長(zhǎng)鏈非編碼RNA AK043773在脂肪細(xì)胞分化中的作用

張娟娟 喬玲 朱恩東

（天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院內(nèi)分泌研究所 衛(wèi)生部激素與發(fā)育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津市代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300070）

長(zhǎng)鏈非編碼RNA AK043773在脂肪細(xì)胞分化中的作用

張娟娟 喬玲 朱恩東

（天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院內(nèi)分泌研究所 衛(wèi)生部激素與發(fā)育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津市代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300070）

探索長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）AK043773在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)變化和調(diào)控作用。將小鼠前脂肪細(xì)胞成脂誘導(dǎo)，利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)成脂分化調(diào)控基因KLF7及AK043773的表達(dá)，構(gòu)建AK043773過(guò)表達(dá)載體檢測(cè)其對(duì)成脂分化的影響。經(jīng)UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)檢索發(fā)現(xiàn)AK043773位于KLF7基因4號(hào)外顯子的3'端下游，骨髓基質(zhì)細(xì)胞系ST2和前脂肪細(xì)胞系3T3-L1成脂誘導(dǎo)分化后，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示AK043773及KLF7表達(dá)協(xié)同下調(diào)；構(gòu)建pCDNA3.1-AK043773過(guò)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞后能顯著提高AK043773的表達(dá)，進(jìn)行脂肪細(xì)胞分化條件誘導(dǎo)，通過(guò)油紅O染色及OD520nm吸光值檢測(cè)可見(jiàn)AK043773過(guò)表達(dá)顯著抑制ST2細(xì)胞中脂滴產(chǎn)生。AK043773及KLF7在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中協(xié)同下調(diào)，上調(diào)AK043773的表達(dá)可顯著抑制脂肪細(xì)胞分化。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA；AK043773；脂肪細(xì)胞分化；KLF7

肥胖的發(fā)病率在我國(guó)日益上升，2013年針對(duì)我國(guó)大于20歲的成年人進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，肥胖發(fā)病率為8.8%，超重人群則達(dá)到55.7%［1］。肥胖的發(fā)生是脂肪異常堆積的結(jié)果，對(duì)脂肪細(xì)胞分化機(jī)制的深入研究有益于為肥胖的治療提供有效策略［2］。脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程是多條信號(hào)通路以及大量轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同級(jí)聯(lián)調(diào)控的結(jié)果［3］。近期研究發(fā)現(xiàn)kruppel樣鋅指轉(zhuǎn)錄因子家族（Kruppel-like factor，KLF）成員廣泛參與脂肪細(xì)胞分化［4］。在人前脂肪細(xì)胞和小鼠3T3-L1細(xì)胞中過(guò)表達(dá)KLF7可以顯著抑制脂滴產(chǎn)生，并顯著抑制脂肪細(xì)胞特異性基因PPARγ、C/EBPα、aP2和adipsin的表達(dá)［5］。此外，有研究顯示長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA，lncRNA）也參與脂肪細(xì)胞分化過(guò)程的調(diào)控［6］。lncRNA是一類片段長(zhǎng)度大于200 bp的內(nèi)源性RNA分子，人類基因組中只有大約1%具有蛋白編碼潛能，然而在特定的發(fā)育節(jié)點(diǎn)卻有大約70%的基因組轉(zhuǎn)錄，其中多數(shù)轉(zhuǎn)錄本屬于lncRNA，它們通常由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄，經(jīng)RNA剪接過(guò)程成熟，具有譜系特異性并行使多種生物學(xué)功能。例如，胞核lncRNA參與形成核糖核蛋白復(fù)合體從而修飾染色體結(jié)構(gòu)影響基因轉(zhuǎn)錄活性，胞漿lncRNA可以直接或通過(guò)吸附microRNA調(diào)控mRNA 的穩(wěn)定［7-9］。Sun等［10］通過(guò)比對(duì)原代棕色和白色脂肪細(xì)胞、前體脂肪細(xì)胞以及成熟脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組，發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，175個(gè)lncRNAs被特異調(diào)控，而且C/EBPα和PPARγ可以結(jié)合于大量lncRNA的啟動(dòng)子區(qū)域，通過(guò)RNAi抑制其中10個(gè)lncRNAs可以顯著抑制脂滴形成。

