QuEChERS方法在水產品藥物殘留檢測中的應用研究進展

王淼++王艷++吳艷云++方曉燕

摘要 水產品中的藥物殘留會嚴重威脅食品安全，因水產品基質復雜，不同種類藥物性質差異大，常規分析方法以分類檢測為主，檢測周期長、成本高、效率低。QuEChERS方法具有快速、簡便、環保、靈活等優點，本文重點關注QuEChERS方法在水產品多環芳烴、激素、獸藥、非法添加物等殘留檢測中的應用，并對QuEChERS方法在檢測中的發展趨勢進行展望，以期為QuEChERS方法在水產品中藥物殘留檢測提供參考。

關鍵詞 水產品；QuEChERS；藥物殘留；檢測

中圖分類號 S948 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）17-0257-03

Abstract The drugs residues in aquatic products will exert a serious influence on food safety.Because of complex matrix in aquatic product，the normal analysis methods are based on classification detections.So many problems also appear，such as a longer testing cycle，high cost and inefficiency.The QuEChERS method has the advantages of fast，simple，environmentally，flexible and so on.The paper focused on the application of QuEChERS method in the detection of the PAHs，the hormones，the chemical drugs added illegally，veterinary drugs，etc.In addition，the trends of QuEChERS in the future were forecasted，which could provide references for the detection technology of drug residues in aquatic products.

Key words aquatic products；QuEChERS；drugs residues；detection

QuEChERS方法是由美國農業部ARS化學家Steven J.Lethotay和德國斯圖加特CVUA實驗室的Michelangelo Anastassiades[1]于2003年提出的一種快速、簡單、經濟、高效、抗干擾、安全的樣品前處理技術，主要利用吸附劑填料吸附基質中的雜質，從而達到凈化樣品、去除雜質的目的，基本操作僅需振蕩和離心。與固相萃取柱凈化法相比，其具有速度快、回收率高、穩定性好、溶劑用量少、樣品制備簡便等優點。該方法最初在農藥多殘留檢測中使用[2]，后來逐漸被開發用于動物源食品中藥物殘留檢測的前處理工作。

水產品基質復雜，含有大量的脂肪、蛋白質、碳水化合物以及色素等雜質，不同目標物之間結構和理化性質差異較大，通常以分類檢測為主，存在檢測周期長、成本高等缺點。而QuEChERS方法具有快速、簡單、靈活等特點，可用于不同性質藥物的快速篩查。QuEChERS方法還可根據待測物質、樣品基質、儀器和實際分析要求的需要，對凈化劑、鹽量、水含量和吸附劑的種類、比例等進行調整，以滿足不同的分析需求。經典QuEChERS的常用提取劑有乙腈、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷等。乙腈和甲醇都有沉淀蛋白的作用，甲醇與蛋白質形成絮狀沉淀；乙腈則與蛋白質形成致密沉淀，更易離心除去；乙酸乙酯極性小于乙腈，會提取出大量弱極性雜質，增加后續凈化的難度，同時會降低回收率，影響精密度；丙酮作提取液時，提取大分子雜質和小分子雜質均較多。混合溶劑可以提取性質差異較大的目標化合物，如甲酸、乙酸、Na2EDTA-Mcllvaine等，針對某些對pH敏感的目標化合物，還可通過調整提取劑的pH值，提高目標化合物回收率，如四環素類藥物。

乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、中性氧化鋁、C18、氨基（-NH2）、石墨化碳黑（GCB）等吸附劑是常用的分散固相萃取凈化材料。PSA和-NH2能有效去除提取液中的脂肪酸、碳水化合物、酚類和少量色素；GCB能去除色素、類胡蘿卜素、固醇和平面結構的雜質干擾[3]，因動物源樣品基質通常不存在葉綠素干擾，很少使用GCB；中性氧化鋁和C18有良好的去除脂肪能力。為了達到更好的凈化效果，降低儀器基線噪聲，提升目標物的靈敏度，常將多種凈化劑混合使用。隨著研究的深入，增強基質去除脂質材料EMR-lipid（Enh-anced Matrix Removal-lipid）也被用于前處理，能有效去除提取液中的非極性干擾物質[4]。作為脫水劑，MgSO4比Na2SO4吸水能力更大，MgSO4發生水合反應時會釋放熱量，利于提取，但如果釋放的熱量過多，也會導致一些易揮發藥物的損失，脫水劑的用量應根據試驗需求進行調整。

