜新華 吳小明）