青蒿素類化合物檢測(cè)分析方法研究進(jìn)展

（中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院 江蘇省中藥評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇 南京 211198）

肖立清 劉吉華（通訊作者）

青蒿素是我國(guó)發(fā)現(xiàn)并被國(guó)際公認(rèn)的天然抗瘧藥物。青蒿素類化合物分子結(jié)構(gòu)中無共軛結(jié)構(gòu)和發(fā)色基團(tuán)，方法學(xué)的開發(fā)有較大困難。本文對(duì)青蒿素類化合物各類檢測(cè)分析方法進(jìn)行了歸納。

1.化學(xué)分析法

青蒿素類化合物均含有過氧橋結(jié)構(gòu)，可以用過氧基的氧化還原性質(zhì)進(jìn)行定量分析（如碘量法）。但是準(zhǔn)確性低，現(xiàn)應(yīng)用較少。

2.光譜法

紅外光譜法廣泛用于青蒿素類原料藥及其制劑的鑒別中，該方法不破壞樣品，操作簡(jiǎn)單。

3.色譜法

色譜法集分離與在線分析于一體，是目前各國(guó)藥典收載最多的方法之一。

3.1 薄層色譜法

薄層色譜法具有成本低、快速、直觀等優(yōu)點(diǎn)，中國(guó)藥典2015年版青蒿素類原料藥和制劑的鑒別方法均收載了薄層色譜法，但其靈敏度、分離能力都不如液相色譜法。

3.2 氣相色譜法

青蒿素類化合物對(duì)熱不穩(wěn)定，在運(yùn)用氣相色譜法測(cè)定時(shí)，一般都是基于青蒿素類化合物的分解產(chǎn)物間接定量，通常以氮?dú)饣蚝庾鳛榱鲃?dòng)相，無須使用有毒的有機(jī)溶劑。

3.3 液相色譜法

3.3.1 與紫外檢測(cè)器聯(lián)用 青蒿素和稀堿反應(yīng)可生成化合物Q292，其在292nm波長(zhǎng)處具有紫外吸收，進(jìn)一步酸化堿液，則生成在260nm波長(zhǎng)處有紫外吸收的化合物Q260。基于以上原理，可建立柱前衍生或柱后衍生-HPLC法檢測(cè)青蒿素類化合物。

3.3.2 與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器響應(yīng)值不依賴樣品的光學(xué)性質(zhì)，不需要柱前或柱后衍生化，對(duì)青蒿素類藥物的檢測(cè)提供了新的手段。

3.3.3 與質(zhì)譜檢測(cè)器聯(lián)用 液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)具有液相色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度、高專屬性，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用。S Ali等[1]綜述了近年來蒿甲醚和雙氫青蒿素在生物樣品中的液相分析方法，與HPLC-UV、HPLC-ECD相比，HPLCMS/MS方法靈敏度與準(zhǔn)確度更高、選擇性更好。

4.電化學(xué)分析法

電化學(xué)分析法，基于物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，具有操作方便、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的特點(diǎn)。梁邵成等[2]制備了經(jīng)單壁碳納米管修飾的裸玻碳電極，可提高分析方法的靈敏度。

5.免疫分析法

免疫分析法不需要經(jīng)過繁瑣的樣品前處理，能快速準(zhǔn)確地測(cè)定樣品。Y Mitsui等[3]制備抗青蒿琥酯多克隆抗體，建立競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫分析法（ELISA），檢測(cè)限可達(dá)0.1ng/mL。

6.其他方法

各種方法的聯(lián)用可以取長(zhǎng)補(bǔ)短，如提高靈敏度。化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫法，其檢測(cè)原理與ELISA相似，經(jīng)過酶和發(fā)光兩級(jí)放大，靈敏度得到了很大的提升。Laura Zehnacker等[4]以化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定血漿中的雙氫青蒿素，最低定量限可達(dá)90 pg/mL。

7.結(jié)論與展望

隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，青蒿素類化合物的檢測(cè)分析方法均得到了進(jìn)一步的提高，但這些方法仍存在不足。伴隨著新型材料的發(fā)展和分子印跡技術(shù)的成熟，研究者制備出可以特異性識(shí)別青蒿素類化合物的分子印跡聚合物[5]，并成功與固相萃取技術(shù)等結(jié)合起來，若再輔以計(jì)算機(jī)軟件，這將展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景[6]。

[1] Ali S, Jafery N,Farhat K,et al.Analysis of Artemether& Dihydroartemisinin by high performance high liquid chromatography in biological fluids-issues & solutions[J].Pak J Pharm Sci, 2017, 30(4):1395-1401.

[2]王輝, 楊培慧, 梁紹成,等.雙氫青蒿素在單壁碳納米管修飾電極的伏安行為與測(cè)定[J]. 藥物分析雜志, 2010(3):431-434.

[3] Mitsui Y. Development of a simple and specific direct competitive ELISA for the determination of artesunate using an anti-artesunate polyclonal antiserum[J]. Tropical Medicine & Health, 2016, 44(1):37.

[4] Zehnacker L,Nevers M C,Sinou V,et al.Development of sensitive direct chemiluminescent enzyme immunoassay for the determination of dihydroartemisinin in plasma[J]. Analytical& Bioanalytical Chemistry, 2015, 407(25):7823-7830.

[5] Zhou J.Sensitive Artemisinin Electrochemical Sensor Based on Polymerized Molecularly Imprinted Membranes[J].International Journal of Electrochemical Science, 2016:3114-3122.

[6] Mar M,Kupka T,Wieczorek P P,et al.Computational modeling of molecularly imprinted polymers as a green approach to the development of novel analytical sorbents[J].trac-trends in analytical chemistry, 2018, (98):64-78.