傳統QuEChERS方法是將樣品勻漿后加入提取試劑進行振搖提取，多采用人工振搖，耗時耗力。目前已有研究選用均質提取，采用振搖與超聲提取相結合的方式，在前處理中加入超聲波提取，能使樣品與提取試劑充分接觸，提高提取效果。目前，QuEChERS方法已經在農產品、畜禽產品、水產品、食品、環境樣品的檢測中得到較為廣泛的應用。本文對QuEChERS方法在水產品中多環芳烴、激素、獸藥殘留、非法添加物的檢測研究進展進行分類敘述。

1 多環芳烴檢測

多環芳烴（PAHs）屬持久性有機污染物，在環境中不易分解，具有致癌、致突變、致畸性[5]和干擾內分泌作用[6]，高脂溶性導致其易在水生生物中富集，對水生生物和人類健康形成威脅。水產品含有大量的脂肪、蛋白質、碳水化合物以及色素等雜質，介于PAHs的脂溶性特征，常采用皂化反應或固相萃取去除脂類物質的干擾，前處理復雜，不僅耗時長且化學試劑用量大。萬譯文等[7]將樣品經水分散，乙腈提取，C18與中性氧化鋁凈化后，采用熒光-紫外檢測器串聯的方法檢測萘、芴、蒽等16種多環芳烴，檢出限為0.5～5.0 μg/kg，相對標準偏差為1.7%～9.2%，加標回收率可達71.8%～98.8%。唐子剛等[8]通過對QuEChERS方法中萃取條件的優化，建立了適用于魚體樣本中有機氯和多氯聯苯17種持久性有機污染物殘留的氣相色譜-電子捕獲檢測器分析方法，0.5～200.0 μg/kg濃度范圍內相關系數>0.994 1，檢出限為0.01～0.20 μg/kg，回收率為51.9%～112.9%。郭萌萌等[9]用高速均質提取代替傳統QuEChERS方法中的振搖提取，以 Florisil+C18 為混合萃取劑裝填固相萃取小柱凈化代替PSA分散填料凈化，二極管陣列和熒光檢測器聯用進行檢測，16種多環芳烴檢出限為0.1～3.6 μg/kg，在鯉魚、對蝦和牡蠣中進行加標回收試驗，回收率為75.0%～118.2%。王彬[10]將魚肉經含1%冰乙酸的乙腈提取，分散固相萃取，GC-ECD測定7種多氯聯苯殘留量，含量為1～200 μg/L時相關性良好，加標回收率為76.4%～104.4%，檢出限為0.2～0.5 μg/kg。

2 激素殘留檢測

己烯雌酚和雌二醇作為生長促進劑，曾被廣泛應用于水產養殖行業，因其可導致機體代謝紊亂、發育異常或腫瘤等，我國農業部于2002年禁止在畜禽、水產養殖過程中使用己烯雌酚、雌二醇等雌激素。馬麗莎等[11]建立了QuECh-ERS/GC-MS方法測定魚、蝦中雌二醇與己烯雌酚含量，選用乙酸乙酯為提取劑，中性氧化鋁為基質凈化劑，內標法定量，檢出限分別為0.3 μg/kg和0.5 μg/kg。李詩言等[12]用美國Agilent公司的增強型去除脂類基質吸附劑EMR-Lipid吸附去除魚肉中的脂類物質，再鹽析脫水凈化，建立了四級桿飛行時間質譜快速測定法，可同時測定雌雄激素、孕激素和糖皮質激素等14種激素。

