食品中合成著色劑的測定方法研究

李林++武術蘭++王震

摘要 本文建立了應用配有紫外檢測器的液相色譜儀檢測食品中檸檬黃、日落黃、亮藍、莧菜紅、胭脂紅、誘惑紅、新紅、赤蘚紅、偶氮玉紅含量的方法。樣品用聚酰胺粉吸附，用甲醇-甲酸溶液淋洗，用乙醇-氨水洗脫，洗脫液收集在蒸發皿中，水浴蒸干定容上機檢測。以液相色譜測定，外標法定量。

關鍵詞 合成著色劑；高效液相色譜法；LC-UV；吸附；淋洗；洗脫；食品

中圖分類號 O657.72 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）17-0253-02

1 安全提示

試驗中用到的甲醇、甲酸、氨水具有一定的毒性和腐蝕性，應小心操作，如不慎賤入皮膚、臉部、眼睛等部位，應及時用大量水沖洗。嚴重者沖洗后就醫。

2 方法提要

本標準操作程序是本實驗室參照相關文獻樣品前處理方法及測定方法，按《殘留檢測質量控制指南》的有關要求，進行周密驗證后，將某些關鍵步驟進行細化。

本標準適用于的合成著色劑為檸檬黃、日落黃、亮藍、莧菜紅、胭脂紅、誘惑紅、新紅、赤蘚紅、偶氮玉紅，以下介紹統一用著色劑代替著色劑的名稱。

3 原理

食品中合成著色劑與聚酰胺粉在酸性條件下吸附，在堿性條件下洗脫，經反相液相色譜C18柱分離后，用紫外檢測器428、529、600 nm檢測，外標法定量[1-2]。

4 檢測限、線性范圍、回收率范圍和精密度

著色劑檢測限為1 mg/kg。著色劑的線性范圍：0.50～10.00 μg/mL。著色劑的回收率范圍均在75%～110%之間。儀器精密度為1.284%。

5 儀器和設備

高效液相色譜儀（Waters e2695），帶紫外檢測器[3]。水浴鍋、過濾器、加熱板、pH計、燒杯、10 mL比色管、G3砂芯漏斗、抽濾裝置、0.45 μm濾膜。

6 試劑與溶液

除非另有規定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。

6.1 試劑

甲醇（色譜純）、乙酸銨（色譜純）、聚酰胺粉（過200目篩）、檸檬酸、甲醇（分級純）、甲酸（分析純）、乙醇（分析純）、氨水。

6.2 溶液

乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取1.54 g乙酸銨，加水至1 000 mL定容。

甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇（分析純）60 mL，甲酸40 mL，混勻。

乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取乙醇70 mL，氨水20 mL，水10 mL，混勻。

pH=4的水：水中加檸檬酸，配合pH測定儀的使用調節至pH=4。

6.3 標準物質與標準溶液

6.3.1 標準物質。著色劑標準品。

6.3.2 標準溶液。①標準儲備液配制。準確稱取著色劑10 mg，加水溶解并定容至10 mL，溶液濃度為1 000 μg/mL。②標準中間液的配制。使用移液器吸取標準儲備液100 μL至10 mL容量瓶中，用水定容至10 mL，溶液濃度為10 μg/mL。③混合標準工作液的配制。標準中間液稀釋成標準工作液，濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL。

7 試驗方法

7.1 試樣制備

①含二氧化碳的汽水：加熱除去二氧化碳。②配制酒類：加小碎瓷片數片，加熱去除乙醇。③肉類、糖果等含脂類樣品：加石油醚除去脂類，重復3次。

7.2 分析步驟

7.2.1 吸附。稱取5 g樣品（粉狀、肉類、色深樣品可少稱）于100 mL燒杯中，用pH=4的水溶解。加入2～3勺聚酰胺粉，攪拌片刻，置于60 ℃水浴鍋保持30 min，待上層液體澄清即可。