本研究擬通過(guò)分析lncRNA AK043773的基因定位，鑒定其在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)和功能，旨在為進(jìn)一步探索lncRNA AK043773在脂肪細(xì)胞分化中的分子作用機(jī)制奠定研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞ST2、前脂肪細(xì)胞3T3-L1和質(zhì)粒pCDNA3.1（+）由本實(shí)驗(yàn)室保存；SPF級(jí)雄性6周齡C57BL/6小鼠購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司；Trans5α感受態(tài)細(xì)胞、TransStart FastPfu DNA Polymerase和T4 DNA 連接酶購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司；BamH I和EcoRⅤ內(nèi)切酶購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher；質(zhì)粒提取試劑盒和凝膠回收試劑盒購(gòu)自北京天根生化科技公司；Lipofectamine 2000 購(gòu) 自 美 國(guó) Invitrogen；α-MEM 和 DMEM/H 培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone；胎牛血清FBS購(gòu)自德國(guó)SeraPro；RNA提取試劑E.Z.N.A. Total RNA Kit購(gòu)自美國(guó)Omega Bio-tek；Reverse Transcription Kit 購(gòu)自美國(guó) Thermo Fisher；SGExcel Fast SYBR Mixture kits及特異性引物購(gòu)自生工生物工程有限公司；誘導(dǎo)試劑胰島素（Insulin）、地塞米松（Dex）、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX）和油紅O購(gòu)自美國(guó)Sigma；吲哚美辛（Indo）購(gòu)自美國(guó)Cyagen Biosciences Inc。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與成脂分化誘導(dǎo) 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞ST2用含10% FBS的α-MEM培養(yǎng)基，前脂肪細(xì)胞3T3-L1用含10% FBS的DMEM/H培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%以上時(shí)傳代。將細(xì)胞接種于12孔板，細(xì)胞密度達(dá)90%以上時(shí)進(jìn)行成脂分化誘導(dǎo)。成脂誘導(dǎo)分化利用經(jīng)典的激素雞尾酒法，誘導(dǎo)試劑包含0.05 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、5 mg/L 胰島素、0.05 mmol/L吲哚美辛和0.05 μmol/L地塞米松。

1.2.2 pCDNA3.1- AK043773載體的構(gòu)建 設(shè)計(jì)合成擴(kuò)增AK043773片段的特異性引物，以C57BL/6小鼠肝臟DNA為模板，經(jīng)FastPfu DNA聚合酶擴(kuò)增獲得AK043773片段全長(zhǎng)，將克隆片段與pCDNA3.1（+）載體分別進(jìn)行BamH I和EcoRⅤ內(nèi)切酶雙酶切，膠回收PCR片段及載體大片段后用T4 DNA 連接酶連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Trans5α感受態(tài)細(xì)胞，提取單克隆后雙酶切鑒定，鑒定正確克隆送交Invitrogen測(cè)序，測(cè)序正確載體命名為pCDNA3.1-AK043773載體。載體引物上游：5'-GCG GAT CCG AGA GGG CTG GAC TTC AG-3'，下游5'-CCG GAT ATC CTT TTT TTA TAG AGC CTT GCA TTG G-3'。下劃線代表酶切位點(diǎn)，其中GGATCC為BamH I，GATATC為EcoRⅤ。

1.2.3 pCDNA3.1及pCDNA3.1- AK043773載體轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染前1 d，將ST2細(xì)胞接種于12孔板，轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞融合度達(dá)70%-90%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染試劑采用Lipofectamine 2000，轉(zhuǎn)染6 h后細(xì)胞換液，具體實(shí)驗(yàn)步驟依說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。轉(zhuǎn)染24 h后可進(jìn)行成脂細(xì)胞分化誘導(dǎo)；轉(zhuǎn)染48 h后可檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。

1.2.4 RT-qPCR檢測(cè)KLF7和lncRNA AK043773的表達(dá)水平 ST2和3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)成脂分化3 d后收取細(xì)胞，pCDNA3.1及pCDNA3.1- AK043773載體轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞48 h后收取細(xì)胞，按照E.Z.N.A. Total RNA Kit說(shuō)明書(shū)分別提取各組細(xì)胞總RNA，利用Reverse Transcription Kit將 0.5 μg總 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄的條件：25℃ 10 min；42℃ 60 min；70℃ 10 min。

逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA作為模板，qPCR檢測(cè)KLF7和lncRNA AK043773的表達(dá)。根據(jù)SGExcel Fast SYBR Mixture kits試劑盒說(shuō)明書(shū)加入qPCR所需的2×Mix、cDNA和特異性引物反應(yīng)。反應(yīng)體系為20 μL，內(nèi)參為β-actin。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性2 min；95℃變性30 s、57℃退火15 s、72℃延伸15 s，40個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物采用溶解曲線法分析，以確定樣品擴(kuò)增的特異性。采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因?qū)嶒?yàn)組與對(duì)照組的表達(dá)差異，Ct值指反應(yīng)管中熒光信號(hào)達(dá)到一定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。KLF7 qPCR引物上游5'-ACT GAC AAA CAA ACA GAC CCA G-3'，下游 5'-GGT AGC GTT CCA ACT CAA GG-3'；lncRNA AK043773 qPCR引物上游5'-ACG CCA GGG ATG GCA TTA-3'，下游5'-GAG CCT TGC ATT GGT CAG T-3'；β-actin qPCR引物上游5'-AAG ACC TCT ATG CCA ACA CAG-3'，下游5'-GGA GGA GCA ATG ATC TTG ATC-3'。

1.2.5 油紅O染色及OD值檢測(cè) pCDNA3.1及pCDNA3.1- AK043773載體轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞24 h后，進(jìn)行成脂細(xì)胞分化誘導(dǎo)，待脂滴成熟后棄細(xì)胞培養(yǎng)基，1×PBS洗2次；4%多聚甲醛固定15 min后棄液，1×PBS洗1次；加入60%異丙醇，室溫放置1-2 min后棄液；加入60%油紅O染液，染色5 min，蒸餾水漂洗2次，于倒置顯微鏡下觀察并拍照。拍照后棄水，將細(xì)胞培養(yǎng)板倒置晾干后，每孔加400 μL異丙醇萃取油紅O，常溫放置20 min，移至96孔板檢測(cè)吸光度，波長(zhǎng)設(shè)置520 nm。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 lncRNA AK043773的基因位點(diǎn)分析

經(jīng)UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)（http://genome.ucsc.edu/）檢索，lncRNA AK043773基因全長(zhǎng)2 720 bp，位于KLF7基因4號(hào)外顯子的下游（圖1）。

圖1 lncRNA AK043773的基因位點(diǎn)分析

2.2 lncRNA AK043773的蛋白編碼能力分析

為確定AK043773的編碼能力，經(jīng)蛋白編碼能力預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)CPAT：Coding-Potential Assessment Tool（http://lilab.research.bcm.edu/cpat/index.php）分析，AK043773的蛋白編碼能力得分為0.13，作為對(duì)照，KLF7基因（NCBI序列參考編號(hào)為 NM_033563.2）的蛋白編碼能力得分為0.98。由此可見(jiàn)，AK043773編碼蛋白的潛能極低，屬于非編碼RNA（圖2）。

圖2 lncRNA AK043773的蛋白編碼能力分析

2.3 RT-qPCR檢測(cè)3T3-L1和ST2細(xì)胞成脂誘導(dǎo)后KLF7和lncRNA AK043773的表達(dá)

ST2和3T3-L1細(xì)胞通過(guò)經(jīng)典的激素雞尾酒法成脂誘導(dǎo)分化3 d后，與未成脂分化細(xì)胞分別提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)。結(jié)果（圖3）顯示，與未成脂分化的細(xì)胞相比，在成脂分化的3T3-L1和ST2細(xì)胞中，KLF7分別顯著下降至0.80和0.47，lncRNA AK043773分別顯著下降至0.74和0.49。