3 非法添加物質檢測

孔雀石綠（Malachite green，MG） 與結晶紫（Crystal violet，CV） 屬于三苯甲烷類染料，在水產養殖和運輸過程中，常被用于水體消毒和預防魚病害。由于孔雀石綠和結晶紫及其代謝物均有潛在致癌、致畸、致突變作用，已被大多數國家禁止用于水產養殖業。劉書貴等[13]運用QuEChERS方法研究鯪體內孔雀石綠及其代謝物殘留及消除規律，以乙腈為萃取溶劑，無水硫酸鎂為脫水劑，PSA與GCB為分散吸附劑。歐陽燕玲等[14]運用QuEChERS方法提取魚肉中的孔雀石綠、結晶紫及其代謝物，經高效液相色譜測定，發現孔雀石綠與結晶紫含量為10～200 μg/L，隱色孔雀石綠、隱性結晶紫含量在2.0～40.0 μg/L范圍內有良好的線性關系（r>0.999），檢測限為0.36～5.10 μg/kg，平均加標回收率為69%～118%，相對標準偏差為1.8%～10.0%。朱程云等[15]通過對前處理中提取劑體積、提取次數以及分散固相萃取材料種類的優化，發現反相/強陰離子交換材料（C18SAX）能有效提高回收率，經高效液相色譜測定，魚肉中孔雀石綠、結晶紫及其代謝物在0.5～100.0 mg/mL范圍，相關系數>0.999 8。

β-受體激動劑是一類具有苯乙醇胺結構的腎上腺素類合成藥物[16]，若給動物非法喂食β-受體激動劑能夠促進動物生長，提高飼料轉化率，降低動物的脂肪率；過量攝入β-受體激動劑可導致急性中毒，長期食用有β-受體激動劑殘留的動物組織，會嚴重威脅人類健康[17]。梁飛燕等[18]選用含有絡合劑的Na2EDTA -Mcllvaine 緩沖溶液（pH 值4.0） 與5%乙酸乙腈為提取溶劑，-NH2為吸附劑，0.1%甲酸-25%乙腈水溶液作為復溶溶劑，結合HPLC-MS方法可以同時檢測豬肉中磺胺類及其增效劑、β-受體激動劑、四環素類、喹諾酮類、抗病毒類、孕激素類、蛋白同化激素類共7類35種獸藥的方法。

4 獸藥殘留檢測

獸藥殘留是當前食品安全的重要問題，目前有近100種獸藥在使用，不同藥物的理化性質存在較大差異，傳統的獸藥殘留分析通常以分類檢測為主，若需要檢測多類獸藥，則需進行多次樣品前處理，檢測周期長、成本高、效率低。因此，建立快速、有效、靈敏、可靠且實用的獸藥殘留分析方法對于食品安全具有重要的現實意義，QuEChERS方法的靈活性和可塑性，能滿足多種類藥物殘留同時檢測的要求。

李 晴等[19]選用Na2EDTA-Mcllvaine 緩沖液使樣品分散，乙腈為提取劑，無水MgSO4為脫水劑、C18和 PSA為凈化劑，四級桿飛行時間串聯質譜（Q-TOF-MS）為檢測手段，可以快速篩查魚肉中的四環素類、磺胺類、喹諾酮類、三苯甲烷類、雄激素、孕激素和糖皮質激素共7類59種藥物，檢出限為0.5～5.3 μg/kg。針對水產品高蛋白、高脂肪的特點，陳國棟等[20]采用QuEChERS和液相-飛行時間質譜聯用的方法檢測蝦肉中的四環素類、磺胺類、喹諾酮類等 13 種抗生素和獸藥，回收率可達58%～133%，檢測限為0.06～7.00 μg/kg。胡紅美等[21]將魚肉樣品經酸乙酯萃取、正己烷初步凈化后，再采用分散固相萃取凈化、硅烷化試劑衍生，氣相色譜ECD檢測，氯霉素與氟苯尼考檢出限分別為0.1、0.3 μg/kg。

5 發展趨勢

QuEChERS方法具有快速、簡單、環保、靈活等優點，已被廣泛應用于水產品中各類殘留物檢測，針對多種不同性質藥物同時測定的方法開發日益受到重視，多類型混合提取方式能夠滿足多種類不同性質藥物同時檢測的要求。向樣品中添加陶瓷均質子，可以更好地打碎結塊，使樣品更加分散，提高提取效率。現在傳統的手工振搖提取已不能滿足大批量樣品檢測的需求，均質提取、振搖與超聲相結合的提取方式能有效提高工作效率，研發半自動或全自動提取儀，將是未來關注的熱點。

6 參考文獻

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