MMT法檢測消瘤湯對胃癌細胞凋亡的影響

文亦磊 黃克強 黃羽

（廣西中醫藥大學第一附屬醫院病理科 廣西 南寧 530023）

消瘤湯是由黨參、半枝蓮、白英等中藥配伍組成的有效抗腫瘤復方制劑，通過其固本培元、解毒利濕、健脾益氣等功效發揮多層次、多方位的調整作用，對腫瘤有較好的治療及輔助治療效果[1]。張莉、逄艷等人的研究顯示[2-3]，消瘤湯能夠通過天然抗腫瘤成分或免疫調節作用直接或間接抑制乳腺癌及肺癌細胞的增殖。本研究使用MTT法觀察消瘤湯促進胃癌細胞株SGC7901凋亡的情況，為后續深入研究其抗腫瘤分子機制和信號通路打下基礎。

1.材料與方法

1.1 藥物

按照1995年國家藥典標準采用黨參、半枝蓮、白花蛇舌草、白英、龍葵等制備消瘤湯（濃度3.5g/ml），實驗前再根據需要將其稀釋調整為10μg/ml（低劑量）、50μg/ml（中劑量）、100μg/ml（高劑量），5℃環境下保存。

1.2 細胞與細胞培養

SGC7901胃癌細胞株購自上海生命科學研究院細胞資源中心。細胞常規培養（1640培養基+37℃+5% CO2），實驗細胞均處于對數生長期。

1.3 主要試劑及設備

MTT（北京華越洋）；胰蛋白酶（北京華越洋）；無錫華衛酶標儀；湘智低溫離心機；無錫一凈超凈工作臺；上海躍進恒溫培養箱。

1.4 實驗方法

取出處于對數期生長的SGC7901細胞，使用胰蛋白酶收集細胞。將收集到的細胞進行濃度調整，調整為1×105個/ml，在3塊96孔板上進行細胞接種，每塊96孔板上都分4組（低劑量組、中劑量組、高劑量組、對照組），每組接種8個孔，每孔接種細胞約1×104個。待細胞貼壁生長后，棄去上清液，其中3個組加入不同濃度的含培養基的消瘤湯：10μg/ml（低劑量組）、50μg/ml（中劑量組）、100μg/ml（高劑量組），第4組對照組只加入培養基。3塊96孔板在相同環境下分別培養24、48、72 h，然后加入20μl MTT溶液(5mg/ml)，再孵育4h，在實驗過程中，通過二甲基亞砜和振蕩器的處理，最后在酶標儀上進行測試570nm的吸光值。胃癌細胞生長抑制率=（對照組平均吸光值-不同濃度組平均吸光值）/對照組平均吸光值×100%。

1.5 統計學分析

本次研究中，針對數據的統計處理，應用SPSS軟件進行統計學分析，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

實驗中可以發現消瘤湯的確具備抑制胃癌細胞增殖、促進其凋亡的作用，這主要是在3個不同濃度的消瘤湯藥物組中，在3個不同的時間段內，消瘤湯都對胃癌細胞產生了一定的抑制作用。其中，消瘤湯在高劑量（100μg/ml）條件下作用72h，對胃癌細胞抑制效果最明顯，P＜0.05，有統計學意義，詳細內容如下分析：

研究中消瘤湯高劑量組、消瘤湯中劑量組、消瘤湯低劑量組以及對照組的培養時間分別為24h，48h，72h，且都是8例數據，通過研究可知：

首先，培養24小時后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.491±0.176，抑制率為5.75%，t值△為0.899，P值△＞0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.513±0.234，抑制率為4.36%，t值△為0.600，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.518±0.196，抑制率為4.04%，t值△為0.605，P值△＞0.05；

對照組吸光度為1.582±0.226；

其次，培養48小時后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.452±0.189，抑制率為9.31%，t值△為1.544，P值△＞0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.471±0.221，抑制率為8.12%，t值△為1.242，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.499±0.236，抑制率為6.34%，t值△為0.939，P值△＞0.05；

對照組吸光度為1.601±0.197；

第三，培養72小時后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.423±0.196，抑制率為11.72%，t值△為2.040，P值△＜0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.459±0.187，抑制率為9.49%，t值△為1.694，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.482±0.213 ，抑制率為8.06%，t值△為1.337，P值△＞0.05；

對照組吸光度為1.612±0.174。

△與對照組比較，72h中的消瘤湯高劑量組的吸光度存在差異性，具備研究意義。

3.討論

消瘤湯由黨參、半枝蓮、白花蛇舌草、白英、龍葵等藥物配伍而成，具有補氣養陰、去毒利濕等功效，之前的一些研究顯示，消瘤湯在乳腺癌、肺癌等腫瘤中能發揮抑制腫瘤細胞增殖、促進凋亡的作用。本研究提示消瘤湯亦能通過其復方藥物中的天然抗腫瘤成分對胃癌SGC7901細胞發揮抑制作用。其中消瘤湯高劑量組在作用72h后，對胃癌細胞的抑制效果最明顯，但消瘤湯是通過何種信號通路和哪些關鍵基因蛋白發揮其促進胃癌細胞凋亡的作用，尚待進一步研究。

[1]丁艷蕊，張喆，劉建國，孫勇，朱銳.消瘤湯對實驗性肝癌大鼠肝臟血管內皮生長因子表達的影響[J].中西醫結合研究，2009，1(3):133-136.

[2]張莉，張仲海，徐勤，楊趕梅，張子理，甘潔文.扶正消瘤湯對乳腺癌患者生存質量及免疫功能影響臨床研究[J].實用中醫藥雜志，2008，24(8)：482-483.

[3]逄艷，趙美蓉，李學軍.消瘤湯降低中晚期非小細胞肺癌化療不良反應的臨床觀察[J].山東中醫雜志，2011，30(6)：383-384.