圖3 KLF7和lncRNA AK043773在3T3-L1和ST2細(xì)胞成脂前后的表達(dá)水平

2.4 成功構(gòu)建pCDNA3.1-AK043773表達(dá)載體

以雄性C57BL/6小鼠肝臟DNA為模板，通過(guò)PCR特異性擴(kuò)增2 720 bp的AK043773基因全長(zhǎng)，通過(guò)BamH I和EcoR Ⅴ雙酶切位點(diǎn)克隆至pCDNA3.1（+）載體，命名為pCDNA3.1- AK043773。測(cè)序結(jié)果正確，PCR特異性擴(kuò)增片段與pCDNA3.1- AK043773載體雙酶切后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果均顯示載體構(gòu)建成功，擴(kuò)增片段及酶切結(jié)果見(jiàn)圖4。

2.5 RT-qPCR檢測(cè)pCDNA3.1-AK043773轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞后lncRNA AK043773的表達(dá)

圖4 AK043773基因PCR特異性擴(kuò)增、pCDNA3.1-AK043773載體PCR特異性擴(kuò)增及其雙酶切鑒定

pCDNA3.1及pCDNA3.1- AK043773載 體 分別轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞48 h后收取細(xì)胞，分別提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)。結(jié)果（圖5）顯示，與pCDNA3.1載體轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pCDNA-3.1-AK043773載體可以顯著提高ST2細(xì)胞中l(wèi)ncRNA AK043773的表達(dá)水平至13.06倍。

圖5 pCDNA3.1及pCDNA3.1-AK043773載體轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞后lncRNA AK043773的表達(dá)

2.6 lncRNA AK043773對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響

pCDNA3.1及pCDNA3.1- AK043773載體分別轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞后誘導(dǎo)成脂分化，待脂滴成熟后進(jìn)行油紅O染色，pCDNA3.1- AK043773載體轉(zhuǎn)染組較pCDNA3.1載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞脂滴明顯減少；異丙醇萃取油紅O后經(jīng)OD520nm波長(zhǎng)吸光值檢測(cè)，可見(jiàn)pCDNA3.1- AK043773載體轉(zhuǎn)染組較pCDNA3.1載體轉(zhuǎn)染組下降30%（圖6）。

3 討論

肥胖被定義為體脂超標(biāo)，肥胖患病率的持續(xù)上升使得脂肪組織及脂肪細(xì)胞生成被廣泛關(guān)注［11］。脂肪組織是非常活躍重要的內(nèi)分泌器官，對(duì)能量及代謝穩(wěn)態(tài)的維持至關(guān)重要［12］。脂肪細(xì)胞是脂肪組織的主要組成部分，脂肪細(xì)胞主要由成纖維樣前脂肪細(xì)胞分化發(fā)育而來(lái)，脂肪細(xì)胞的分化是多種轉(zhuǎn)錄因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)及各種調(diào)控因子調(diào)節(jié)的結(jié)果［13-15］。近期有研究顯示lncRNA廣泛參與生命活動(dòng)的發(fā)育和分化進(jìn)程［16-18］。2013年，Sun等［10］首次針對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠的前白色、棕色脂肪細(xì)胞以及分化成熟的白色、棕色脂肪細(xì)胞，篩選得到polyA尾轉(zhuǎn)錄譜然后進(jìn)行RNA測(cè)序，鑒定了175個(gè)差異表達(dá)的lncRNA，其中很多脂肪細(xì)胞富集的lncRNA啟動(dòng)子區(qū)有PPARγ和C/EBPα的結(jié)合位點(diǎn)，用RNAi抑制這些lncRNA的表達(dá)可以有效抑制成脂。2014年，Cooper等［19］在小鼠3T3-L1細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)lncRNA NEAT1可以與SRp40通過(guò)調(diào)控PPARγ2的剪接影響成脂。2016年，Huang等［20］發(fā)現(xiàn)lncRNA H19可以通過(guò)組蛋白去乙酰化酶的表觀修飾抑制骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化。這些研究結(jié)果提示lncRNA也參與了脂肪細(xì)胞的分化生成階段。