7.2.2 淋洗。將吸附好的樣品以G3砂芯漏斗抽濾，先用60 ℃pH=4的水洗滌3～5次洗至流出液無色。再用甲醇-甲酸（6+4）溶液淋洗3～5次，洗至流出液無色，然后用大量水洗至中性。

7.2.3 洗脫。用乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液洗脫3～5次，每次10 mL，收集洗脫液。

7.2.4 蒸發定容。將洗脫液蒸發至接近干燥，加水溶解，定容至10 mL，經0.45 μm濾膜過濾，濾液待高效液相色譜分析。

7.2.5 儀器參數與測定條件。①色譜測定條件。色譜柱：SB-C18（粒徑5 μm，250 mm×4.6 mm）或同等性能的色譜柱[4]；柱溫（35±1）℃；流動相0.02 mol/L乙酸銨溶液、甲醇[5]；流速1.0 mL/min；檢測波長428、529、600 nm；進樣量10 μL；梯度見表1。

7.2.6 儀器測定。①標準曲線的繪制。依據上述條件，將配置好的系列標準溶液，含標準濃度為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL標準溶液，按照從低到高濃度依次進樣至液相色譜儀中。得到上述各濃度的標準溶液的色譜圖（圖1）。以標準濃度（μg/mL）為橫坐標，以峰高或峰面積為縱坐標，繪制標準曲線和計算線性方程。②樣品的測定。分別吸取試樣溶液10 μL，在相同的工作條件下，注入液相色譜儀中，計算出試樣溶液中著色劑的值。

7.2.7 定性標準。根據保留時間定性，分別測量標準系列、樣品的峰高或峰面積。

7.2.8 定量方法。本試驗采用外標定量，根據所測物質的峰面積定量。

8 結果計算

采用外標法定量，計算公式如下：

式中：X—試樣中著色劑含量的數值，單位是mg/kg；c—測定用試樣溶液中的著色劑含量的數值，單位為μg/mL；V—試樣溶液體積，單位為mL；m—試樣取樣量，單位為g；f—稀釋倍數。

9 檢測質量控制標準

本試驗的著色劑標準曲線為0.5～10.0 μg/mL。檢出限為1 mg/kg。樣品中著色劑的回收率范圍在75%～110%之間，可接受的標準曲線相關系數的最低值為0.999。

10 分析步驟的關鍵控制點及說明

按照本標準操作程序執行的樣品測定，操作者應注意以下關鍵處：①對于組分濃度超出工作曲線濃度范圍的樣品，應予以適當倍數的稀釋，盡量保證被測組分濃度包涵在工作曲線的濃度范圍內；②因標準溶液配制的體積較小，易產生較大誤差，配制過程中應謹慎操作，確保取液體積準確，并防止污染；③取樣時應注意查看樣品均一性，以保證平行樣品測定的一致性。

11 參考文獻

[1] 中華人民共和中衛生部，中國國家標準化管理委員會.水果罐頭中合成著色劑的測定 高效液相色譜法：GB/T 21916-2008[S/OL].（2013-12-23）[2017-05-16].http：//www.doc88.com/p-7314371647500.html.

[2] 錢曉燕，劉海山，朱曉雨，等. 固相萃取/超高效液相色譜-串聯質譜法測定化妝品中12種合成著色劑[J].分析測試學報，2014，33（5）：527-532.

[3] 中華人民共和中衛生部，中國國家標準化管理委員會.食品中合成著色劑的測定：GB/T 5009.35-2003[S/OL].（2015-08-05）[2017-05-16].http：//www.doc88.com/p-2015378149361.html.

[4] 張大芬，朱敖蘭，陶紅霞，等.高效液相色譜法同時測定玉米粉和小米粉中的8種合成著色劑[J].現代預防醫學，2015，42（7）：1202-1204.

[5] 楊勇，羅奕，吳琳琳，等.HPLC-DAD法測定饅頭中喹啉黃、食用綠S和亮綠3種色素含量的研究[J].糧油食品科技，2015，23（6）：71-75.