圖6 lncRNA AK043773對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響

在研究前期，對(duì)原代培養(yǎng)的小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化，72 h后采用芯片技術(shù)獲得脂肪細(xì)胞分化前后的lncRNA及mRNA表達(dá)譜。發(fā)現(xiàn)在成脂分化的細(xì)胞中KLF7表達(dá)顯著下調(diào)，該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致［5］，而位于KLF7基因4號(hào)外顯子下游的lncRNA AK043773協(xié)同下調(diào)。經(jīng)蛋白編碼能力預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)Coding Potential Calculator（http://cpc.cbi.pku.edu.cn/programs/run_cpc.jsp） 分 析，lncRNA AK043773不具備編碼蛋白的潛能。通過(guò)RT-qPCR驗(yàn)證了芯片結(jié)果，從而提示lncRNA AK043773可能參與脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控，而且其可能發(fā)揮負(fù)向調(diào)控的功能。通過(guò)構(gòu)建lncRNA AK043773的過(guò)表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染ST2細(xì)胞，經(jīng)成脂誘導(dǎo)后證明了我們的猜想，即過(guò)表達(dá)lncRNA AK043773可以抑制脂肪細(xì)胞分化。

后續(xù)研究將驗(yàn)證lncRNA AK043773的蛋白編碼潛能，通過(guò)5'和3'cDNA末端快速克隆（RACE）實(shí)驗(yàn)確定其全長(zhǎng)，通過(guò)分離脂肪分化前后細(xì)胞的胞核和胞漿部分，采用RT-qPCR技術(shù)確定lncRNA AK043773的亞細(xì)胞定位，通過(guò)設(shè)計(jì)合成lncRNA AK043773的siRNA驗(yàn)證其在脂肪細(xì)胞分化中的功能。本研究發(fā)現(xiàn)lncRNA AK043773位于KLF7基因的下游，后續(xù)研究還將探討其是否通過(guò)順式作用影響KLF7的表達(dá)發(fā)揮其抑制脂肪細(xì)胞分化的功能，從而進(jìn)一步深入的研究lncRNA AK043773發(fā)揮調(diào)控功能的分子機(jī)制，為闡釋脂肪細(xì)胞分化進(jìn)程的調(diào)控提供新理論。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的lncRNA AK043773，其位于KLF7基因4號(hào)外顯子的下游，在成脂分化的ST2和3T3-L1細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，在ST2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)lncRNA AK043773可以抑制脂肪細(xì)胞分化。

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Role of Long Non-coding RNA AK043773 in Adipocyte Differentiation

ZHANG Juan-juan QIAO Ling ZHU En-dong
（Key Laboratory of Hormones and Development（Ministry of Health），Tianjin Key Laboratory of Metabolic Diseases，Metabolic Diseases Hospital & Institute of Endocrinology，Tianjin Medical University，Tianjin 300070）

This work is to investigate the expression changes and regulating role of long non-coding RNA（lncRNA）AK043773 in adipocyte differentiation. First，pre-adipocyte cells in mice were induced for adipogenesis. Then，the expressions of adipogenic differentiation regulating gene（KLF7）and AK043773 were measured by real-time quantitative PCR（RT-qPCR）. Next，the overexpression vector for AK043773 was constructed for detecting its effects on adipogenic differentiation. According to search in UCSC database，the locus of AK043773 was in the 3'-end downstream of KLF7’s exon 4. The expressions of KLF7 and AK043773 were down-regulated coordinately in adipogenesis-induced and differentiated bone marrow stromal cell line ST2 and pre-adipocyte cells 3T3-L1. Furthermore，the overexpression vector pCDNA3.1-AK043773 was constructed and transfected into ST2 cells，which significantly enhanced the expression of AK043773，but inhibited the adipogenesis in ST2 cells by oil red O staining and OD520nmabsorbance test after the induction of adipocyte differentiation. All of results indicate that AK043773 and KLF7 coordinately down-regulate in adipocyte differentiation，and increasing the expression of AK043773 remarkably suppresses the differentiation of adipocyte.

lncRNA；AK043773；adipocyte differentiation；KLF7

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0556

2017-07-04

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81501846），天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院內(nèi)分泌研究所科學(xué)基金（2014RC01）

張娟娟，碩士研究生，研究方向：脂肪與成骨細(xì)胞分化調(diào)控研究；E-mail：839973071@qq.com

朱恩東，助理研究員，研究方向：脂肪與成骨細(xì)胞分化調(diào)控研究；E-mail：ezhu@tmu.edu.cn

（責(zé)任編輯 朱琳峰）